一般毒性實驗

一般毒性實驗第1頁/共35頁(二)一般毒性試驗第一節(jié)：急性毒性試驗急性毒性參數(shù)危險性評估慢性毒性試驗毒作用機(jī)制

試驗?zāi)康牡?頁/共35頁(二)一般毒性試驗第一節(jié)：急性毒性試驗經(jīng)口急性毒性試驗：LD50經(jīng)呼吸道靜式吸入式急性毒性試驗：LC50經(jīng)皮膚急性毒性試驗：LD50第3頁/共35頁(二)一般毒性試驗最常用的方法是測定LD50

這又是為什么呢？化學(xué)品LD50，mg/kg乙醇10000氯化鈉4000硫酸亞鐵1500硫酸嗎啡900苯巴比妥鈉150印防己毒素（苦味素）5硫酸士的寧（番木鱉堿）2尼古丁1筒箭毒堿0.5密膽堿0.2河豚毒素

0.1二噁英0.001肉毒桿菌毒素0.00001一些常見化學(xué)物的急性LD50第4頁/共35頁(二)一般毒性試驗死亡率（%）劑量（mg）010203040506070809010001020304050607080901008單位20格64單位20格20格8單位單位/20格決定了敏感性第5頁/共35頁(二)一般毒性試驗死亡率（%）劑量010203040506070809010001020304050607080901008單位64單位8單位LD50死亡率隨劑量變化最敏感的是中段，由此不難理解將半數(shù)致死量作為判定化學(xué)物毒性指標(biāo)的原因。第6頁/共35頁(二)一般毒性試驗

LD50orLC50經(jīng)典急性毒性試驗

曲線擬合法

Bliss法插值法

累積法、改良寇氏法、霍恩法第7頁/共35頁(二)一般毒性試驗LD50的測定方法優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)霍恩法使用動物數(shù)少；計算簡便95%可信限范圍大，精確度不夠改良寇氏法計算簡便，準(zhǔn)確率高確定最低和最高劑量組序貫法節(jié)省動物化學(xué)物引起動物快速死亡Bliss法設(shè)計要求不太嚴(yán)格最精確計算復(fù)雜第8頁/共35頁(二)一般毒性試驗

死亡率呈正態(tài)分布。最小劑量組的死亡率<20%，最大劑量組的死亡率>80%。劑量按等比級數(shù)分組；改良寇氏法適用條件各組動物數(shù)應(yīng)相等；第9頁/共35頁(二)一般毒性試驗觀察時間毒性反應(yīng)觀察染毒途徑與方式劑量與分組選擇實驗動物某化學(xué)物L(fēng)D50的測定第10頁/共35頁(二)一般毒性試驗種屬和品系：年齡和體重：數(shù)量和性別：嚙齒類常用小鼠或大鼠。非嚙齒類常用狗或猴。變異不應(yīng)超過該批平均體重的20％。小鼠：18～22克。大鼠：180-220克。小動物每組10只。雌雄各半。選擇試驗動物第11頁/共35頁(二)一般毒性試驗最大耐受量試驗。最大耐受劑量，WHO規(guī)定經(jīng)口5g/kg。不死亡，不做。死亡，繼續(xù)做。設(shè)定1mg/kg為最低劑量組，4、16、64、128mg/kg預(yù)實驗。無相關(guān)資料有相關(guān)資料了解結(jié)構(gòu)和性質(zhì)相似化學(xué)物的毒性資料，確定預(yù)期毒性中值。以此與其毒性中值作為待測化學(xué)物的中間劑量組，并在該劑量的上下各設(shè)2個劑量組為預(yù)試驗劑量。劑量與分組第12頁/共35頁(二)一般毒性試驗灌胃、喂食、吞咽膠囊靜式吸入、動式吸入經(jīng)皮膚染毒經(jīng)注射染毒定性試驗、定量試驗注射量的規(guī)定

經(jīng)口染毒呼吸道染毒染毒方式第13頁/共35頁(二)一般毒性試驗中毒癥狀死亡情況病理變化

毒性作用觀察第14頁/共35頁(二)一般毒性試驗器官或系統(tǒng)觀察項目中毒后常見的表現(xiàn)皮膚和被毛眼睛植物神經(jīng)系統(tǒng)呼吸系統(tǒng)泌尿生殖系統(tǒng)CNS和神經(jīng)肌肉系統(tǒng)

顏色張力眼瞼眼球角膜瞳孔大小腺體分泌鼻呼吸表現(xiàn)陰戶乳腺陰莖行為運(yùn)動狀態(tài)

