微生物消毒與滅菌

1.滅菌（sterilization）指殺滅物體中所有病原微生物和非病原微生物及其芽胞、霉菌孢子的方法。2.消毒（disinfection）指殺滅物體中的病原微生物的方法。消毒只要求達(dá)到消除傳染性的目的，而對非病原微生物及其芽胞、孢子并不嚴(yán)格要求全部殺死。3.防腐（antisepsis）指阻止或抑制微生物生長繁殖的方法。微生物不一定死亡。4.無菌（asepsis）指沒有活的微生物的狀態(tài)。采取防止或杜絕任何微生物進(jìn)入動物機(jī)體或其它物體的方法，稱為無菌法。以無菌法進(jìn)行的操作稱為無菌操作。1當(dāng)前1頁，總共87頁。第一節(jié)物理消毒滅菌法

2當(dāng)前2頁，總共87頁。物理因素對微生物的影響物理因素溫度輻射干燥超聲波微波濾過除菌高溫低溫3當(dāng)前3頁，總共87頁。一、熱力滅菌法高溫對微生物雖具有明顯的致死作用，但不同種類的微生物對熱的敏感性有明顯的的差異，細(xì)菌繁殖體最為敏感，其次是真菌和病毒，細(xì)菌的芽孢對熱有很強(qiáng)的抵抗力。4當(dāng)前4頁，總共87頁。熱力滅菌的原理——破壞菌體蛋白質(zhì)、核酸和酶系統(tǒng)而致死微生物。熱力使蛋白質(zhì)中的氫鍵破壞使之變性或凝固，使雙股DNA分開為單股，受熱活化的核酸酶使單股的DNA斷裂，導(dǎo)致細(xì)菌死亡影響高溫滅菌的因素：細(xì)菌對高溫的耐受性與細(xì)菌種類、發(fā)育時期、菌體濃度及細(xì)菌所處介質(zhì)有關(guān)。5當(dāng)前5頁，總共87頁。熱力滅菌法分類：干熱滅菌和濕熱滅菌兩種方法。二者比較：在同一溫度下，后者效力比前者為大。原因：（1）濕熱中細(xì)菌菌體蛋白較易凝固；（2）濕熱的穿透力比干熱大；（3）濕熱的蒸汽有潛熱存在。6當(dāng)前6頁，總共87頁。

熱力滅菌法高溫殺滅細(xì)菌焚燒----最徹底的滅菌方法燒灼（火焰滅菌法）----直接用火焰滅菌方法干烤（熱空氣滅菌法、干熱滅菌法）----加熱160-180℃2小時干熱滅菌法紅外線7當(dāng)前7頁，總共87頁。(2)火焰滅菌法:火焰直接燒灼，用于接種環(huán)(針)和試管口或瓶口的滅菌。。(1)焚燒法：用火焚燒，是一種徹底的滅菌方法，僅適用于廢棄的污染物品和有傳染性的動物尸體等。8當(dāng)前8頁，總共87頁。(3)干烤（熱空氣滅菌法、干熱滅菌法）滅菌對象：為玻璃器皿、金屬器械及不宜遇水的油、脂、凡士林等。方法——160℃（160－170℃），1－2h（180℃紙、棉塞就可燒焦）9當(dāng)前9頁，總共87頁。缺點——穿透力差，故需高溫、長時間（繁殖體100℃，1.5h殺滅；芽孢140℃，2h可殺滅）——160－170℃，1－2h可殺死繁殖體和芽孢。①降到室溫（60℃）后再取物品注意事項②溫度不能超過170℃③物品不宜包、放過緊過厚、帖壁10當(dāng)前10頁，總共87頁。電熱干燥箱11當(dāng)前11頁，總共87頁。濕熱滅菌法高壓蒸汽滅菌法最有效的滅菌方法121℃20~30分鐘煮沸消毒法水煮100℃5分鐘(繁殖體)~2小時(芽胞)流通蒸汽消毒法巴氏消毒法間歇蒸汽滅菌法水蒸汽100℃15~30分鐘(繁殖體)反復(fù)多次流動蒸汽間歇加熱滅菌較低的溫度（61℃30分鐘）殺滅致病菌12當(dāng)前12頁，總共87頁。方法：溫度在100℃左右，煮沸10～20min可殺死所有細(xì)菌的繁殖體，芽胞常需煮沸1～2h才被殺死。若在水中加入2-5%酚，則10-15min可殺滅芽胞；若在水中加入1-2%Na2CO3，可提高沸點既可促進(jìn)芽胞的摧毀，亦可防止金屬器械生銹。應(yīng)用：滅菌對象:飲水、玻璃器皿、外科器械(1)煮沸滅菌:13當(dāng)前13頁，總共87頁。煮沸消毒器14當(dāng)前14頁，總共87頁。

