藥物的安全性評價試驗方法2課件

全身用藥的毒理研究第一節(jié)新藥急性毒性試驗急性毒性：24h內(nèi)單次或多次大劑量給予某種藥物所出現(xiàn)的有害作用。急性毒性試驗

毒性反應(yīng)類型定性出現(xiàn)和消失時間可能的靶器官和死亡原因致死量定量最大給藥量半數(shù)致死量急性毒性試驗的目的和意義：1、測定藥物的半數(shù)致死量及相關(guān)參數(shù)2、通過觀察藥物急性中毒癥狀，推測藥物的毒性靶器官3、為長期毒性試驗和特殊毒性試驗提供劑量設(shè)計參考6、觀察指標(biāo)：中毒癥狀、LD50中毒癥狀：被毛，行為學(xué)變化，情緒，神經(jīng)癥狀（震顫、痙攣、抽搐、步態(tài)不穩(wěn)等），呼吸頻率，肛門周圍有無污染，眼、鼻、口有無分泌物，體溫，體重變化等剖檢檢查：各臟器的變化等。組織切片急毒試驗常見觀察指針及可能涉及的組織、器官、系統(tǒng)LD50測定的缺陷：1、動物消耗量大，獲得的信息有限2、影響因素較多，數(shù)據(jù)重復(fù)性較差3、從安全性評價角度來看，需要的不是精確的LD50值，而是更多的毒性信息（三）最大耐受量試驗單次給藥引起動物出現(xiàn)明顯的中毒反應(yīng)而未發(fā)生死亡的劑量。多用于毒性較小的藥物研究試驗方法：1、動物：小鼠、大鼠、犬等2、動物數(shù)：小動物10~20只；大動物4~6只（雌雄各半）3、給藥途徑：臨床給藥途徑4、試驗對照：5、觀察時間：7~14天大體解剖

如有改變——組織切片6、結(jié)果與評價：描述動物單次大劑量給藥或在24h內(nèi)接受多次大劑量給藥后，在短期內(nèi)出現(xiàn)的與藥物相關(guān)的毒性反應(yīng)，發(fā)生、發(fā)展過程提供不引起動物死亡的最大劑量。（四）固定劑量試驗不以死亡作為觀察終點，而是以明顯的毒性體征作為重點進行藥物的急性毒性評價。試驗方法：選5、50、500、2000mg/kg四個固定劑量進行試驗動物：大鼠預(yù)試：500mg/kg正式試驗：根據(jù)預(yù)試結(jié)果，從四個固定劑量中選擇一個可能產(chǎn)生明顯毒性，但不引起死亡的劑量進行試驗。觀察指標(biāo)：同半數(shù)致死量試驗。（五）近似致死劑量試驗1、估計可能的毒性范圍2、按50%遞增法，設(shè)計出含10~20個劑量組3、測出最低致死劑量和最高非致死劑量后，用二者之間的劑量（即近似致死劑量）給一只動物三、LD50計算方法Bliss法加權(quán)概率單位法寇氏法改良寇氏法LD50=㏒-1[Xm–i(∑P–0.5)]Xm：最大劑量的對數(shù)值

i：相鄰兩組劑量對數(shù)值之差

P：各組動物死亡率，用小數(shù)表示（如死亡率為80％應(yīng)寫成0.80）

∑P：各組動物死亡率之總和第二節(jié)新藥長期毒性試驗長期毒性：試驗動物連續(xù)多次接觸較大劑量的藥物所引起的中毒效應(yīng)。長期毒性試驗：為觀察藥物的長期毒性而設(shè)計的毒理學(xué)試驗。又被稱為重復(fù)給藥毒性試驗。一、一般原則1、試驗動物：二種（嚙齒類和非嚙齒類）動物數(shù)量、性別、年齡、敏感性2、給藥期限：一般為臨床療程的3~4倍時間創(chuàng)新藥品試驗周期不少于90天3、劑量選擇：高中低三個組高劑量組：能充分反映藥物的毒性，但不能造成太多動物死亡。低劑量組：無毒。4、給藥方法：最好與臨床給藥途徑一致5、觀察途徑：日常觀察（生長率、食耗、一般觀察等）測定指標(biāo)：器官重量、血液學(xué)變化、血液生化學(xué)指標(biāo)二、檢測項目1、日常觀察：一般指標(biāo)：被毛、皮膚、眼睛、呼吸、行為活動、病理檢查等。生長率食耗2、測定指標(biāo)血液學(xué)指標(biāo)（紅細胞、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、白細胞總數(shù)級分類、血小板等）

