儀器分析經(jīng)典液相色譜法

關(guān)于儀器分析經(jīng)典液相色譜法第一頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日1.液相色譜法的類型1.1按分離原理不同分類：吸附色譜法：利用被分離組分對(duì)固定相表面吸附中心吸附能力的差別而實(shí)現(xiàn)分離的。分配色譜法：利用被分離組分在固定相與流動(dòng)相中的分配系數(shù)的差別而實(shí)現(xiàn)分離的。離子交換色譜法：不同離子與固定相相反電荷間的作用力大小不同。體積排阻色譜法：固定相孔徑不同，把樣品組分按分子大小分開(kāi)。第二頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日1.液相色譜法的類型柱色譜法：固定相裝在管柱內(nèi)的色譜法平面色譜法：（1）紙色譜法（2）薄層色譜法1.2按操作形式不同分類：1.3按分離效能不同分類：經(jīng)典液相色譜法、現(xiàn)代液相色譜法第三頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相2.1吸附色譜法的固定相和流動(dòng)相(1)基本原理吸附色譜法是基于吸附效應(yīng)的色譜法，以固體吸附劑為固定相，以液體為流動(dòng)相。吸附色譜是最早出現(xiàn)的，也是最基本的一種色譜類型。第四頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相色譜分離物質(zhì)的依據(jù)是吸附劑表面與溶質(zhì)分子中官能團(tuán)的吸附與解吸的相互作用，是溶質(zhì)分子和容積分子對(duì)固定相的競(jìng)爭(zhēng)吸附的結(jié)果。第五頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相(2)固定相吸附色譜的固定相種類較多，按化合物的性質(zhì)可分為有機(jī)吸附劑和無(wú)機(jī)吸附劑。有機(jī)吸附劑包括活性炭、淀粉、聚糖、聚酰胺、大孔吸附樹(shù)脂等。無(wú)機(jī)吸附劑包括氧化鋁、硅膠、氧化鎂、碳酸鈣、硅藻土等。第六頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相①對(duì)樣品組分和洗脫劑都不會(huì)發(fā)生任何化學(xué)反應(yīng)，在洗脫劑中也不會(huì)溶解。②對(duì)待分離組分能夠進(jìn)行可逆的吸附，同時(shí)具有足夠的吸附力，使組分在固定相與流動(dòng)相之間能最快地達(dá)到平衡。③顆粒形狀均勻，大小適當(dāng)，以保證洗脫劑能夠以一定的流速通過(guò)色譜柱。④材料易得，價(jià)格便宜而且是無(wú)色的，以便于觀察。1）對(duì)吸附劑的要求第七頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相硅膠為極性吸附劑，表面主要存在著硅羥基（硅醇基）和暴露于表面的Si-O-Si鍵，另外還有一些硅醇基可能與水以氫鍵鍵合。硅羥基的表面濃度在吸附色譜中很重要，因?yàn)槿藗兺ǔＵJ(rèn)為硅羥基是強(qiáng)吸附位點(diǎn)，而Si-O-Si則是疏水性的。自由型硅醇基硅氧烷型①硅膠（SiO2·H2O）2）常用無(wú)機(jī)吸附劑第八頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日結(jié)構(gòu)：

內(nèi)部——硅氧交聯(lián)結(jié)構(gòu)→多孔結(jié)構(gòu)表面——有硅醇基→氫鍵作用→吸附活性中心表面硅醇基存在形式：SiOH2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相第九頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相吸附特性：易吸水→失活

活化：鋪好的硅膠板自然晾干后，在烘箱中于→105～110℃烘干0.5~1h(可逆失水)→吸附力最大高溫：→500℃烘干(不可逆失水)→活性喪失，無(wú)吸附力與極性物質(zhì)形成氫鍵物質(zhì)極性↑，吸附能力↑，K↑，tR↑適用：分析酸性或中性物質(zhì)第十頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相干燥表面物理吸附水第十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相堿性氧化鋁