(2)巴氏消毒法：以較低溫度殺滅液態(tài)食品中的病原菌或特定微生物，而又不致嚴(yán)重?fù)p害其營養(yǎng)成分和風(fēng)味的消毒方法。

①低溫維持巴氏消毒法63～65℃30min

②高溫瞬時巴氏消毒法71～72℃15s；迅速冷卻10℃以下（冷擊法）

③超高溫巴氏消毒法132℃管道1～2s；迅速冷卻——常溫保存半年。15當(dāng)前15頁，總共87頁。

(3)流通蒸汽消毒法：又叫常壓蒸汽消毒法，用普通蒸籠或阿諾氏（Arnold）流通蒸汽滅菌器，在1個大氣壓下，用100℃左右的水蒸汽，30min，可殺滅繁殖體。不殺芽孢和霉菌的孢子。用于食品、食具及不耐用高溫的物品消毒。如敷料、糖培養(yǎng)基、半乳糖培養(yǎng)基16當(dāng)前16頁，總共87頁。(4)間歇滅菌法（反復(fù)多次流通蒸汽）利用連續(xù)3次的流通蒸汽消毒法，達(dá)到徹底滅菌的目的。即將待滅菌物品放入蒸籠（滅菌器）內(nèi)，加熱（約100℃）15-30min，取出置室溫(或37℃)24h，次日重復(fù)滅菌。連續(xù)3次。用于一些不宜100℃以上溫度滅菌物質(zhì)，以達(dá)到殺滅芽胞的目的。常用于含糖、半乳糖、牛乳、血清等培養(yǎng)基的滅菌。17當(dāng)前17頁，總共87頁。（5）高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌器：15磅（0.105MPa），/平方英寸，121.3℃溫度下維持15～20min。應(yīng)用此法滅菌，一定要充分排除滅菌器內(nèi)原有的冷空氣。用于普通培養(yǎng)基、生理鹽水、耐熱藥品、手術(shù)敷料等。18當(dāng)前18頁，總共87頁。高壓蒸汽滅菌器手提式立式19當(dāng)前19頁，總共87頁。20當(dāng)前20頁，總共87頁。二、輻射滅菌法輻射－－是能量通過空間傳遞的一種物理現(xiàn)象。能量可借波動或粒子高速運(yùn)行而傳播。用于滅菌的輻射可分為兩種。電離輻射－－α、β、γ、x射線及高能中子、質(zhì)子等。非電離輻射－－可見光、日光、紫外線等。輻射的殺菌作用－－隨波長的降低而增強(qiáng)。①紫外、x、γ－－殺菌增強(qiáng)②可見光、紅外線－－作用弱紫宇宙線γx可見紅外無線電波21當(dāng)前21頁，總共87頁。(一）非電離輻射

1.可見光線可見光線是指在紅外線和紫外線之間肉眼可見的光線，其波長400－800nm?？梢姽饩€對微生物一般無多大影響，但長時間作用也能妨礙微生物的新陳代謝與繁殖，故培養(yǎng)細(xì)菌和保存菌種，均應(yīng)置于陰暗之處。光感作用（photosensitization）－－某些染料（結(jié)晶紫、美藍(lán)、伊紅、汞溴紅、沙黃等）加入培養(yǎng)基中，能增強(qiáng)可見光的殺菌作用。光感作用原生動物、細(xì)菌、病毒、噬菌體等均有滅活作用。G＋菌對光感作用比G－菌敏感，美藍(lán)、伊紅、汞溴紅因作用于G＋菌，而沙黃作用于G－菌。22當(dāng)前22頁，總共87頁。2.陽光直射日光有強(qiáng)烈的殺菌作用，日光是天然殺菌因素細(xì)菌日光直射－－30min—數(shù)小時死亡。碳疽芽孢－－直射－－20h死亡影響日光殺菌的因素（煙塵、玻璃、有機(jī)物、空氣中的水分、溫度），日光的殺菌效力因地、因時及微生物所處環(huán)境不同而異。23當(dāng)前23頁，總共87頁。3.紫外線殺菌原理－－波長為100－400nm，以254nm殺菌力最強(qiáng)，短波紫外線燈為253.7nm。①殺菌作用－－細(xì)菌DNA對紫外線的吸收高峰在265－266nm之間，O2O3O–氧化能力強(qiáng)的氧原子--殺菌②誘發(fā)變異－－使DNA分子結(jié)構(gòu)改變而誘發(fā)變異（影響核酸同鏈上的胸腺嘧啶共價鍵結(jié)合形成胸腺嘧啶二聚體，從而干擾了DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄）方法－－紫外線燈－－照射－－殺菌應(yīng)用－－手術(shù)室、病房、無菌室、實驗室消毒（G-、G+）24當(dāng)前24頁，總共87頁。光復(fù)活現(xiàn)象：微生物經(jīng)致死量的紫外線照射后，若在3h內(nèi)在遇到可見光照射，部分微生物可以恢復(fù)其活力，這種現(xiàn)象稱之。影響因素－－時間、強(qiáng)度、距離（一般要求距地面2m，時間1－2h，1W／m2）紫外線作用的特點：①穿透力弱，只能用于房間空氣、物體表面消毒；

