細(xì)胞免疫功能檢測(cè)平臺(tái)的建立和應(yīng)用演示文稿

細(xì)胞免疫功能檢測(cè)平臺(tái)的建立和應(yīng)用演示文稿當(dāng)前1頁(yè)，總共47頁(yè)。細(xì)胞免疫功能檢測(cè)平臺(tái)的建立和應(yīng)用當(dāng)前2頁(yè)，總共47頁(yè)。T細(xì)胞免疫功能與感染T細(xì)胞免疫功能的抗感染作用正常人的免疫功能T細(xì)胞免疫的抗感染作用T細(xì)胞免疫功能的測(cè)定T細(xì)胞亞群T細(xì)胞功能T細(xì)胞免疫功能測(cè)定的臨床意義當(dāng)前3頁(yè)，總共47頁(yè)。當(dāng)前4頁(yè)，總共47頁(yè)。機(jī)體的免疫系統(tǒng)非特異免疫皮膚粘膜，吞噬細(xì)胞，NK細(xì)胞，補(bǔ)體，正常菌群特異性免疫細(xì)胞免疫：CD4+細(xì)胞，CD8+細(xì)胞體液免疫：B細(xì)胞當(dāng)前5頁(yè)，總共47頁(yè)。機(jī)體的免疫系統(tǒng)CD4細(xì)胞非特異性免疫特異性免疫NK細(xì)胞，吞噬細(xì)胞B細(xì)胞CD8細(xì)胞當(dāng)前6頁(yè)，總共47頁(yè)。CD4+細(xì)胞的免疫中樞指揮功能當(dāng)前7頁(yè)，總共47頁(yè)。CD4+細(xì)胞的免疫中樞指揮功能當(dāng)前8頁(yè)，總共47頁(yè)。CD4+細(xì)胞的產(chǎn)生和分群記憶CD4胸腺純真CD4NetNaiveCD4#5x107/天抗原當(dāng)前9頁(yè)，總共47頁(yè)。純真

純真和記憶/效應(yīng)ＣＤ4細(xì)胞亞群的產(chǎn)生

記憶效應(yīng)凋亡胸腺效應(yīng)效應(yīng)效應(yīng)當(dāng)前10頁(yè)，總共47頁(yè)。純真CD4和記憶CD4細(xì)胞當(dāng)前11頁(yè)，總共47頁(yè)。純真/記憶CD+細(xì)胞分泌不同的介素當(dāng)前12頁(yè)，總共47頁(yè)。細(xì)胞免疫功能的抗感染作用感染發(fā)生的兩個(gè)基本要素：病原體和機(jī)體免疫功能免疫功能對(duì)疾病轉(zhuǎn)歸的影響：對(duì)免疫功能正常的人不起致病作用的病原體，在免疫功能低下的人身上可發(fā)生致命性的感染；免疫功能正常的人發(fā)生某種感染后可很快恢復(fù)，而在免疫功能紊亂的人則成為慢性狀態(tài)；對(duì)同樣的病原體所導(dǎo)致的感染，給予同樣的抗感染治療，轉(zhuǎn)歸完全不一樣當(dāng)前13頁(yè)，總共47頁(yè)。細(xì)胞免疫功能的抗感染作用為什么？？？乙肝病毒感染：有人為乙肝病毒攜帶者,也有人成為慢性乙肝病人？HPV感染：多數(shù)人表現(xiàn)為無(wú)癥狀的HPV潛伏感染者，少數(shù)人表現(xiàn)為復(fù)發(fā)性HPV‘’

CMV感染:90%的正常人隱性感染終生帶病毒，但免疫功能低下時(shí)可致死？當(dāng)前14頁(yè)，總共47頁(yè)。當(dāng)前15頁(yè)，總共47頁(yè)。

HIV感染的自然史

CD4細(xì)胞(cell/mm3）800400

急性感染期

無(wú)癥狀期

艾滋病前期和艾滋病期

CD4

病毒載量抗HIV的CTLHIV抗體當(dāng)前16頁(yè)，總共47頁(yè)。HIV感染者的三種臨床轉(zhuǎn)歸VirusCD4CD8aHIVCD4CD4CD8CD8aHIVVirusVirusStandard8yFast:4-5y:(2%)(CCRgenes, HLAB35…Slow:>10y:(2%),CCRgenes,HLAB57…當(dāng)前17頁(yè)，總共47頁(yè)。免疫功能與機(jī)會(huì)性感染相關(guān)性years200CD4counts白念菌Zona卡波濟(jì)肉瘤淋巴瘤PCP弓型體CMVMAIC48艾滋病期HIVload210當(dāng)前18頁(yè)，總共47頁(yè)。細(xì)胞免疫功能的抗感染作用

—不重視機(jī)體免疫功能的后果化療藥物的濫用耐藥菌的產(chǎn)生二重感染的發(fā)生進(jìn)一步損害免疫功能當(dāng)前19頁(yè)，總共47頁(yè)。細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能的抗感染作用