pH9～10

適于分析堿性、中性物質(zhì)中性氧化鋁

pH＞7.5

適于分析酸性堿性和中性物質(zhì)酸性氧化鋁

pH4～5

適于分析酸性、中性物質(zhì)氧化鋁一般是由氫氧化鋁脫水制得，根據(jù)制備時(shí)pH值的不同，分為：氧化鋁的活性與其含水量相關(guān)。②氧化鋁第十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相氧化鋁適宜分離溶于有機(jī)溶劑的極性、弱極性的非強(qiáng)離解型的化合物，尤其適合于分離芳香族化合物。當(dāng)樣品為堿性化合物時(shí)，用硅膠分離會(huì)造成嚴(yán)重吸附，此時(shí)可選用氧化鋁進(jìn)行分離，但酸性易離解的化合物容易在氧化鋁上形成死吸附。氧化鋁分離幾何異構(gòu)體能力優(yōu)于硅膠。第十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相硅膠及氧化鋁為良好的干燥劑。水的含量對(duì)該類吸附劑的活度有很大的影響，即使有極微量的水吸附在其表面上，也會(huì)使吸附劑活性大大降低。第十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相硅膠和氧化鋁的含水量與活度的關(guān)系活性級(jí)越大，含水量越多，吸附能力越小，活性越小活性≠活度吸附能力吸水量第十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相為高分子聚合物質(zhì)，不溶于水、甲醇、乙醇等常用有機(jī)溶劑，對(duì)堿較穩(wěn)定，對(duì)酸穩(wěn)定性較差，可溶于濃鹽酸、冰醋酸及甲酸。①聚酰胺3）常用有機(jī)吸附劑第十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相聚酰胺對(duì)有機(jī)物質(zhì)的吸附屬于氫鍵吸附，通過(guò)分子中的酰胺羰基與酚類，或酰胺鍵上的游離氨基與醌類、脂肪羧酸上的羰基形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附。吸附的強(qiáng)弱則取決與各種化合物與之形成氫鍵締合的能力。第十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日聚酰胺的吸附原理如圖：分離原理：吸附強(qiáng)弱取決于：化合物與聚酰胺形成氫鍵的能力。2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相第十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日①形成氫鍵的基團(tuán)越多，則吸附力越強(qiáng)；聚酰胺對(duì)化合物的吸附力在水中有下列規(guī)律：2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相第十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日②易形成分子內(nèi)氫鍵，則吸附力減弱；2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相第二十頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日③芳香核、共軛雙鍵多者吸附力大；>2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相第二十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相聚酰胺“雙重色譜”原理正相色譜非極性固定相（非極性脂肪鏈）含水溶劑（甲醇-水，極性大）苷（極性大）（柱色譜分離）苷元<苷極性固定相（極性酰胺基團(tuán)）有機(jī)溶劑（氯仿-甲醇，極性小）游離黃酮（苷元，極性小）苷元>苷聚酰胺：洗脫劑：先洗脫：Rf值：反相色譜④聚酰胺柱色譜屬于雙重色譜：當(dāng)流動(dòng)相為水-醇系統(tǒng)時(shí)，其為反相色譜；當(dāng)流動(dòng)相為氯仿-甲醇系統(tǒng)時(shí)，其為正相色譜。第二十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相又稱全多孔樹(shù)脂，因其具多孔性結(jié)構(gòu)而具篩選性，又通過(guò)表面吸附、表面電性或形成氫鍵而具吸附性。利用其對(duì)不同成分的選擇性吸附和篩選作用，通過(guò)選用適宜的吸附和解吸條件借以分離、提純某一或某一類有機(jī)化合物的技術(shù)。②大孔吸附樹(shù)脂主要用于水溶性化合物的分離及純化，如皂苷、其它苷類物質(zhì)等。第二十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相各組分與流動(dòng)相分子爭(zhēng)奪吸附劑表面活性中心，利用吸附劑表面的活性吸附中心對(duì)不同組分的吸附能力差異而實(shí)現(xiàn)分離。常用吸附劑：多孔、微粒狀物質(zhì)吸附能力大小取決于吸附中心的多少和吸附中心與被吸附組分形成氫鍵能力的大小。硅膠氧化鋁聚酰胺(3)吸附色譜的條件選擇色譜條件的選擇依據(jù)被測(cè)組分、吸附劑和流動(dòng)相的性質(zhì)?！獦O性第二十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相1）被分離組分的結(jié)構(gòu)性質(zhì)（極性大?。┡袛辔镔|(zhì)極性大小的規(guī)律：①基本母核相同，分子中基團(tuán)的極性越強(qiáng)，整個(gè)分子的極性也越強(qiáng)。②分子中雙鍵越多，吸附能力越增，共軛雙鍵多吸附力亦增大。③化合物基團(tuán)的空間排列對(duì)吸附性也有影響。如能形成分子內(nèi)氫鍵的要比不能形成分子內(nèi)氫鍵的相應(yīng)化合物的極性要弱，吸附能力也弱。第二十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相2）吸附劑和流動(dòng)相的選擇吸附劑的活性：吸附劑的活性↑大，對(duì)被測(cè)組分的吸附能力↑強(qiáng)強(qiáng)極性物質(zhì)——選擇弱吸附劑弱極性物質(zhì)——選擇強(qiáng)吸附劑流動(dòng)相的極性：流動(dòng)相極性↑大，對(duì)被測(cè)組分的洗脫能力↑大