②對眼睛角膜和皮膚有損傷作用，工作人員切勿在紫外線燈照射下進(jìn)行操作。

③殺菌效果與照射時間，距離和強(qiáng)度有關(guān)；25當(dāng)前25頁，總共87頁。(二）電離輻射具有較高的能量和穿透能力－產(chǎn)生極強(qiáng)的致死效應(yīng)。

①射線：電離輻射強(qiáng)，穿透力差（缺乏穿透力，不實用）②射線：電離輻射強(qiáng)，穿透力強(qiáng)

③射線：電離輻射弱，穿透力強(qiáng)，僅有抑菌作用和微弱的殺菌作用。④X射線：殺菌力不如紫外線，穿透力強(qiáng)26當(dāng)前26頁，總共87頁。用途：忌熱塑料制品物品（注射器、試管、吸管等）的滅菌消毒、食品保藏和育種等方面殺菌機(jī)制：射線使水電離為H＋和OH－，這些游離基是強(qiáng)烈的還原劑和氧化劑，可直接作用于細(xì)菌本身。27當(dāng)前27頁，總共87頁。（三）紅外線利用紅外線烤箱滅菌，紅外線是波長為0.77-1000μm的電磁波，尤以1-10μm波長的熱效應(yīng)最高。多用于醫(yī)療器械的滅菌28當(dāng)前28頁，總共87頁。（四）微波從幾百兆赫至幾十萬兆赫頻率的無線電波稱為微波。微波滅菌，主要是利用微波的加熱作用完成。滅菌物品放在微波照射的交變電場中時，物品內(nèi)部的分子隨著電場的變化而相應(yīng)的旋轉(zhuǎn)振動起來，電場變化快，分子振動也就跟著快；由于分子間的相互作用力即產(chǎn)生摩擦力，因此分子克服其摩擦力而產(chǎn)生熱量，使整個物品則熱起來，起到了摩擦加熱滅菌的作用。這種滅菌法，所需時間短、加熱均勻是其顯著的優(yōu)點。主要用于陶瓷、耐熱玻璃容器和塑料器皿，金屬器皿忌用。29當(dāng)前29頁，總共87頁。三、超聲波殺菌法頻率在20000～200000Hz聲波稱為超聲波。超聲波雖可使菌體裂解死亡，但往往有殘存者，又因超聲波費(fèi)用頗大，故未應(yīng)用于消毒滅菌。目前主要用于裂解細(xì)胞，提取細(xì)胞組分，研究其抗原、酶類、細(xì)胞壁的化學(xué)性質(zhì)以及從組織內(nèi)提取病毒等。30當(dāng)前30頁，總共87頁。超聲波主要通過四方面的作用達(dá)到殺菌目的：震蕩：使微生物細(xì)胞內(nèi)含物強(qiáng)烈震蕩而被破壞氧化殺菌：因在水溶液中超聲波能產(chǎn)生過氧化氫產(chǎn)生熱效應(yīng)：破壞細(xì)胞的酶系統(tǒng)；空（腔）化作用：即在液體中形成許多真空狀態(tài)的小空腔，空腔崩破產(chǎn)生的巨大壓力使細(xì)胞裂解。31當(dāng)前31頁，總共87頁。四、過濾除菌法濾過除菌:通過機(jī)械阻留作用將液體或空氣中的細(xì)菌等微生物除去的方法。但濾過除菌常不能除去病毒、霉形體以及細(xì)菌L型等小顆粒。應(yīng)用：①細(xì)菌濾器－－不耐熱物品的滅菌（如不耐高溫的營養(yǎng)液、血清、毒素、抗生素、V、酶、維生素等）②空氣除菌－－超凈工作臺；SPF動物的飼養(yǎng)；GMP廠房的潔凈度（四級）32當(dāng)前32頁，總共87頁。33當(dāng)前33頁，總共87頁。濾菌過程34當(dāng)前34頁，總共87頁。35當(dāng)前35頁，總共87頁。五、干燥及低溫抑菌法1.干燥干燥可致微生物死亡干燥－－缺水－－生化反應(yīng)受阻－－新陳代謝障礙－－死亡。甚至引起菌體蛋白質(zhì)變性和由于鹽類濃度的增高而逐漸導(dǎo)致死亡。各種微生物對干燥的耐受性差異很大巴氏桿菌、淋球菌、鼻疽桿菌－－幾天破傷風(fēng)、碳疽芽孢－－幾年、幾十年霉菌孢子－－抵抗力很強(qiáng)應(yīng)用：主要用于菌種和食品的保藏。36當(dāng)前36頁，總共87頁。2.低溫對微生物的影響細(xì)菌對寒冷的抵抗力較強(qiáng)。因此，低溫不能用于滅菌。(1)微生物對低溫有較強(qiáng)的抵抗力：微生物低溫

