藥品的無(wú)菌檢查技術(shù)_第1頁(yè)
藥品的無(wú)菌檢查技術(shù)_第2頁(yè)
藥品的無(wú)菌檢查技術(shù)_第3頁(yè)
藥品的無(wú)菌檢查技術(shù)_第4頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

藥品的無(wú)菌檢查技術(shù)第一頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日教學(xué)目標(biāo)1、學(xué)會(huì)直接接種法無(wú)菌檢查的操作。2、懂得無(wú)菌檢查供試品溶液的制備。3、熟知無(wú)菌檢查的結(jié)果判斷。4、學(xué)習(xí)薄膜無(wú)菌檢查法的使用。5、掌握影響無(wú)菌檢驗(yàn)的因素和解決辦法。教學(xué)重點(diǎn):直接接種法無(wú)菌檢查的操作。教學(xué)難點(diǎn):薄膜無(wú)菌檢查法的使用。

第二頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日第五節(jié)

直接接種檢查技術(shù)

藥品無(wú)菌檢查法的具體操作方法可分為直接接種法和薄膜過(guò)濾法?!吨袊?guó)藥典》(2005年版)指出:如供試品性狀允許,應(yīng)優(yōu)先采用薄膜過(guò)濾法。進(jìn)行供試品無(wú)菌檢查時(shí),所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件應(yīng)與驗(yàn)證的方法相同。直接接種法即每支(或瓶)供試品按規(guī)定量分別接種至各含硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基的容器中,除另有規(guī)定外,每個(gè)容器中培養(yǎng)基的用量應(yīng)符合接種的供試品體積不得大于培養(yǎng)基體積的10%,同時(shí),硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基每管裝量不少于15ml,改良馬丁培養(yǎng)基每管裝量不少于10ml。培養(yǎng)基的用量和高度同方法驗(yàn)證;每種培養(yǎng)基接種的管數(shù)同供試品的檢驗(yàn)數(shù)量。第三頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日

由于直接接種法具有操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),特別適宜無(wú)抑菌和防腐作用藥品的無(wú)菌檢查。據(jù)統(tǒng)計(jì),《中國(guó)藥典》(2005年版(二部)共有57種單列品種(占39.3%)采用該法規(guī)定。操作時(shí),用適當(dāng)?shù)南疽簩?duì)供試品容器表面或外包裝采用浸沒或擦試的方法徹底消毒。如果容器內(nèi)有一定的真空度,可用適宜的無(wú)菌器材(如帶有除菌過(guò)濾器的針頭),向供試品容器內(nèi)導(dǎo)入無(wú)菌空氣,再按無(wú)菌操作啟開容器取出內(nèi)容物。無(wú)論使用何種檢查法,其檢查操作過(guò)程均包括供試品的處理及接種與培養(yǎng)及觀察兩大步驟。第四頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日

除另有規(guī)定外,供試品處理按照樣品的不同用以下方法處理與接種。1.混懸液等非澄清水溶液供試品

該類供試品操作最簡(jiǎn)單,取規(guī)定量的供試品直接無(wú)菌操作接種至各管培養(yǎng)基中。2.固體制劑供試品

取規(guī)定量的供試試品,無(wú)菌操作直接接種至各管培養(yǎng)基中;或供試品中加入適宜的溶劑溶解,或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶后,取規(guī)定量無(wú)菌操作接種至各管培養(yǎng)基中。3.β-內(nèi)酰胺類或磺胺類供試品

取規(guī)定量供試品,混合,加入適量的無(wú)菌β-內(nèi)酰胺酶溶液或?qū)Π被郊姿崛芤菏怪泻?,接種至各管培養(yǎng)基中,或直接接入含β-內(nèi)酰胺酶或?qū)Π被郊姿岬母鞴芘囵B(yǎng)基中。4.非水溶性供試品

取規(guī)定量供試品,混合,加入適量的聚山梨酯80或其它適宜的乳化劑及稀釋劑使其乳化,接種至各管培養(yǎng)基中?;蛑苯咏臃N至含聚山梨酯80或其它適宜乳化劑的各管培養(yǎng)基中。

一、供試品的處理及接種第五頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日5.敷料供試品

取規(guī)定數(shù)量,每個(gè)包裝以無(wú)菌操作拆開,于不同部位剪取約100mg或1cm×3cm的供試品;接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。6.腸線、縫合線等供試品腸線、縫合線及其它一次性的醫(yī)用材料按規(guī)定量取最小包裝,無(wú)菌拆開包裝,接種于各管足以浸沒供試品的適量培養(yǎng)基中。7.滅菌醫(yī)用器具供試品