正常人的免疫功能細(xì)胞免疫的抗感染作用T細(xì)胞免疫功能的測(cè)定

T細(xì)胞亞群T細(xì)胞功能細(xì)胞免疫功能測(cè)定的臨床意義當(dāng)前20頁(yè)，總共47頁(yè)。細(xì)胞免疫功能與感染

—免疫功能測(cè)定方法體內(nèi)：PPD試驗(yàn)？體外：

體液免疫：B細(xì)胞數(shù)量，免疫球蛋白定量

細(xì)胞免疫：T細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能（流式細(xì)胞儀，ELISA，ELISPOT）當(dāng)前21頁(yè)，總共47頁(yè)。T細(xì)胞免疫功能的測(cè)定T細(xì)胞功能（細(xì)胞介素，增殖反應(yīng)）功能亞群（CD28）激活亞群（CD38、HLA-Dr）純真亞群和記憶亞群凋亡亞群,Treg（T細(xì)胞、CD4、CD8、B、NK）當(dāng)前22頁(yè)，總共47頁(yè)。Acytometerlookslikeaneasy-to-usemachine……

butlookinside:It’sacomplexlasermachine!當(dāng)前23頁(yè)，總共47頁(yè)。PMTPMTPMTPMT4DichroicFiltersBandpassFiltersFlowCytometryPrincipleLaser1234Flowcell當(dāng)前24頁(yè)，總共47頁(yè)。T細(xì)胞免疫功能的測(cè)定T細(xì)胞功能（細(xì)胞介素，增殖反應(yīng)）功能亞群（CD28）激活亞群（CD38、HLA-Dr）純真亞群和記憶亞群凋亡亞群,Treg（T細(xì)胞、CD4、CD8、B、NK）當(dāng)前25頁(yè)，總共47頁(yè)。淋巴細(xì)胞免疫表型檢測(cè)指標(biāo)B淋巴細(xì)胞（CD19+）反映機(jī)體體液免疫功能狀態(tài)自然殺傷細(xì)胞（CD3-CD16/56+）反映機(jī)體天然免疫功能狀態(tài)輔助性及殺傷性T淋巴細(xì)胞（CD3+CD4+/CD8+）反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài)T淋巴細(xì)胞純真和記憶亞群（CD4+CD45RA+62L+/CD45RO+）判斷CD3+CD4+降低的重要指標(biāo)T淋巴細(xì)胞的激活亞群（CD4+/CD8+CD38+/HLA-DR+）評(píng)價(jià)細(xì)胞的激活狀態(tài)。T淋巴細(xì)胞的功能亞群（CD4+/CD8+CD28+）衡量T淋巴細(xì)胞功能的重要指標(biāo)。當(dāng)前26頁(yè)，總共47頁(yè)。不同年齡組正常Ｔ細(xì)胞亞群的建立淋巴細(xì)胞表型青年(18-40y,N=57)中年(41-60,N=45)老年(大于61y,N=52)B淋巴細(xì)胞6.4~30.6104~5714.2~19.777~5662.4~24.339~544自然殺傷細(xì)胞4.2~35.696~8723.5~40.453~9854.1~49.871~1340輔助性T淋巴細(xì)胞25.1~64.0442~164519.8~54.0259~194619.6~55.2291~1730殺傷性T淋巴細(xì)胞16.7~47.2321~116615.9~42.3208~8258.2~44.4173~1114T淋巴細(xì)胞純真亞群17.4~61.5117~5865.2~68.540~7162.2~62.725~688CD4/CD80.57~3.280.55~3.300.62~5.97當(dāng)前27頁(yè)，總共47頁(yè)。細(xì)胞免疫功能測(cè)定方法

—T細(xì)胞功能的測(cè)定T細(xì)胞增殖功能同位素H3摻入試驗(yàn)BrdU，Ki67CFSUT細(xì)胞毒試驗(yàn)（CTL）和細(xì)胞介素測(cè)定同位素Cr51四聯(lián)體ELISA流式細(xì)胞儀ELISPOT當(dāng)前28頁(yè)，總共47頁(yè)。ELISPOT方法ELISPOT方法是目前國(guó)際上廣泛應(yīng)用的較新的體外測(cè)定特異性抗體分泌細(xì)胞和細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的方法。該方法可在單細(xì)胞水平檢測(cè)淋巴細(xì)胞對(duì)特異性抗原的反應(yīng)能力及計(jì)數(shù)特異性抗原刺激下細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的頻數(shù)。優(yōu)點(diǎn)：敏感---能檢測(cè)產(chǎn)生細(xì)胞因子頻率極低的細(xì)胞，靈敏度高達(dá)1/1000000。

特異

直觀---可直接在顯微鏡下人工計(jì)數(shù)斑點(diǎn)或通過(guò)ELISPOT分析系統(tǒng)對(duì)斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)，1個(gè)斑點(diǎn)代表1個(gè)特異性抗體分泌細(xì)胞或細(xì)胞因子分泌細(xì)胞。