“相似相溶”原則：根據(jù)組分性質(zhì)、吸附劑的活性，選擇適當(dāng)極性的流動(dòng)相常用的流動(dòng)相極性遞增的次序是：石油醚＜環(huán)已烷＜四氯化碳＜苯＜乙醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水。第二十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相必須同時(shí)兼顧被測(cè)物的性質(zhì)、吸附劑的活性和流動(dòng)相的極性等三方面。一般原則是：若被分離組分極性較小，宜選用吸附活性較大的吸附劑和極性較小的洗脫液；反之，則應(yīng)選擇吸附活性小的吸附劑和極性較強(qiáng)的洗脫液。3）選擇方法第二十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相被測(cè)物質(zhì)的極性、吸附劑活性和流動(dòng)相極性之間的關(guān)系示意圖

第二十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相吸附色譜中使用的流動(dòng)相為各種有機(jī)溶劑，主要為非極性的烴類（如己烷、庚烷），某些有機(jī)溶劑（如二氟甲烷、甲醇、三乙胺等）作為緩和劑加入其中以調(diào)節(jié)流動(dòng)相的溶劑強(qiáng)度、極性及pH值，即進(jìn)行所謂正相色譜。流動(dòng)相溶劑極性越大，洗脫能力越強(qiáng)，溶質(zhì)保留越??；流動(dòng)相溶劑極性越小，洗脫能力越弱，溶質(zhì)保留越大。第二十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相2.2分配色譜的固定相和流動(dòng)相分配色譜法，基于樣品組分在固定液和流動(dòng)相之間分配系數(shù)不同而分離的色譜法。(1)基本原理流動(dòng)相和固定相均為液體，作為固定相的液體是涂在很細(xì)的惰性載體上。第三十頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相分配色譜的固定相為涂漬在載體上的固定液。涂漬了固定液的載體第三十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相正相分配色譜：流動(dòng)相的極性小于固定相的極性，適用于極性化合物的分離。反相分配色譜：流動(dòng)相的極性大于固定相的極性，適用于非極性化合物的分離。為了防止色譜過(guò)程中兩相的混溶，流動(dòng)相與固定相的極性必須不同。第三十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相(2)固定液正相色譜法：采用極性固定相(如水、甲醇、甲酰胺等)

反相色譜法：一般用非極性固定相(如硅油、液體石蠟)(3)載體原則上，所有多孔性的吸附材料均可作為固定液的載體。一般常用硅膠、硅藻土、纖維素等。結(jié)構(gòu)類型主要采用多孔層微珠及全多孔微粒型二種。第三十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相流動(dòng)相一般采用與固定液性質(zhì)相差很大的不混溶的溶劑為流動(dòng)相，流動(dòng)相對(duì)固定相的溶解度盡可能小，因此固定液和流動(dòng)相的性質(zhì)往往處于兩個(gè)極端。(4)流動(dòng)相第三十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相正相色譜法：相對(duì)非極性的疏水性溶劑，常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物，極性小的組分先洗出。反相色譜法：水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物，極性大的組分先洗出。第三十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相2.3離子交換色譜法的固定相和流動(dòng)相(1)基本原理帶電基團(tuán)通過(guò)靜電相互作用與帶相反電荷的離子結(jié)合。如果流動(dòng)相中存在其他帶相反電荷的離子，按照質(zhì)量作用定律，這些離子將與結(jié)合在固定相上的反離子進(jìn)行交換。第三十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相離子交換樹(shù)脂是具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的復(fù)雜的有機(jī)高分子聚合物。網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的骨架部分一段很穩(wěn)定，不溶于酸、堿和一般溶劑。在網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的骨架上有許多可被交換的活性基團(tuán)。根據(jù)活性基團(tuán)的不同、離子交換樹(shù)脂可分為陽(yáng)離子交換樹(shù)脂和陰離子交換樹(shù)脂兩大類。第三十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相陽(yáng)離子交換劑：強(qiáng)酸型和弱酸型