取規(guī)定量,必要時(shí)應(yīng)將其拆散或切成小碎塊,接種于各管足以侵沒供試品的適量培養(yǎng)基中。8.放射性藥品

取供試品1瓶(支),接種于裝量為7.5ml的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基中。每管接種量為0.2ml。第六頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日接種陰性對(duì)照與此同時(shí)另取1支硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基管,加入上述同一容器內(nèi)的供試品稀釋液或0.9%滅菌氯化鈉溶液1ml,作陰性對(duì)照。(作陰性對(duì)照的目的是說(shuō)明未接檢品前的培養(yǎng)基和供試品稀釋液及無(wú)菌檢查操作都是無(wú)菌生長(zhǎng)的,而供試品陽(yáng)性檢出的菌確是來(lái)自檢品。)[如供試品液未經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn),可同步進(jìn)行,方法見第五節(jié)的直接接種法的驗(yàn)證試驗(yàn)]。第七頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日接種陽(yáng)性對(duì)照根據(jù)GMP和《中國(guó)藥典》要求,接種陽(yáng)性對(duì)照應(yīng)在陽(yáng)性對(duì)照室中進(jìn)行,以防交叉污染。接種時(shí)應(yīng)按驗(yàn)證試驗(yàn)的結(jié)果選擇陽(yáng)性對(duì)照菌。方法是:在相應(yīng)的培養(yǎng)基中接入小于100個(gè)cfu的陽(yáng)性對(duì)照菌(菌液的制備和同培養(yǎng)基靈敏度檢查菌液的制備相同)。供試品用量同供試品無(wú)菌檢查每份培養(yǎng)基接種的樣品量(見表6-2、表6-3)相同。陽(yáng)性對(duì)照管培養(yǎng)48~72h應(yīng)生長(zhǎng)良好。第八頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日二、培養(yǎng)及觀察培養(yǎng)基按規(guī)定的溫度培養(yǎng)14d逐日觀察并記錄渾濁新鮮培養(yǎng)基或劃線斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)液涂片,染色,鏡檢判斷是否有菌第九頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日

三、結(jié)果判斷供試品符合規(guī)定培養(yǎng)基管均澄清,或雖顯渾濁但經(jīng)確證無(wú)菌生長(zhǎng)供試品不符合規(guī)定培養(yǎng)基管中任何1管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)除非能充分證明生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。當(dāng)滿足下列至少一個(gè)條件時(shí),判試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效:⑴

對(duì)無(wú)菌檢查試驗(yàn)相關(guān)設(shè)施的微生物監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)表明其不符合規(guī)定。⑵

對(duì)無(wú)菌試驗(yàn)過(guò)程的回顧,揭示了本操作程序是錯(cuò)誤的。⑶

陰性對(duì)照管有菌生長(zhǎng)。⑷

供試品管中生長(zhǎng)的微生物經(jīng)鑒定后,確證微生物生長(zhǎng)是因無(wú)菌試驗(yàn)中所使用的物品和(或)無(wú)菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。試驗(yàn)若經(jīng)確認(rèn)無(wú)效,應(yīng)重試。重試時(shí),重新取同量供試品,依法重試,若無(wú)菌生長(zhǎng),判供試品符合規(guī)定;若有菌生長(zhǎng),判供試品不符合規(guī)定。第十頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日直接接種法圖示無(wú)抗菌作用的供試品抽樣接種于培養(yǎng)基硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基管

培養(yǎng)第十一頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日每天觀察觀察14天報(bào)告澄清無(wú)混濁合格混濁(疑似情況)鏡檢重新培養(yǎng)確證無(wú)菌有菌不合格培養(yǎng)基第十二頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日直接接種法教學(xué)片第十三頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日第六節(jié)

薄膜過(guò)濾法檢查技術(shù)

該法是各國(guó)藥典和《中國(guó)藥典》規(guī)定的第二種無(wú)菌檢查的方法,適用于任何類型藥品的無(wú)菌檢查。具有適用性廣,準(zhǔn)確性強(qiáng)的特點(diǎn)?!吨袊?guó)藥典》(2005年版)規(guī)定:如供試品性狀允許,應(yīng)優(yōu)先采用薄膜過(guò)濾法。據(jù)統(tǒng)計(jì),《中國(guó)藥典》(2005年版二部)共有88種單列規(guī)定品種(占60.7%)規(guī)定采用該法。薄膜過(guò)濾法可采用封閉式薄膜過(guò)濾器(圖6-2)或一般薄膜過(guò)濾器(圖6-3),但應(yīng)優(yōu)先選用封閉式薄膜過(guò)濾器。

第十四頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日待過(guò)濾的液體濾膜接負(fù)壓吸引抽濾機(jī)圖6-4:HTY微孔濾膜孔徑測(cè)定儀

