染色體標(biāo)本制作與觀察實驗報告教案

山東大學(xué)試驗報告

2023531日姓名 班級13 級生命基地班 學(xué)號 同組者科目 細(xì)胞生物學(xué)試驗

染色體標(biāo)本制作與觀察【】染色體標(biāo)本制作與觀察【】1、把握小鼠睪丸細(xì)胞染色體標(biāo)本的根本制作過程和 Giemsa染色法，生疏各操作步驟的原理。2、生疏常用試驗動物染色體的數(shù)目及特色。3、生疏不一樣生物染色體的特色，學(xué)會做染色體組型圖?！尽科餍担猴@微鏡、載玻片、蓋玻片、鑷子、手術(shù)剪、解剖盤、膠頭滴管、離心管、離心計、小燒杯、冰箱、酒精燈、小燒杯等資料：小鼠試劑：蒸餾水、0.9%NaCl溶液、0.3%KCl溶液，固定液〔甲醇：冰醋酸=3:1〕、秋水仙素【】一、制作染色體標(biāo)本的先決條件細(xì)胞擁有旺盛的分裂力量：選擇活潑的組織，如胸腺、骨髓、睪丸、小腸；或施加藥物使想法獲得大批的分裂中期細(xì)胞：利用秋水仙素二、染色體染色體是基因的載體。真核細(xì)胞染色體的數(shù)目和構(gòu)造是重要的遺傳特征之一。制備染色體標(biāo)本是細(xì)胞學(xué)最根本的技術(shù)之一，優(yōu)秀的染色體系片是進展染色體顯帶、組型剖析、原位雜交等的先決條件。染色體的制備在原則上能夠從全部發(fā)生有絲分裂的組織和細(xì)胞懸浮液中獲得。最常用的門路是從骨髓細(xì)胞、血淋巴細(xì)胞、、和組織培育的細(xì)胞中制備染色體。本試驗承受的方法是第1頁共7頁 細(xì)胞生物學(xué)試驗報告1/7山東大學(xué)試驗報告

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染色體標(biāo)本制作與觀察從小鼠的睪丸細(xì)胞中獲得。染色體的形態(tài)構(gòu)造在細(xì)胞增殖周期中是不停的運動變化的，一般在有絲分裂中期，染色體形態(tài)最典型、最易辨識和劃分。所以，制備染色體標(biāo)本獲得的是中期細(xì)胞。染色體特色：數(shù)目、長度〔確定長度、相對長度〕、著絲粒地點〔M/SM/ST/T)、隨體與次縊痕的數(shù)目大小和地點、帶型剖析描繪染色體的四個參數(shù)：①相對長度=〔每條染色體的長度〕單倍常染色體之和+X染色體〕*100，相對長度能夠用來表示每條染色體的長度。=〔長臂的長度〕)，臂指數(shù)能夠用來確立臂的長度。③著絲粒指數(shù)置。④染色體臂數(shù)〔NF〕，依據(jù)著絲粒的地點來確立。三、操作原理小型動物的染色體系片最好最有效的資料就是骨髓組織〔由于分裂活動旺盛，睪丸也可〕利用睪丸細(xì)胞的制片技術(shù)固然需要離心以及認(rèn)真的操作，但根本程序其實不簡單。在小鼠睪丸中，細(xì)胞有絲分裂和減數(shù)分裂比較旺盛，所以不需要體外培育就能夠直接獲得分裂中期細(xì)胞。經(jīng)過小鼠睪丸獲得染色體比較簡易，一般不需要無菌操作。用秋水仙素作為有絲分裂的抑制劑，將其注入到小鼠腹腔中，能夠阻擋分裂細(xì)胞紡錘體的形成。由于小鼠睪丸細(xì)胞分裂活動旺盛，擁有高度的分裂力量，本次試驗經(jīng)過前辦理、低滲、固定、制片染色等步驟制得染色體標(biāo)本，可觀察到很多處于分裂中期的染色體，能夠進展染色體組型剖析。Giemsa染色法的染色結(jié)果：細(xì)胞核染成紫紅色、細(xì)胞質(zhì)和核仁染成藍(lán)紫色四、制作染色體標(biāo)本的意義生疏染色體的特色〔形態(tài)、大小、數(shù)目〕——繪制染色體組型圖染色體組型：把真核動物一個體細(xì)胞各染色體按長度、 外形、著絲粒地點擺列成必定次序。染色體核型：某一物種獨有的一組或一套染色體的形態(tài)特色。第2頁共7頁