可電離的基團(tuán)磺酸基（-SO3H）磷酸基（-PO3H2）羧酸基（-COOH）酚羥基（-OH）陰離子交換劑：強(qiáng)堿型和弱堿型

可電離的基團(tuán)伯胺基（-NH2）仲胺基（-NHCH3

）叔胺基（-N(CH3)2）季胺基（-N+(CH3)3）(2)離子交換劑的分類第三十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相(3)離子交換樹(shù)脂的性質(zhì)重量交聯(lián)度：樹(shù)脂中所合交聯(lián)劑的百分率。

樹(shù)脂的交聯(lián)度越大，則網(wǎng)眼越小，交換時(shí)體積大的離子進(jìn)入樹(shù)脂便受到限制。但提高了交換的選擇性；另外，交聯(lián)度大時(shí)，形成的樹(shù)脂結(jié)構(gòu)緊密，機(jī)械強(qiáng)度高。但是如果交聯(lián)度過(guò)大則對(duì)水的膨脹性能差，交換反應(yīng)的速度慢，因此要求樹(shù)脂的交聯(lián)度一般為8-12％。1)離子交換樹(shù)脂的特性二乙烯苯第三十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相交換容量：離子交換樹(shù)脂的交換容量表示其可交換離子量的多少。

其表示單位有以下兩種：一是質(zhì)量表示法，即單位質(zhì)量離子交換樹(shù)脂吸著能力，通常用mmol/g表示；另一種是體積表示法，即單位體積離子交換樹(shù)脂的吸著能力，通常用mmol/mL表示。

在表示交換容量時(shí)，應(yīng)把交換樹(shù)脂上可交換離子的形態(tài)闡述清楚，因?yàn)殡x子交換樹(shù)脂形態(tài)不同，其質(zhì)量和體積也不相同。第四十頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相溶脹：干樹(shù)脂在水溶液中吸水后造成體積膨脹的程度。溶脹的程度取決于交聯(lián)度的高低，交聯(lián)度高，溶脹?。唤宦?lián)度低，溶脹大。粒度：樹(shù)脂顆粒大小，一般是以溶脹狀態(tài)所能通過(guò)的篩孔來(lái)表示。第四十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相2)影響選擇性系數(shù)的因素

樹(shù)脂選擇性是指離子交換樹(shù)脂對(duì)不同離子親和力強(qiáng)弱的反應(yīng)。影響離子交換樹(shù)脂選擇性的因素：離子的水化半徑：離子在水溶液中通常發(fā)生水化作用，離子在水溶液中的實(shí)際大小以水化半徑來(lái)表征。水化半徑越小的離子越易被交換。離子的化合價(jià)：離子的化合價(jià)越高，其與樹(shù)脂的親和力越強(qiáng)，越易被樹(shù)脂交換。第四十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相(4)離子交換色譜的流動(dòng)相①調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH，使目的物粒子在此pH下失去電荷，甚至帶相反電荷，從而喪失與原離子交換樹(shù)脂的結(jié)合力。②用高濃度的同性離子根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)作用的大小，將目的物離子取代下來(lái)。第四十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相2.4空間排阻色譜法根據(jù)流動(dòng)相的不同，可分為：