圖:濾膜阻擋的細(xì)菌

第十五頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日

一般新購(gòu)得一批濾膜,因各廠家生產(chǎn)相同規(guī)格的濾膜其質(zhì)量不盡一致,應(yīng)對(duì)濾膜任選以下三種方法中的一種進(jìn)行孔徑大小的測(cè)試,符合規(guī)定的濾膜才能用于無(wú)菌檢查。(一)

氣泡法

其原理是測(cè)濾膜孔徑的大小,可用氣泡壓力方法(圖6-4)測(cè)定。先將濾膜浸入水中,使完全濕潤(rùn),然后用鑷子夾住一片濾膜放于氣泡點(diǎn)測(cè)定裝置上(硬聚氯乙烯氣泡點(diǎn)測(cè)定裝置,上?;S生產(chǎn)DY=25)或?yàn)V膜孔徑測(cè)定儀上,膜上放一塊與濾膜大小相同的尼龍篩網(wǎng),再加上多孔板,將螺旋固定圈旋緊,在多孔板上加3~5mm深的水(注意排除氣泡)關(guān)閉放氣閥,啟動(dòng)空壓機(jī)或氮?dú)忾y,使壓力緩緩上升,注意觀查水面上產(chǎn)生第一個(gè)氣泡時(shí),記錄壓力表的壓力,氣泡點(diǎn)壓力不應(yīng)小于0.2MPa(2.2kg/cm2)。第十六頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日(二)水流量法

其原理是在一定的壓力下,定量的水在單位時(shí)間內(nèi)通過(guò)濾膜的流量與孔徑及孔隙率有關(guān)。將濾膜裝于除菌濾器上,開動(dòng)真空泵,壓力在93KPa(700mmHg)下,抽濾已濾清的水約500ml,計(jì)算出每1mim的濾速?!吨袊?guó)藥典》對(duì)濾膜的濾速未明確規(guī)定,而SP(ⅩⅩⅢ)規(guī)定在93KPa(700mmHg)壓力下,濾膜直徑47mm;流速55~75mm/min。此法操作簡(jiǎn)單,但誤差大。第十七頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日(三)

細(xì)菌過(guò)濾法其原理是利用細(xì)菌細(xì)胞大小穩(wěn)定的特性,可將標(biāo)準(zhǔn)菌株制備的菌液,用待測(cè)濾膜過(guò)濾,其濾液經(jīng)培養(yǎng)無(wú)菌生長(zhǎng),則該濾膜孔徑符合規(guī)定。常用的細(xì)菌為粘質(zhì)沙雷菌(CMCC(B)41002),將該菌的斜面培養(yǎng)物,接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中,30~35C培養(yǎng)18~20h,用0.9%氯化鈉溶液稀釋至10-3(約相當(dāng)于7x105cfu/ml)取此菌液1ml加至50ml0.9%氯化鈉溶液中,按薄膜過(guò)濾法過(guò)濾,取該濾液5ml接種于營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基40ml中,30~35℃培養(yǎng)24h,應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng),而將濾膜加至營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基管中應(yīng)有菌生長(zhǎng),證明該濾膜濾效合格。第十八頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日三、薄膜過(guò)濾法檢查的操作應(yīng)根據(jù)不同供試品而用不同的樣品處理法來(lái)進(jìn)行。應(yīng)優(yōu)先選用封閉式薄膜過(guò)濾器,濾膜孔徑不大于0.45μm,直徑為47mm。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。濾器及濾膜使用前應(yīng)采用適宜的方法滅菌。使用時(shí),應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。水溶性供試液過(guò)濾前先將少量的沖洗液過(guò)濾以潤(rùn)濕濾膜。油類供試品,其濾膜和過(guò)濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率,應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后,若需要用沖洗液沖洗濾膜,每張濾膜每次沖洗量為100ml,且總過(guò)濾量不宜太大,以避免濾膜上的微生物受損傷。下面就不同供試品的處理操作介紹如下:第十九頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日1.水溶液供試品取規(guī)定量,直接過(guò)濾,或混合至含適量稀釋液的無(wú)菌容器內(nèi),混勻,立即過(guò)濾。如供試品具有抑菌作用或含防腐劑,須用適量的沖洗液沖洗濾膜,沖洗次數(shù)不得少于三次。沖洗后,如用封閉式過(guò)濾器,分別將100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基加入相應(yīng)的濾筒內(nèi)。如果僅用薄膜過(guò)濾器,則無(wú)菌操作取出濾膜,將其剪成3等份;分別置于含50ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基容器中,其中1份接種陽(yáng)性對(duì)照值做陽(yáng)性對(duì)照用。第二十頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日2.可溶于水的固體制劑供試品