代謝活動降低，生長繁殖停止，可長期維持生命T升高到適宜

蘇醒——生長繁殖37當(dāng)前37頁，總共87頁。①低溫常用于保存菌種。但是，反復(fù)凍融對微生物不宜。各種細(xì)菌對低溫的抵抗力亦不同。（細(xì)菌、酵母菌、霉菌0－4℃；病毒、某些細(xì)菌－20－－70℃，最好在液氮中（－196℃）可長期保存；但是巴氏桿菌、腦膜炎雙球菌等低溫敏感，低溫比在室溫中死亡更快。）②冷凍保存食品——細(xì)菌生長繁殖停止應(yīng)用38當(dāng)前38頁，總共87頁。（2）冷凍真空干燥法

①方法——低溫（-40℃）——迅速凍結(jié)，抽出空氣，真空狀態(tài)下迅速脫水干燥—可維持生命達(dá)數(shù)年②加保護(hù)劑——脫脂奶粉或不含相應(yīng)抗體的血漿或血清（10－50％）③注意事項——細(xì)菌、真菌不宜長期冰凍保存——尤其是反復(fù)凍融對任何微生物都有很大的破壞力。39當(dāng)前39頁，總共87頁。在低溫狀態(tài)下真空抽去水分用途：保存菌種冷凍真空干燥法：40當(dāng)前40頁，總共87頁。冷凍干燥機(jī)41當(dāng)前41頁，總共87頁。第二節(jié)化學(xué)消毒法防腐消毒劑：許多化學(xué)藥物能夠抑制或殺死微生物，已廣泛用于消毒、防腐，統(tǒng)稱為防腐消毒劑。消毒劑它在殺滅病原微生物的同時，對動物體的組織細(xì)胞也有損害作用。消毒劑（disinfectant）：用于殺滅物體上病原體的化學(xué)藥品防腐劑（antiseptic）：用于抑制微生物生長繁殖的化學(xué)藥品或稱抑菌劑。消毒劑和防腐劑區(qū)別：無嚴(yán)格的界限42當(dāng)前42頁，總共87頁。化學(xué)治療劑：用于消除宿主體內(nèi)病原微生物或其他寄生蟲的化學(xué)藥物稱為化學(xué)治療劑。化學(xué)治療劑對于宿主和病原微生物的作用具有選擇性，它們使其生命活動受到抑制或使其死亡，而對宿主細(xì)胞毒副作用甚小。消毒劑與治療劑的區(qū)別：對宿主組織細(xì)胞的作用。消毒劑特點：在殺滅病原微生物的同時，對肌體的組織細(xì)胞也有損害作用。因此，只用于局部（少數(shù)不被吸收可由于消化道）、器械、環(huán)境。治療劑特點：對宿主和病原微生物作用有選擇性，對宿主細(xì)胞副作用很小?？扇碛盟?3當(dāng)前43頁，總共87頁。一、消毒劑的種類及應(yīng)用44當(dāng)前44頁，總共87頁。(一)常用消毒劑種類

種類繁多－－消毒目的、對象、特點進(jìn)行選擇

酸類消毒劑堿類消毒劑其它消毒劑H+OH--SH醇脫水Hg45當(dāng)前45頁，總共87頁。1、酸類消毒劑無機(jī)酸（三大強(qiáng)酸）：具有腐蝕性。但硼酸腐蝕性較?。⒕σ嗳酰?，常用1-2%硼酸用粘膜消毒。有機(jī)酸：如甲酸，醋酸，乳酸等均有殺菌作用，常用乳酸水蒸氣或溶液殺滅細(xì)菌或病毒。46當(dāng)前46頁，總共87頁。