對刺激反應(yīng)性

腦脊髓反射肌肉張力皮膚充血紫紺被毛蓬松污穢眼球突出，充血，角膜混濁，血性分泌物散大或縮小流涎流淚鼻孔溢液鼻翼扇動徐緩過速困難衰竭腫脹分泌物增多會陰部污穢脫出體位異常叫聲異?；顒赢惓４襞P少動痙攣抽搐震顫強(qiáng)直麻痹運(yùn)動失調(diào)易興奮感覺遲鈍或過敏反應(yīng)低下或過高減弱或消失松馳或緊張第15頁/共35頁(二)一般毒性試驗一般為14天觀察時間C57Kunming第16頁/共35頁(二)一般毒性試驗

急性毒性分級急性分級大鼠經(jīng)口LD50(mg/kg)6只大鼠吸入4h，死亡2-4只濃度(ppm)兔經(jīng)皮LD50(mg/kg體重)

對人可能致死的估計量g/kg體重g/60kg體重劇毒<1<10<5<0.050.1高毒11050.053中等毒50100440.530低毒50010003505250微毒5000

10000

2180

>15>1000外源化合物的急性毒性分級(WHO，2003)第17頁/共35頁(二)一般毒性試驗第二節(jié)：局部毒性試驗皮膚刺激試驗急性眼刺激試驗第18頁/共35頁(二)一般毒性試驗2.1.急性眼刺激試驗觀察時間：7天，可延長至21天觀察指標(biāo)：結(jié)膜、角膜、虹膜染毒方式：一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)劑量：一次劑量實驗動物：家兔第19頁/共35頁(二)一般毒性試驗2.1.急性眼刺激試驗第20頁/共35頁(二)一般毒性試驗2.2.皮膚刺激試驗觀察時間：不超過14天觀察指標(biāo)：紅斑、水腫染毒方式：涂抹于動物皮膚上劑量：一次或多次劑量實驗動物：家兔、豚鼠第21頁/共35頁(二)一般毒性試驗2.2.皮膚刺激試驗第22頁/共35頁(二)一般毒性試驗第三節(jié)：亞慢性和慢性毒性試驗亞慢性毒性：實驗動物或人連續(xù)較長期（約相當(dāng)于生命周期的1/10）接觸外源化學(xué)物所產(chǎn)生的中毒效應(yīng)。概念第23頁/共35頁(二)一般毒性試驗第三節(jié)：亞慢性和慢性毒性試驗慢性毒性：實驗動物或人長期接觸外源化學(xué)物所引起的中毒效應(yīng)。長期對嚙齒類動物至少12個月，也可終身染毒。概念第24頁/共35頁(二)一般毒性試驗A毒性效應(yīng)譜、毒作用特點(diǎn)、靶器官B毒作用機(jī)制、毒作用可逆性C劑量-反應(yīng)關(guān)系D毒效應(yīng)差異，確定安全系數(shù)，結(jié)果外推至人亞慢性和慢性毒性試驗主要目的第25頁/共35頁(二)一般毒性試驗

（一）實驗動物選擇

亞慢性毒性試驗

年齡：大鼠50~100g狗4~6月

數(shù)量：小動物≥20大動物≤8

性別：雌雄各半

慢性毒性試驗?zāi)挲g：大鼠50~70g

狗<4月

小鼠初斷乳數(shù)量：小動物≥40大動物≥8性別：雌雄各半研究方法第26頁/共35頁(二)一般毒性試驗染毒期限3－6個月預(yù)期壽命6個月－1年6個月－1年食品毒理學(xué)環(huán)境毒理學(xué)致癌試驗工業(yè)毒理學(xué)（二）染毒期限第27頁/共35頁(二)一般毒性試驗經(jīng)口:鼠常用灌胃、喂飼法。犬用膠囊法。經(jīng)呼吸道：持續(xù)4h。注射染毒：腹腔注射。（三）實驗動物染毒方式第28頁/共35頁(二)一般毒性試驗（四）劑量選擇和分組亞慢性毒性的劑量選擇陰性對照組低劑量組中劑量組高劑量組

急性毒性的閾劑量

1/20~1/5LD50

組距：2~4倍慢性毒性的劑量選擇陰性對照組低劑量組中劑量組高劑量組

亞慢性閾劑量或其1/5~1/21/10LD50

組距：2~10倍第29頁/共35頁(二)一般毒性試驗一般觀察：外觀體征、行為活動、體重、攝食眼部檢查血生化指標(biāo)尿常規(guī)檢查體溫、心電圖檢查病理檢查：大體解剖、組織病理學(xué)特