當(dāng)前29頁(yè)，總共47頁(yè)。ELISPOT原理->PBMC->刺激原孵育16～18h或40～48hIFN抗體BSPA酶和底物斑點(diǎn)!!!當(dāng)前30頁(yè)，總共47頁(yè)。ELISpot結(jié)果陰性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照樣本孔樣本孔圖中的每個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)能分泌IFN-的抗原特異性CD4+T細(xì)胞或CTL當(dāng)前31頁(yè)，總共47頁(yè)。T細(xì)胞免疫功能與感染T細(xì)胞免疫功能的抗感染作用正常人的免疫功能T細(xì)胞免疫的抗感染作用T細(xì)胞免疫功能的測(cè)定T細(xì)胞亞群T細(xì)胞功能T細(xì)胞免疫功能測(cè)定的臨床意義當(dāng)前32頁(yè)，總共47頁(yè)。T細(xì)胞免疫功能與感染

—細(xì)胞免疫功能測(cè)定的臨床意義HIV感染和艾滋病其它各種感染性疾病

--病毒感染：SARS,HBV，HCV，EBV，CMV，HFRS,HFMD --結(jié)核病，真菌感染。腫瘤和化療病人的免疫功能監(jiān)測(cè)器官移植病人的免疫監(jiān)測(cè)自身免疫病和過(guò)敏性疾病當(dāng)前33頁(yè)，總共47頁(yè)。細(xì)胞免疫功能與感染

—細(xì)胞免疫功能測(cè)定的臨床意義中國(guó)HIV/AIDS的免疫病理改變和免疫重建當(dāng)前34頁(yè)，總共47頁(yè)。艾滋病的主要免疫病理改變CD4+T細(xì)胞數(shù)的減少；CD4+T功能的減低;異常的細(xì)胞免疫激活。當(dāng)前35頁(yè)，總共47頁(yè)。

HIV感染的自然史

CD4細(xì)胞(cell/mm3）800400

急性感染期

無(wú)癥狀期

艾滋病前期和艾滋病期

CD4

病毒載量抗HIV的CTLHIV抗體當(dāng)前36頁(yè)，總共47頁(yè)。HIV/AIDS患者淋巴細(xì)胞亞群與正常對(duì)照比較HIV/AIDS患者n=263正常對(duì)照n=57B細(xì)胞計(jì)數(shù)109(159,71)*261(294,207)NK細(xì)胞計(jì)數(shù)110(195,61)*339(471,234)CD4+T計(jì)數(shù)205(348,63)*787(1058,615)純真CD4+T計(jì)數(shù)29(86,6)*328(382,256)純真CD4+T比例18.5(32.0,6.5)*35.4(45.5,30.0)記憶CD4+T計(jì)數(shù)136(232,44)*453(538,360)記憶CD4+T比例72.6(83.2,60.1)*56.0(66.3,47.7)CD4+CD28+功能亞群比例86.1(94.0,68.3)*95.7(97.6,91.0)CD8+T計(jì)數(shù)652(914,422)?538(642,480)CD8+CD38+激活亞群比例84.3(92.7,69.0)*42.6(50.6,36.1)（計(jì)數(shù)：個(gè)/mm3，比例：%，數(shù)值以中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示）*與正常對(duì)照組相比存在顯著差異P<0.001。?與正常對(duì)照組相比存在顯著差異P=0.021。當(dāng)前37頁(yè)，總共47頁(yè)。早中晚3組ＨＩＶ患者淋巴細(xì)胞亞群的比較分組Ⅰ組n=131Ⅱ組n=66Ⅲ組n=66CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)63(134,20)?279(317,246)?493(627,413)病毒載量4.88(5.41,4.46)?4.3(4.71,3.69)?3.49(4.22,2.73)B細(xì)胞計(jì)數(shù)84(118,51)*130(171,91)161(216,123)純真CD4+T比例11.5(25.5,4.7)*26.3(37.4,15)25.4(40.2,14.1)記憶CD4+T比例77.8(88.3,66.7)*67.2(79.1,58)64.9(77.2,54.1)CD4+CD28+T/CD4+T72.7(89.3,52.8)*92.9(95.8,85.1)91.3(94.9,82.7)CD8+CD38+T/CD8+T90.2(94.7,80.1)*78.9(86.7,66.4)69(84.9,61.5)?Ⅰ組與Ⅱ、Ⅲ組相比P<0.001,Ⅱ組與Ⅲ組相比P<0.001。*Ⅰ組與Ⅱ、Ⅲ兩組均存在顯著差異P<0.001,Ⅱ、Ⅲ組兩組無(wú)顯著差異。（計(jì)數(shù)：個(gè)/mm3，比例：%，數(shù)值以中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示）當(dāng)前38頁(yè)，總共47頁(yè)。HIV/AIDS的免疫病理改變

—選擇性純真T4細(xì)胞的減少正常人HIV感染者AIDS病人當(dāng)前39頁(yè)，總共47頁(yè)。HIV/AIDS的免疫病理改變

—T4細(xì)胞輔刺激信號(hào)受體的表達(dá)減少正常人HIV感染者AIDS病人當(dāng)前40頁(yè)，總共47頁(yè)。CD28—T細(xì)胞輔刺激信號(hào)受體當(dāng)前41頁(yè)，