2、堿類消毒劑堿類消毒劑對所有細(xì)菌及芽胞和病毒都有殺滅作用。尤其常用于病毒的消毒：10-20%石灰乳20-30%草木灰水1-3%NaOH47當(dāng)前47頁，總共87頁。3、其它常用消毒劑0.1%升汞用于非金屬器械消毒0.1%KMnO4和3%H2O2用于粘膜和創(chuàng)傷消毒70－75%乙醇用于體表和體溫表的消毒1－3%碘液用于皮膚、粘膜消毒5－10%碘液可殺滅放線菌48當(dāng)前48頁，總共87頁。0.2－0.5%過氧乙酸用于塑料、玻璃、人造纖維消毒及皮膚消毒。3－5%酚、3-5%來蘇兒用于環(huán)境消毒或空氣消毒。甲醛殺菌力較強(qiáng)，常用于器械消毒。40%甲醛溶液用于烈性傳染病的消毒，4－10%甲醛溶液浸泡30min可殺滅繁殖體及真菌。20%甲醛溶液浸泡6h以上，可殺滅芽胞體。消毒房間：15－25ml福爾馬林/m3加等量水薰蒸或加入KMnO4。要求濕度60－80％；KMnO421g（15）＋甲醛42ml（30），24h。49當(dāng)前49頁，總共87頁。（二）常用的消毒劑使用方法及常用濃度類別作用原理消毒劑名稱方法與濃度酸與堿以H+、OH-的解離作用妨礙菌體代謝，殺菌力與濃度成正比醋酸乳酸燒堿生石灰草木灰5～10ml/m3加等量水蒸發(fā)，空間消毒。蒸汽熏蒸或2%溶液噴霧，用于空氣消毒2%～5%的苛性鈉溶液（60～70℃）消毒廄舍、飼槽、用具、車輛等。用10%乳劑消毒廄舍、運(yùn)動場等。用10%草木灰水煮沸2h，過濾，再加2～4倍水，消毒廄舍、運(yùn)動場等。鹵族元素以氯化作用、氧化作用破壞-SH基，使酶活性受到抑制產(chǎn)生殺菌效果漂白粉碘酊用5%～20%的混懸液消毒畜禽舍、飼槽、車輛等；以0.3～0.4g/kg的劑量消毒飲水。2%～5%的碘酊用于手術(shù)部位、注射部位酚類使菌體蛋白變性或凝固石炭酸3%～5%用于器械、排泄物消毒。50當(dāng)前50頁，總共87頁。（二）常用的消毒劑使用方法及常用濃度續(xù)醇類使菌體蛋白變性沉淀乙醇用70%～75%的乙醇作皮膚消毒，也用于體溫計、器械等消毒。醛類能與菌體蛋白的氨基酸結(jié)合，起到還原作用福爾馬林1%～5%甲醛溶液或福爾馬林氣體熏蒸法消毒畜舍、禽舍、孵化器等用具和皮毛等。重金屬鹽類能與菌體蛋白質(zhì)（酶）的-SH基結(jié)合，使其失去活性；重金屬離子易使菌體蛋白變性升汞硫柳汞0.01%水溶液用于消毒手和皮膚；0.05%～0.1%用于非金屬器皿消毒。0.1%溶液可作皮膚消毒；0.01%適于作生物制品的防腐劑。氧化劑使菌體酶類發(fā)生氧化而失去活性過氧乙酸用3%～10%溶液熏蒸或噴霧，一般按每平方米空間0.25～0.5ml用量，適于畜禽舍空氣消毒。烷化劑能與菌體蛋白發(fā)生烷化環(huán)氧乙烷在密閉條件下，每平方米用700～900mg,消毒24h，適于皮毛、裘皮、電動和光學(xué)儀器及醫(yī)用膠手套等消毒。51當(dāng)前51頁，總共87頁。（二）常用的消毒劑使用方法及常用濃度續(xù)表面活性劑陽離子表面活性劑能改變細(xì)菌胞漿膜的通透性，甚至使其崩解，使菌體內(nèi)的物質(zhì)外滲而產(chǎn)生殺菌作用；或以薄層包圍胞漿膜，干擾其吸收作用新潔爾滅(溴芐烷銨)0.5%的水溶液用于皮膚和手的消毒；0.1%用于玻璃器皿、手術(shù)器械、橡用品的消毒；0.15%～2%用于禽舍空噴霧消毒；0.1%可用于種蛋消毒(40～43℃3min)。