取規(guī)定量,加適宜的溶劑溶解或按標(biāo)簽說(shuō)明復(fù)溶,然后照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。3.β-內(nèi)酰胺類供試品取規(guī)定量,按水溶液或固體制劑供試品的處理方法處理,立即過(guò)濾,用適宜的沖洗液沖洗濾膜。再用含適量β-內(nèi)酰胺酶的沖洗液清除殘留在濾筒、濾膜上的抗生素后接種培養(yǎng)基,必要時(shí)培養(yǎng)基中可加入少量的β-內(nèi)酰胺酶;或?qū)V膜直接接入含適量β-內(nèi)酰胺酶的培養(yǎng)基中。接種培養(yǎng)基的方法照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。第二十一頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日4.非水溶性制劑供試品取規(guī)定量,直接過(guò)濾;或混合溶于含聚山梨酯80或其它適宜乳化劑的稀釋液中,充分混合,過(guò)濾。用含0.1%~1%聚山梨酯80的沖洗液沖洗濾膜至少三次。濾膜于含或不含聚山梨酯80的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。培養(yǎng)基接種照水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。5.可溶于十四烷酸異丙酯的膏劑和粘性油劑供試品取規(guī)定量,混合至適量的無(wú)菌十四烷酸異丙酯(無(wú)菌十四烷酸異丙酯的制備:采用薄膜過(guò)濾法過(guò)濾除菌。選用孔徑為0.22μm的脂溶性濾膜,并經(jīng)140℃干熱滅菌2h)中,劇烈振搖,使供試品充分溶解,如果需要可適當(dāng)加熱,但溫度不得超過(guò)44℃),趁熱迅速過(guò)濾。若無(wú)法過(guò)濾,應(yīng)加入不少于100ml的稀釋液,充分振搖萃取,靜置,取下層水相作為供試液過(guò)濾。過(guò)濾后濾膜沖洗及培養(yǎng)基接種照非水溶液供試品項(xiàng)下的方法操作。第二十二頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日6.無(wú)菌氣(噴)霧劑供試品取規(guī)定量,將各容器置冰室冷凍約1h。以無(wú)菌操作迅速在溶器上端鉆一小孔,釋放拋射劑后再無(wú)菌開啟容器,然后照水溶性制劑或非水溶性制劑項(xiàng)下的方法操作。

7.裝有藥物的注射器供試品取規(guī)定量,裝上無(wú)菌針頭(非包裝中所配帶的),若需要可吸入稀釋液或標(biāo)簽所示的溶劑溶解,然后照水溶性制劑或非水溶性供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配帶的無(wú)菌針頭的無(wú)菌檢查。第二十三頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日8.具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具(輸血、輸液袋等)供試品取規(guī)定量,每個(gè)最小包狀用50~100ml沖洗液分別沖洗內(nèi)壁,收集沖洗液于無(wú)菌容器中,然后照水溶液供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配帶的針頭的無(wú)菌檢查。四、培養(yǎng)及觀察同直接接種檢查法。五、結(jié)果判斷同直接接種檢查法。第二十四頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日開

過(guò)

作將藥品加入無(wú)菌稀釋劑溶液中無(wú)菌稀釋劑溶劑分3次洗滌濾膜取下濾膜第二十五頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日除去掉上層濾紙將濾膜分成3份加硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基管按規(guī)定溫度和時(shí)間進(jìn)行培養(yǎng)第二十六頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日薄膜過(guò)濾法檢查

教學(xué)片第二十七頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日第七節(jié)

無(wú)菌檢查各種中和(滅活)劑的作用機(jī)理一、硫乙醇酸鹽、半胱氨酸、巰基化合物的作用機(jī)理此類化合物因含有SH基,可以和重金屬結(jié)合,因而能解除或阻止含汞、含砷鹽等重金屬化合物對(duì)細(xì)菌的毒害或抑制作用。此外硫乙醇酸鹽可維持培養(yǎng)基中氧化還原電位,特別是保持培養(yǎng)基下層的厭氧條件,有利于厭氧菌生長(zhǎng)。而半胱氨酸可作為細(xì)菌長(zhǎng)所需的氮源。第二十八頁(yè),共三十頁(yè),2022年,8月28日二、青霉素酶的作用機(jī)理

青霉素酶是目前較理想的青霉素滅活劑,它能通過(guò)破壞青霉素結(jié)構(gòu)中的β—內(nèi)酰胺環(huán)迅速完全而特異地使青霉素滅活。三、

對(duì)氨基苯甲酸的作用機(jī)理磺胺類藥物的分子結(jié)構(gòu)與對(duì)氨基苯甲酸非常相似,因此它可以竟?fàn)幮缘厝〈~酸結(jié)構(gòu)中的對(duì)氨基苯甲酸的地位,導(dǎo)致二氫葉酸合或酶失去作用而使細(xì)菌生長(zhǎng)受阻

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