平板劃線試驗(yàn)

平板劃線試驗(yàn)第一頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日相關(guān)基礎(chǔ)理論－－細(xì)菌的培養(yǎng)一般細(xì)菌均可用人工方法進(jìn)行培養(yǎng)，使其生長(zhǎng)繁殖，以便進(jìn)一步觀察和研究他們的各種生物學(xué)特征。為了獲得良好的細(xì)菌培養(yǎng)物，在分離培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)，除采用適宜的培養(yǎng)基，并考慮到其他的培養(yǎng)條件之外，掌握各種分離培養(yǎng)和接種的基本技術(shù)，也是重要環(huán)節(jié)。

第二頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日培養(yǎng)基

在土壤、水、食品、空氣以及人和動(dòng)、植物中，不同種類(lèi)的細(xì)菌混雜地生活在一起。若要研究其中某種細(xì)菌，就必須將各種細(xì)菌進(jìn)行分離，以得到只含有這一種細(xì)菌的純培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)菌分離成純種后，常需要接種到有關(guān)的培養(yǎng)基中，以測(cè)試其各種生物學(xué)性狀，不同的細(xì)菌需要不同的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

第三頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日一、培養(yǎng)基培養(yǎng)基按其物理性狀，分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基按用途，分基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。第四頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日二、細(xì)菌的接種方法將混合的細(xì)菌分離的方法有多種，平板劃線法即是其中之一，該方法主要是借劃線而將混雜的細(xì)菌在瓊脂平板表面分散開(kāi)，是單個(gè)細(xì)菌能固定在某一點(diǎn)，生長(zhǎng)繁殖后形成單個(gè)的菌落以達(dá)到分離純種的目的。當(dāng)細(xì)菌分離成純種后，一般還可用斜面、液體和半固體培養(yǎng)基來(lái)檢驗(yàn)細(xì)菌的培養(yǎng)特征，因此接種方法可相應(yīng)的分為四種。第五頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日常見(jiàn)的幾種細(xì)菌的培養(yǎng)和基接種方法舉例

平板劃線接種法斜面培養(yǎng)基接種法液體培養(yǎng)基接種法穿刺接種法菌種葡萄球菌和大腸桿菌的混合菌液大腸桿菌培養(yǎng)物大腸桿菌培養(yǎng)物枯草桿菌培養(yǎng)物變形桿菌培養(yǎng)物痢疾桿菌培養(yǎng)物培養(yǎng)基普通瓊脂平板瓊脂斜面培養(yǎng)基普通肉湯培養(yǎng)基半固體瓊脂培養(yǎng)基第六頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日平板劃線接種法

常用于分離單個(gè)菌落，也可用于觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)狀況和觀察某些生化反應(yīng)。第七頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日平板劃線接種法——接種方法（1）標(biāo)記在培養(yǎng)皿底面，用記號(hào)筆注明接種的菌名、接種者姓名、日期等。

第八頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日4、平板劃線接種法

（2）滅菌接種環(huán)點(diǎn)燃酒精燈，右手以持筆式握持接種環(huán)，并放置火焰中燒灼滅菌，先將接種環(huán)的接種絲部分置于火焰中，待金屬絲燒紅并蔓延至金屬端，再直接燒灼金屬環(huán)直至燒紅，然后由金屬環(huán)至金屬桿方向快速通過(guò)火焰，隨后再反方向通過(guò)火焰，如此2~3次。然后將接種環(huán)移開(kāi)火焰，待其冷卻。第九頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日4、平板劃線接種法

圖2-4滅菌接種環(huán)第十頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日平板劃線接種法

（3）取菌種左手持裝有金黃色葡萄球菌或大腸桿菌菌液的試管，用持有接種環(huán)的右手手掌及小指拔取試管塞，將試管管口迅速通過(guò)火焰2~3次進(jìn)行滅菌。將已滅菌且已冷卻的接種環(huán)伸入菌種管中，取一接種環(huán)的菌液，然后退出菌種管，將菌種管管口再次通過(guò)火焰2~3次滅菌，塞好試管塞，放至原來(lái)的位置。第十一頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日平板劃線接種法

（4）分離劃線接種細(xì)菌（四區(qū)接種法）①左手持瓊脂平板培養(yǎng)基（將皿蓋反放在桌上酒精燈附近），盡量使之直立以免空氣中的細(xì)菌落入其中，并靠近火焰。右手持接種環(huán)在瓊脂平板上端來(lái)回劃線，涂成一細(xì)菌薄膜（約占平板的1/10），視為一區(qū)。劃線時(shí)使接種環(huán)與接種平板面呈30~40度角，以腕力在平板表面行輕而快地來(lái)回滑動(dòng)動(dòng)作。②旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，燒灼接種環(huán)，以殺滅環(huán)上的殘留細(xì)菌，將接種環(huán)觸及培養(yǎng)基表面以使其冷卻。滅菌接種環(huán)通過(guò)薄膜處作連續(xù)平行劃線（約占平板1/5），此視為二區(qū)。第十二頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日平板劃線接種法

③旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，灼燒接種環(huán)滅菌并使之冷卻。將滅菌接種環(huán)接二區(qū)連續(xù)平行劃線（約占平板1/4），此為三區(qū)。④旋轉(zhuǎn)瓊脂平板90度，接種環(huán)不必再滅菌，接三區(qū)連續(xù)平行劃線，劃滿平板其余部分，此視為四區(qū)。各區(qū)接種線間盡量互不交接，以達(dá)到細(xì)菌逐漸稀釋的目的。

第十三頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日平板劃線接種法

四區(qū)劃線第十四頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日平板劃線接種法第十五頁(yè)，共十八頁(yè)，2022年，8月28日平板劃線接種法

（5）劃線完畢，將瓊脂平板放進(jìn)皿蓋，將培養(yǎng)皿倒放，送進(jìn)37℃溫箱培養(yǎng)。（6）培養(yǎng)18~24h后將培養(yǎng)皿取出。觀察瓊脂平板表面生長(zhǎng)的