度米芬(消毒寧)對污染的表面用0.1%～0.5%噴灑，作用10～60min；浸泡金屬器械可在其中加入0.5%亞硝酸鈉防銹；0.05%溶液用于食品廠、奶牛場的設(shè)備、用具消毒。洗必泰（雙氯苯雙胍乙烷）0.02%水溶液可消毒手；0.05%溶液沖洗創(chuàng)面，也可消毒禽舍、手術(shù)室、用具等；0.1%用于手術(shù)器械的消毒、食品廠器具、設(shè)備的消毒。消毒凈0.05%～0.1%水溶液用于皮膚和手的消毒，也可用于玻璃器皿、手術(shù)器械、橡膠用品等的消毒，一般浸泡10min即可52當(dāng)前52頁，總共87頁。（二）理想消毒劑的條件種類很多，其殺菌作用亦不相同，一般可根據(jù)用途與消毒劑特點選擇使用。最理想的消毒劑應(yīng)是殺菌力強(qiáng)、價格低、無腐蝕性、能長期保存、對動物無毒性或毒性較小、無殘留或?qū)Νh(huán)境無污染的化學(xué)藥物。53當(dāng)前53頁，總共87頁。（三）消毒劑的殺菌機(jī)制復(fù)雜而多樣，根據(jù)對菌體的作用大致可分為:①使菌體蛋白變性、凝固及水解。藥物與菌體蛋白質(zhì)結(jié)合－－變性（金屬離子＋、蛋白質(zhì)－）－－變性或沉淀--（金屬鹽、醇類）與蛋白質(zhì)的氨基酸結(jié)合－－蛋白質(zhì)脫水凝固變形（醛類）使菌體蛋白質(zhì)水解－－中和蛋白質(zhì)電荷--破壞其膠體穩(wěn)定性而沉淀（堿或酸類）改變DNA分子結(jié)構(gòu)－－染料類（結(jié)晶紫）54當(dāng)前54頁，總共87頁。②損傷胞漿膜降低菌細(xì)胞的表面張力，使胞漿膜通透性增加，菌體破裂溶解。表面活性劑和酚（石炭酸、來蘇兒、醇類等脂溶劑）③干擾細(xì)菌的酶系統(tǒng)和代謝（與菌體內(nèi)的酶類結(jié)合，影響細(xì)胞代謝或酶喪失活性）。使酶蛋白中的－SH改變二硫鍵，使酶失去活性－－氧化劑（高錳酸鉀、過氧化氫、碘酊、漂白粉）、金屬鹽類（汞、銀）55當(dāng)前55頁，總共87頁。④改變核酸的功能如：染料龍膽紫可嵌入菌細(xì)胞雙股DNA鄰近堿基對中，改變DNA分子結(jié)構(gòu)，使細(xì)菌生長繁殖受到抑制或死亡。56當(dāng)前56頁，總共87頁。二、影響消毒劑作用的因素消毒劑種類濃度作用時間細(xì)菌菌齡種類環(huán)境有機(jī)物溫度酸堿度57當(dāng)前57頁，總共87頁。（一）影響消毒劑作用的因素1.消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時間2.環(huán)境中的有機(jī)物的存在（對細(xì)菌有保護(hù)作用、與消毒劑發(fā)生反應(yīng)）意義：3.微生物的種類和特性－－廣譜、交替（G+、繁殖體、幼齡菌）清創(chuàng)、清掃－最好的預(yù)防藥物58當(dāng)前58頁，總共87頁。4.溫度與酸堿度的影響溫度：升高18－20℃；石炭酸升高10℃，殺菌效果提高5－8倍PH值：一般為電離的分子較易通過C膜，殺菌效果好。堿性溶液中，陽離子去污劑殺菌力強(qiáng)；酸性溶液中，陰離子去污劑殺菌力強(qiáng)。例如戊二醛本身呈中性，其水溶液呈弱酸性，當(dāng)加入碳酸氫鈉后才發(fā)揮殺菌作用。新潔爾滅的殺菌作用是pH愈低所需殺菌濃度愈高，如在pH3時，其所需殺菌濃度較pH9時要高10倍左右。59當(dāng)前59頁，總共87頁。5.消毒劑的相互頡頏：