細(xì)胞生物學(xué)試驗報告2/7山東大學(xué)試驗報告

2023531日姓名 班級13 級生命基地班 學(xué)號 同組者科目 細(xì)胞生物學(xué)試驗

染色體標(biāo)本制作與觀察染色體組型圖的應(yīng)用①鑒識生物種類：兔44條；小鼠40條；大鼠42條；雞78條；貓38條；狗78條；馬64②遺傳病的診療和爭論：三體綜合征〔含三條 21號染色體〕、卵巢退化癥〔含45條染色體，比正常人缺乏一條性染色體〕、睪丸退化癥〔含 正常人多一條X或Y染色體〕等。所以，我們能夠給孕婦抽取羊水檢查器胎兒的染色體，做遺傳病初期診療。染色體標(biāo)本的制作PHA：促細(xì)胞分裂，使淋巴細(xì)胞返幼，變成淋巴母細(xì)胞秋水仙素：損壞微管裝置，使紡錘體不行以形成，大批細(xì)胞停頓在分裂中期低滲作用：水進入細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)容空間變大，染色體間距拉大，易于分別開空氣枯燥：使細(xì)胞和染色體睜開固定：用的組蛋白來講，變性后硬度增加，保持了染色體的即時形態(tài)，對細(xì)胞膜蛋白來講，變性使細(xì)胞膜硬度加強。形成屏障作用，防范了細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外溢和丟掉。視線中染色體可能是20或40條左右，由于細(xì)胞可能處于減數(shù)第一次分裂和減數(shù)其次期分裂期間。【試驗步驟】一、小白鼠染色體標(biāo)本制作步驟(1〕取雄性小鼠，以每克體重4ug注射秋水仙素，14-16h后，用斷頭法處死小鼠，取出睪丸用生理鹽水〔0.9%NaCl溶液〕洗去血污。將睪丸放入裝有1mL0.3%KCl溶液的小燒杯中剪碎至液體呈乳白色。用銅網(wǎng)過濾到刻度離心管中，再加 0.3%KCl溶液至4mL。〔4〕37℃靜置30min，低滲辦理。以800-1000r/min離心8分鐘。棄上清液，參加2mL冰醋酸固定液〔3:1〕，并用吸管至管底吹氣，輕輕打散細(xì)第3頁共7頁 細(xì)胞生物學(xué)試驗報告3/7山東大學(xué)試驗報告

2023531日姓名 班級13級生命基地班 學(xué)號 同組者科目 細(xì)胞生物學(xué)試驗 試驗題目 染色體標(biāo)本制作與觀察8min。再以800-1000r/min離心8分鐘。棄上清液，參加1mL甲醇·冰醋酸固定液制成細(xì)胞懸液，固定 n 取去干凈的低溫預(yù)冷載片，取出后馬上用吸好細(xì)胞懸液的滴管在距載玻片 10-15cm的高度滴下2-3滴細(xì)胞懸液，從載玻片一邊向另一邊輕輕吹氣，同時輕小扣打載玻片，以使細(xì)胞平均散布，促進染色體睜開。〕用濾紙擦去載片上的剩余液體，空氣枯燥?！秤肎iemsa染色20-30分鐘，細(xì)水流反面沖刷載玻片以洗去剩余染液，自然晾干。〕鏡檢。低倍鏡下找尋分別優(yōu)秀，染色適中的分裂相，高倍鏡或油鏡下觀察染色體形態(tài)，找各處于細(xì)胞分裂中期的染色體?！驹囼灲Y(jié)果與剖析 】I.試驗結(jié)果圖1:40倍鏡下觀察染色體組 圖2:40倍鏡下觀察結(jié)果試驗剖析第4頁共7頁 細(xì)胞生物學(xué)試驗報告4/7山東大學(xué)試驗報告