凝膠滲透色譜：有機(jī)流動(dòng)相

凝膠過(guò)濾色譜：無(wú)機(jī)流動(dòng)相(1)基本原理空間排阻色譜也稱凝膠色譜、分子排阻色譜等。第四十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相軟質(zhì)凝膠：如葡聚糖。因其不耐壓（0.1MPa左右即被壓壞），只能用于低壓凝膠層析。半剛性凝膠：如聚苯乙烯凝膠。能耐較高壓力，具有可壓縮性、能填充緊密、柱效高。但在有機(jī)溶劑中的溶脹性會(huì)導(dǎo)致孔徑發(fā)生變化。剛性凝膠：如多孔硅膠和多孔玻璃珠。在有機(jī)溶劑中不溶脹、孔尺寸固定。但不易裝填緊密、裝柱時(shí)易碎，以柱效較低。對(duì)蛋白質(zhì)有吸附；不能在強(qiáng)酸性和強(qiáng)堿性條件使用。(2)固定相第四十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相常用凝膠有：葡聚糖凝膠G、聚丙烯酰胺凝膠、瓊脂糖凝膠、聚苯乙烯凝膠、葡聚糖凝膠LH-20、無(wú)機(jī)凝膠等。第四十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相(3)凝膠和流動(dòng)相的選擇凝膠的選擇：①親水性高，表面惰性，即介質(zhì)與溶質(zhì)之間不發(fā)生任何化學(xué)或物理相互作用；②穩(wěn)定性強(qiáng)，在較寬的pH和離子強(qiáng)度范圍以及化學(xué)試劑中保持穩(wěn)定，使用壽命長(zhǎng)；③顆粒大小均勻，具有一定的孔徑分布范圍；④機(jī)械強(qiáng)度高，允許較高的操作壓力。第四十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相功能組別分離（脫鹽）：分離大小兩類不同的分子即無(wú)機(jī)鹽與生物大分子；分級(jí)分離：將分子大小相近的物質(zhì)分開(kāi)，通常為大分子間的分離。大分子物質(zhì)中除去小分子物質(zhì)時(shí)，選用交聯(lián)度大的型號(hào)；小分子物質(zhì)與大分子物質(zhì)分離，選擇交聯(lián)度小的型號(hào)。第四十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日2.液相色譜的固定相和流動(dòng)相(4)流動(dòng)相一般水溶性試樣選擇水溶液為流動(dòng)相，而非水溶性試樣則選擇四氫呋喃、氯仿、甲苯等有機(jī)溶劑為流動(dòng)相。第四十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.經(jīng)典液相柱色譜法硅膠吸附柱色譜是較為常用的經(jīng)典液-固吸附色譜，可用于分離極性至弱極性的化合物。3.1硅膠吸附柱色譜使用時(shí)，一般需經(jīng)過(guò)色譜柱制備、加樣、洗脫和檢出四個(gè)基本步驟。第五十頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.經(jīng)典液相柱色譜法第五十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.經(jīng)典液相柱色譜法3.2聚酰胺柱色譜預(yù)處理含有殘留原料及溶劑，需水洗，丙酮、乙醇回流。干燥后研磨成細(xì)粉。裝柱一般采用濕法裝柱。上樣洗滌和洗脫第五十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.經(jīng)典液相柱色譜法3.3離子交換柱色譜樹(shù)脂溶脹用水浸泡直至上層液透明。裝柱一般采用濕法裝柱。樹(shù)脂處理與再生離子交換樹(shù)脂通常使用酸、堿進(jìn)行處理，可采用1~2

mol/L的鹽酸及氫氧化鈉溶液，以4~6倍樹(shù)脂床體積交替進(jìn)行處理，可獲得最佳效果。在酸及堿處理之間須用去離子水洗至中性。上樣洗滌和洗脫第五十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日3.經(jīng)典液相柱色譜法3.4凝膠柱色譜凝膠溶脹用溶劑浸泡入10倍的溶劑中。裝柱濕法裝柱。平衡加洗脫劑平衡。上樣洗脫第五十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法定性參數(shù)——比移值Rf，相對(duì)比移值(Rr)相平衡參數(shù)——K、k’分離參數(shù)——分離度R4.1技術(shù)參數(shù)第五十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法1）比移值(Rf)、相對(duì)比移值(Rr)比移值(Rf值)溶質(zhì)移動(dòng)距離與展開(kāi)劑移動(dòng)距離之比

Rf=L/L0L為原點(diǎn)至斑點(diǎn)中心的距離L0為原點(diǎn)至溶劑前沿的距離與組分及色譜條件有關(guān)L0原點(diǎn)溶劑前沿ABL1L2Rf的測(cè)量示意圖Rf=0組分留在原點(diǎn)Rf=1