陰離子清潔劑肥皂與陽離子清潔劑苯扎溴銨共用6.影響消毒效果的其他因素 還有濕度、穿透力、表面張力及頡抗物質(zhì)等。60當(dāng)前60頁，總共87頁。第三節(jié)抗生素和細(xì)菌素的殺菌作用自然界中各種微生物之間，或是在微生物與高等動植物之間，經(jīng)常呈現(xiàn)相互影響的作用，如寄生、共生和頡抗現(xiàn)象等。導(dǎo)致頡抗的物質(zhì)基礎(chǔ)是抗生素、細(xì)菌素等細(xì)菌的代謝產(chǎn)物。此外植物中也存在殺菌物質(zhì)如黃連素(小蘗堿)，噬菌體則是可殺滅細(xì)菌的活的微生物。61當(dāng)前61頁，總共87頁。1、抗生素(antibiotics)

某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一類能抑制或殺死另一些微生物的物質(zhì)稱為抗生素。主要來源:放線菌(如鏈霉菌)，少數(shù)來源于某些霉菌(如青霉菌等)和細(xì)菌(如多黏菌素)，有些亦能用化學(xué)方法合成或半合成。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)的抗生素達(dá)2500多種，但其大多數(shù)對人和動物有毒性，臨床上最常用的抗生素只有幾十種。62當(dāng)前62頁，總共87頁?？股氐淖饔迷恝僖种萍?xì)菌細(xì)胞壁的合成。如青霉素、頭孢類②影響細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性。多粘菌素、桿菌肽③抑制菌體蛋白質(zhì)的合成。如氯、四、糖苷類④抑制細(xì)菌核酸合成。如灰黃霉素、利福平。63當(dāng)前63頁，總共87頁。64當(dāng)前64頁，總共87頁。藥敏試驗結(jié)果及觀察65當(dāng)前65頁，總共87頁。2.細(xì)菌素（bacteriocin）細(xì)菌素是某種細(xì)菌產(chǎn)生的一種具有殺菌作用的蛋白質(zhì)。只能對同種細(xì)菌不同菌株產(chǎn)生作用。作用：殺菌范圍較窄，有一定的特異性－－只作用于同種菌株的細(xì)菌以及與它相近的細(xì)菌。特點：作用類似抗生素。但不裂解菌體，也不能在菌體內(nèi)繁殖（不同噬菌體）。種類：大腸桿菌素（某些大腸桿菌；志賀氏桿菌）；弧菌素；綠膿桿菌素；葡萄球菌素66當(dāng)前66頁，總共87頁。3.植物殺菌素(phytocidin)植物殺菌素：某些植物中存在有殺菌物質(zhì)，這種殺菌物質(zhì)一般稱植物殺菌素。中草藥：如黃連、黃柏、黃芩、大蒜、金銀花、連翹、魚腥草、穿心蓮、馬齒莧、板藍(lán)根等都含有殺菌物質(zhì)，其中有的已制成注射液或其他制劑的藥品。67當(dāng)前67頁，總共87頁。第四節(jié)獸醫(yī)微生物實驗室的生物安全68當(dāng)前68頁，總共87頁。一、生物安全的概念和一般要求實驗室的生物安全有三層含義：其一主要是指防止病原微生物等及其他有害生物或物質(zhì)傳入實驗室，此種生物安全英文稱“biosecurity”其二主要是指防止病原微生物等傳出實驗室，此種生物安全英文為“biosafety”。其三是指實驗室人員的自身安全防護(hù)，biosecurity及biosafety都包括此義。

69當(dāng)前69頁，總共87頁。

獸醫(yī)微生物實驗室主要從事病原微生物的檢驗及相關(guān)研究，我國政府對必病原微生物實驗室的生物安全頒布了管理條例(中華人民共和國國務(wù)院令第424號，2004)。參驗照國外同行的經(jīng)驗，結(jié)合我國的有關(guān)規(guī)定，獸醫(yī)微生物實驗室的安全要點主要包括以下幾方面:70當(dāng)前70頁，總共87頁。生物安全的潛在危險在于處理臨床樣本，樣本的氣溶膠往往最易污染實驗室并造成人員舍感染。所有送檢樣本都應(yīng)視為有傳染性并做相應(yīng)處理。不允許用嘴吸取液體，應(yīng)采用相應(yīng)器械。涉及有害物質(zhì)的實驗室的人員應(yīng)具備防范生物危害的知識，人員的數(shù)量及流動應(yīng)予控制。實驗室人員必須穿戴全套防護(hù)服，甚至面罩、防護(hù)眼鏡等。這些用品用后應(yīng)做滅菌處理。要有良好的衛(wèi)生習(xí)慣，尤其要注意洗手。實驗室內(nèi)不允許吃、喝、涂抹化妝品及裝隱形眼鏡。實驗室工作人員必須接種有關(guān)疫苗。71當(dāng)前71頁，總共87頁。對所有污染材料及水，包括樣本、試驗器材、動物等必須規(guī)定明確的消毒程序，并予實施。推薦使用含氯5.25%的消毒劑或其他消毒劑。最主要的防護(hù)并非設(shè)施，而是工作人員本身，造成事故的最常見原因主要是由于工作人員缺乏有關(guān)知識、訓(xùn)練和粗心大意。只有經(jīng)培訓(xùn)的人員才能處理動物，操作時動物應(yīng)予麻醉或鎮(zhèn)靜，避免傷害人及動物。實驗室中處理的微生物提取物，特別是DNA，亦可造成污染，必須注意。72當(dāng)前72頁，總共87頁。二、獸醫(yī)微生物實驗室的生物安全分類