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染色體標(biāo)本制作與觀察結(jié)果剖析：本試驗承受的是小鼠的睪丸細(xì)胞，在 40倍鏡下觀察，視線中可見很多未成熟的精子〔如圖1〕，此外能夠找到好多處于分裂間期和先期的染色體，其分散程度不是很高；剖析可知，處于減數(shù)第一次分裂的中期的細(xì)胞是二倍體，可觀察到 對即40條染色體，有些在進展減數(shù)其次次分裂中期，這樣的細(xì)胞是單倍體，應(yīng)有 20條染色體。觀察中會消滅少于20條染色體的狀況，或很多于20401〕在制備細(xì)胞懸液過程中有染色體的丟掉。如用吸管吹散細(xì)胞時用勁過大造成細(xì)胞裂開，使得染色體彌散在溶液中，在隨后的離心中將會丟掉?！吃诰嚯x載玻片必定高度滴片刻因高度過高，使得染色體過于分別而致使丟掉?！车瓮昶谇么蜉d玻片的過程中致使染色體的丟掉。4〕染色時，由于在染液中染了30min，局部染色體可能會隨染液丟掉。試驗中沒有觀察到完整睜開好的染色體，染色體大多呈棒狀而不是 V字形，這說明在對染色體展平的步驟沒有做好，此后應(yīng)改進。做好本次試驗的重點步驟：低滲辦理過程。低滲溶液的量、辦理時間均與細(xì)胞的數(shù)目相關(guān)。低滲過分，細(xì)胞會裂開；低滲缺乏則染色體聚在一同分別不開。離心速度以及離心時間也能影響染色體標(biāo)本的制備。離心速度過大或離心時間過長 ,則會惹起細(xì)胞裂開；反之離心速度過小或離心時間太短,則細(xì)胞沉降不下來則會惹起大批細(xì)胞的丟掉。3〕固定液要隨用隨配。固定完全后再打散細(xì)胞團塊，不然細(xì)胞簡潔裂開，染色體分別亦遇到影響。4〕用吸管吹散細(xì)胞時用勁肯定盡量嚴(yán)峻。用勁過大則會造成細(xì)胞裂開，而染色體也會彌散在溶液中在隨后的離心中將會丟掉。5〕載玻片要預(yù)冷。取出早先冰好的載玻片后要馬上滴加細(xì)胞懸液，這就需要在拿載玻片之前先用滴管吸好液體，假設(shè)玻片的冷卻溫度不夠，則會影響染色體的附著和鋪展。6)滴片刻的高度很重要。高度過低細(xì)胞不會裂開，過高則染色體過于分別甚至丟掉 ,沒法辨第5頁共7頁 細(xì)胞生物學(xué)試驗報告5/7山東大學(xué)試驗報告

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染色體標(biāo)本制作與觀察別出染色體的正確數(shù)目。在觀察中還覺察，視線中細(xì)胞不是很分別，存在大批細(xì)胞團，這能夠歸納為多方面緣由。第一，假設(shè)在剪碎組織時沒有剪好，則會致使細(xì)胞勻漿中含有大批細(xì)胞團，由于這些細(xì)胞齊集在一同，就有必定的組織強度，十幾厘米的高度很難摔碎。其次，假設(shè)低滲不完整，細(xì)胞可能膨脹程度不夠，很難摔碎。再次，假設(shè)混勻細(xì)胞時沒有完整混勻，則會致使細(xì)胞聚集在一同，敲細(xì)胞時很難敲碎，一樣觀察不到抱負(fù)的成效；假設(shè)吹得太用勁，則會致使細(xì)胞被吹碎，視線中有大批細(xì)胞碎片，影響觀察。最終，假設(shè)滴片刻的高度不夠，細(xì)胞分別不好，也很能裂開，染色體也就不行以很好地睜開?！玖粢馐马?】1則表示注射到皮下，應(yīng)從頭注射；假設(shè)在拔出針時觀察到有血珠溢出，則是由于注射時損害了局部器官或血管，秋水仙素會隨血液傳到達(dá)渾身，其傳達(dá)速度會加速，其死亡時間可能小于 15-16h，應(yīng)隨時觀察小鼠，以防其突然死亡。即便注射到小鼠的腹腔中，也很有可能注射到起脂肪組織中，使小鼠的死亡時間變慢。所以應(yīng)依據(jù)具體試驗，適合調(diào)整注射時間和等候時間。2、處死小鼠：最好選擇在小鼠將要死亡時處死小鼠，由于此時，秋水仙素的作用發(fā)揮到最大，分裂期中期的細(xì)胞最多；假設(shè)等小鼠死亡后處死小鼠，小鼠尸體可能已僵直，難以取到精巢。3、剪碎組織：能夠取少于1mL0.3%KCl溶液，沒過杯底即可，假設(shè)液體太多則很難剪到組織，比較鋪張時間。4、銅網(wǎng)過濾：應(yīng)把組織盡量剪碎后再用銅網(wǎng)過濾；假設(shè)燒杯中仍有較大顆粒，則留神不要把那些顆粒倒出，在燒杯中再參加少許 0.3%KCl溶液，持續(xù)剪；假設(shè)銅網(wǎng)上還有好多比較大的顆粒，先用少許0.3%KCl溶液將其沖進燒杯，再進展剪碎。5、試驗步驟中的〔所提到的30min包含〔中的離心配尋常間，所以，真實的靜置時應(yīng)少于30mins，細(xì)胞與0.3% KCl接觸的總時間應(yīng)為45mins左右。6、離心：離心的轉(zhuǎn)速是800-1000r/min，這樣低的轉(zhuǎn)速是為了防范細(xì)胞裂開。7、再次離心和固定：這樣做是由于第一次離心以前細(xì)胞經(jīng)過了低滲辦理，固然抽去了上清液，可是不行能抽干凈，所以，再次離心保證細(xì)胞走開低滲環(huán)境。第6頁共7頁 細(xì)胞生物學(xué)試驗報告6/7山東大學(xué)試驗報告

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