組分隨溶劑前沿一起移動(dòng)Rf可用范圍是0.2～0.8，最佳范圍是0.3～0.5。

第五十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法相對(duì)比移值（Rr值）

Rr可以大于1，也可以小于1。第五十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法例：已知被測(cè)物質(zhì)A和參考物B在同一薄層板上進(jìn)行色譜分析，展開(kāi)后，溶劑前沿到原點(diǎn)的距離為18cm，A、B兩物質(zhì)斑點(diǎn)中心到原點(diǎn)的距離分別為12cm和9cm，請(qǐng)計(jì)算：（1）A物質(zhì)的比移值。（2）A、B兩物質(zhì)的相對(duì)比移值。第五十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法2）相平衡參數(shù)（）分配系數(shù)K=Cs/Cm

容量因子

k’=

CsVs/CmVmK、k’與Rf值的關(guān)系：在色譜條件確定的情況下，Rf只與組分性質(zhì)有關(guān)，是薄層色譜基本定性參數(shù)，說(shuō)明組分的色譜保留行為，K或k’大Rf小，K或k’小Rf大。第五十九頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法3）分離參數(shù)L2、L1——原點(diǎn)至兩斑點(diǎn)中心的距離d——兩斑點(diǎn)中心間的距離W1、W2——兩色譜峰寬

分離度（R）

兩相鄰斑點(diǎn)中心距離與兩斑點(diǎn)平均寬度（縱向直徑）的比值。第六十頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法例：在薄層板上分離A、B兩組分的混合物，當(dāng)原點(diǎn)至溶劑前沿距離為16.0cm時(shí)，兩斑點(diǎn)質(zhì)量重心至原點(diǎn)的距離分別為6.9cm和5.6cm，斑點(diǎn)直徑分別為0.83cm和0.57cm。求兩組分的分離度及Rf值。解：第六十一頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法4.2薄層色譜法（TLC）將固定相均勻涂鋪在具有光潔表面的玻璃、塑料或金屬板上形成薄層板，將一定量混合樣品溶液置于薄層板一端確定位置(點(diǎn)樣)，在密閉容器中用適當(dāng)?shù)娜軇?展開(kāi)劑)展開(kāi)后，根據(jù)組分在板上的位置和濃度進(jìn)行分析的方法第六十二頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法(1)常用吸附劑硅膠：薄層用的硅膠粒度更細(xì)，一般在200~300。目最常用的硅膠G、硅膠GF254、硅膠H、硅膠HF254。氧化鋁：氧化鋁H、氧化鋁G和氧化鋁HF254。

按制造方法不同，可分為堿性氧化鋁、酸性氧化鋁和中性氧化鋁。第六十三頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法(2)展開(kāi)劑及其選擇選擇展開(kāi)劑，要依據(jù)溶劑極性和他們的混溶性，溶劑對(duì)被分析物的溶解性，以及被分析物的結(jié)構(gòu)。第六十四頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法展開(kāi)劑的選擇條件：①對(duì)的所需成分有良好的溶解性；②可使成分間分開(kāi)；③待測(cè)組分的Rf在0.2~0.8之間，定量測(cè)定在0.3～0.5之間；④不與待測(cè)組分或吸附劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)；⑤沸點(diǎn)適中，黏度較?。虎拚归_(kāi)后組分斑點(diǎn)圓且集中；⑦混合溶劑最好用新鮮配制。第六十五頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法(3)薄層色譜實(shí)驗(yàn)技術(shù)1）制板2）點(diǎn)樣3）展開(kāi)4）顯色活化時(shí)注意控制溫度將吸附劑調(diào)成均勻糊狀防止拖尾原點(diǎn)小而圓防止邊緣效應(yīng)一般采用上行法第六十六頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日4.平面色譜法第六十七頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日雙向PC第I向醇性展開(kāi)劑第II向水性展開(kāi)劑（BAW、TBA、水飽和正丁醇）（2~8%HAc、3%NaCl、1%HCl）

正相色譜

反相色譜固定相（水）極性>流動(dòng)相

Rf規(guī)律：極性小的化合物Rf大極性大的化合物Rf大苷元（0.7以上）>單糖苷>雙糖苷（0.7以下）苷元中，平面型分子>非平面型分子Rf規(guī)律與左邊相反母核相同，2-OH>3-OH>4-OH>5-OH黃酮苷元的分離鑒別黃酮苷及花色素類第六十八頁(yè)，共七十六頁(yè)，編輯于2023年，星期日第一相展開(kāi)采用醇性展開(kāi)劑如:BAWn-BuOH:HOAc:H2O=4:1:5上層

TBAt-BuOH:HOAc:H2O=3:1:1

水飽和