凡涉及微生物及其提取物或基因工程產(chǎn)物操作的實驗室，根據(jù)對病原微生物不同種類的生物安全要求，對實驗室的設(shè)計、設(shè)施也有所不同。目前國際公認(rèn)的微生物實驗室分為生物安全(biosafetylevel，BSL)1至4級。其中BSL-1最低，BSL-4最高。73當(dāng)前73頁，總共87頁。BSL-1實驗室可從事已知不會對健康成人造成危害、但對實驗室工作人員和環(huán)境可能有微弱危害的、有明確特征的微生物的實驗工作。實驗室與建筑物中的一般通道不隔開，一般在實驗臺上操作，不要求使用或經(jīng)常使用專用封閉設(shè)備。74當(dāng)前74頁，總共87頁。BSL-2實驗室與BSL-1相似，適用于那些對人及環(huán)境有中度可能危害的微生物實驗工作。不同點:①工作人員要經(jīng)過操作病原因子的專門培訓(xùn)，②由專業(yè)人員進(jìn)行指導(dǎo)和管理;③工作時限制外人進(jìn)入實驗室;某些產(chǎn)生傳染性氣溶膠或濺出物的工作要在生物安全柜或其他封閉設(shè)備內(nèi)進(jìn)行;對污染的銳器采取高度防護(hù)措施。凡從事微生物基因的操作，均需在BSL-2實驗室進(jìn)行。75當(dāng)前75頁，總共87頁。76當(dāng)前76頁，總共87頁。BSL-3實驗室供處理危險病原體使用，適用于可以通過吸人途徑引起嚴(yán)重的或致死性疾病的病原體的實驗工作，例如從事高致病性禽流感、口蹄疫和艾滋病研究或檢測的實驗室。BSL-3實驗室的實驗人員在處理病原體方面要經(jīng)專門培訓(xùn)，并由有關(guān)專家進(jìn)行監(jiān)督管理。傳染性材料的所有操作均要在生物安全柜或其他物理防護(hù)設(shè)施內(nèi)進(jìn)行，工作人員要穿適宜的防護(hù)服和裝備。BSL-3實驗室要經(jīng)過專業(yè)的設(shè)計和建造。77當(dāng)前77頁，總共87頁。BSL-4實驗室有造成氣溶膠感染和危及生命的病原微生物，如埃波拉病毒、尼帕病毒等研究的實驗室，必須達(dá)到BSL-4的安全水平。BSL-4實驗室對防止微生物擴(kuò)散到環(huán)境中有特殊的工程和設(shè)計要求。每一名實驗室工作人員在處理病原微生物方面均要有特殊的和全面的培訓(xùn)；要具有法定資格的科學(xué)家監(jiān)督管理。實驗室主任要嚴(yán)格控制進(jìn)入實驗室的人員。實驗室應(yīng)是獨(dú)立的建筑物或是建筑物內(nèi)的隔離區(qū)。要實施特殊的實驗室安全工作細(xì)則。在此種實驗室的工作區(qū)內(nèi)，所有的工作都要限制在E級生物安全柜內(nèi)或者是安全柜與一套由生命維持系統(tǒng)供氣的正壓個人工作服聯(lián)合使用。78當(dāng)前78頁，總共87頁。三、動物病原微生物的分類

根據(jù)病原微生物的傳染性、感染人和(或)動物的危害程度，世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將動物病原分為1至4類。其中1類動物病原為可導(dǎo)致地方性流行、但不列入官方控制計劃的病原微生物。2類動物病原為外來的或?qū)е碌胤叫粤餍械?、并列入官方控制計劃但實驗室擴(kuò)散風(fēng)險低的致病微生物。3類動物病原為外來的或?qū)е碌胤叫粤餍械?、并列入官方控制計劃的、實驗室釋放有中等危險的病原微生物。4類動物病原為外來的或?qū)е?/p>