血液生化指標(biāo)（天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶、

丙氨酸氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶、堿性磷酸酶、尿酸氮

、總蛋白、白蛋白、血糖、

總膽紅素、肌酐、

總膽固醇）

器官重量四、結(jié)果評價1、試驗結(jié)果數(shù)據(jù)應(yīng)進行統(tǒng)計學(xué)處理2、根據(jù)實驗?zāi)康?，結(jié)合觀察到的毒性表現(xiàn)作出恰當(dāng)?shù)脑u價3、通過實驗結(jié)果確定毒性靶器官和毒性表現(xiàn)4、可結(jié)合其他試驗同時觀察第三節(jié)制劑的全身毒性試驗一、靜脈注射制劑的全身毒性試驗1、血管刺激性試驗?zāi)康模河^察受試靜脈注射制劑經(jīng)多次給藥后對血管刺激反應(yīng)情況。試驗方法：動物：家兔分組：試驗組、空白對照組給藥方法：多次靜脈注射觀察指標(biāo)：肉眼觀察病理切片2、體外溶血試驗?zāi)康模河^察靜脈注射劑是否能引起溶血現(xiàn)象。試驗方法：（1）制備2%紅細胞懸液（2）加樣（3）保溫（4）結(jié)果觀察全溶血：溶液澄明，紅色，管底無紅細胞殘留部分溶血：溶液澄明，紅色或棕色，管底有少量紅細胞殘留不溶血：紅細胞全部下沉，上層液體無色透明。鏡檢紅細胞不凝集。熱源：微生物產(chǎn)生的能引起人及恒溫動物體溫異常升高的物質(zhì)，主要是革蘭氏陰性菌細胞壁分離出來的內(nèi)毒素。4、熱原試驗?zāi)康模簩⑹茉囁庫o脈注射給予家兔，觀察家兔體溫升高情況，以判定藥物是否具有致熱作用。試驗方法：動物：家兔給藥方法：耳緣靜脈注射觀察指標(biāo)：體溫2、心血管系統(tǒng)常用動物：大鼠、犬、貓等觀察指標(biāo)：血壓、心率、心電、血流動力學(xué)變化等3、呼吸系統(tǒng)常用動物：犬、貓等大動物觀察指標(biāo)：呼吸頻率、呼吸深度、呼吸類型等。局部用藥的毒性試驗是根據(jù)局部用藥部位的解剖和生理特點設(shè)計的。

涂劑、擦劑皮膚用藥膏劑、凝膠劑

其他透皮吸收制劑常用局部用藥制劑滴眼劑、滴鼻劑噴霧劑、肌內(nèi)注射直腸和陰道制劑第十九章局部用藥的毒性研究第一節(jié)皮膚用藥的毒性試驗一、皮膚的組織結(jié)構(gòu)皮膚由表皮、真皮及皮下組織等構(gòu)成皮膚覆蓋全身。表皮較薄，厚為0.1-0.2mm。角質(zhì)層表皮顆粒層生發(fā)層真皮依附于皮下組織，厚約2mm。膠原真皮彈性硬蛋白纖維母細胞二、化學(xué)物質(zhì)對皮膚毒性作用的類型（一）皮膚原發(fā)性刺激指藥物直接作用于皮膚引起的病理學(xué)反應(yīng)。原發(fā)性刺激的表現(xiàn)：紅斑、水腫、水皰疹、潰瘍、蕁麻疹等作用機理：1、直接刺激作用2、使皮膚表面蛋白質(zhì)變性藥物：強酸、強堿、強氧化劑、重金屬等（二）皮膚致敏作用機理：變態(tài)反應(yīng)藥物：抗生素、非甾體類抗炎藥、局麻藥、消毒藥等（三）皮膚致癌三、皮膚用藥毒性試驗（一）急性毒性試驗1、試驗?zāi)康模河^察動物完整皮膚及破損皮膚短期內(nèi)接觸受試藥物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。2、試驗材料（1）動物：成年健康家兔、豚鼠、大鼠（2）藥物制劑：膏劑、液體制劑、粉末3、試驗方法（1）劑量：3個劑量組（2）給藥途徑：將藥物均勻涂布于動物背部皮膚（經(jīng)脫毛處理）（3）觀察指標(biāo)：全身反應(yīng)、死亡情況、各系統(tǒng)變化、剖檢變化（二）皮膚用藥長期毒性試驗1、試驗?zāi)康模河^察動物皮膚長期接觸受試藥物，經(jīng)皮膚滲透或吸收后對機體產(chǎn)生的異常反應(yīng)及其可逆程度。2、試驗材料（1）動物：成年健康家兔、豚鼠、小鼠（2）受試藥物：膏劑、液體制劑、粉末3、試驗方法（1）劑量：3個劑量組（2）給藥途徑：將藥物均勻涂布于動物背部脫毛區(qū)，每日一次，每次至少接觸6小時（3）觀察指標(biāo)：全身反應(yīng)第二節(jié)眼睛用藥刺激性試驗1、試驗?zāi)康模河^察動物眼睛接觸受試藥物產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。2、試驗材料（1）動物：成年健康家兔（2）受試藥物：原液或原3、試驗方法（1）試驗分組：1個劑量組，1個對照組（2）給藥方案：將藥物滴入或涂敷于動物一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)作為對照。（3）觀察指標(biāo)：6、24、48、72h、7d觀察眼部反應(yīng)情況（具體觀察評分方式見書177頁）第三節(jié)肌肉注射用藥局部刺激性試驗試驗?zāi)康模河^察藥物肌內(nèi)注射后是否具有局部刺激作用試驗方法（略）第四節(jié)滴鼻劑和吸入劑急性毒性試驗1、試驗?zāi)康模河^察受試藥物一次滴入或吸入后對動物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)或死亡情況。2、試驗材料：（1）動物：大鼠、豚鼠或家兔（2）藥物：液體或粉末制劑3、試驗方法：（1）試驗分組：3個劑量組（2）給藥途徑：滴入或吸入（3）觀察指標(biāo)：全身狀況、體重、呼吸、循環(huán)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等變化。滴鼻劑和吸入劑刺激試驗1、試驗?zāi)康模河^察藥物一次或多次滴入或吸入后動物產(chǎn)生的刺激反應(yīng)。2、試驗材料（1）動物：大鼠、豚鼠或家兔（2）藥物：液體或粉末制劑3、試驗方法（1）試驗分組：3個劑量組（2）給藥