外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞在煙霧病患者中的表達(dá)及出血型煙霧病患者血管重建術(shù)后的長(zhǎng)期隨訪(fǎng)

外周血內(nèi)皮細(xì)胞在煙霧患者中的表及出血型霧病患者血管重建術(shù)的長(zhǎng)期隨訪(fǎng)第一部分內(nèi)皮祖細(xì)胞在煙霧病患者中的表達(dá)研究背景及目的煙霧病(moyamoyadisease,MMD)是一種慢性進(jìn)展性腦血管疾病其特征性表現(xiàn)為雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈末端和(或)大腦中動(dòng)脈、大腦前動(dòng)脈起始端狹窄或閉塞并在腦底部伴有代償形成的異常血管網(wǎng),即煙霧狀血管病目前發(fā)病機(jī)制不詳煙霧狀血管的形成可能與內(nèi)皮祖細(xì)胞的數(shù)量及功能相關(guān),但僅有少量研究報(bào)道了內(nèi)皮祖細(xì)胞在煙霧病中的表達(dá)情況,且由于鑒定方法不一,得出的結(jié)論相互矛盾。另外,煙霧病的病理特征提示煙霧病的發(fā)病可能與內(nèi)皮損傷有關(guān)而目前還沒(méi)有這方面的研究證實(shí)。因此,本研究應(yīng)用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)對(duì)煙霧病患者及健康志愿者外周循環(huán)血中的內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitorcells,EPC)內(nèi)皮細(xì)胞(circulatingendothelialcells,CEC)數(shù)量分別進(jìn)行檢測(cè)探究煙霧病患者外周血液中EPC及CEC的表達(dá)情況,同時(shí)與患者的臨床資料相結(jié)合分析EPC及CEC量的影響因素以期為煙霧病的病因?qū)W探索及臨床干預(yù)提供依據(jù)方法外周血標(biāo)本來(lái)源于2016年11月份-2017年5月份我科收治的81例成人煙霧病患者,并收集患者的一般資料,臨床癥狀及影像學(xué)資料進(jìn)行分析,65例成人健康對(duì)照組來(lái)自健康體檢的人群。應(yīng)用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)對(duì)外周血分離的單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)對(duì)所得數(shù)據(jù)通過(guò)FLOWJO軟件進(jìn)行分析,外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的表面標(biāo)志定義為CD34brCD133+CD31+CD45dim細(xì)胞,外周血循環(huán)內(nèi)皮細(xì)胞的表面標(biāo)志定義為CD34+CD133-CD31brCD45-細(xì)胞。結(jié)果:煙霧病患者中男性35,女性46,平均年齡±10.5歲其中28

例合并高血壓、糖尿病或冠心病病史,臨床癥狀以為首發(fā)癥狀的有例,有15例以腦出血為首發(fā)癥狀,28例以腦梗塞為首發(fā)癥狀2例無(wú)臨床癥狀。煙霧病患者外周血中EPC占PBMC(外周血單個(gè)核細(xì)胞的0.047%±0.036%,健康對(duì)照組EPC占PBMC的0.037%±0.016%,二者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P<0.05)。獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)顯示EPC與合并疾病負(fù)相關(guān),即合并疾病的患者表達(dá)水平下降(P<0.05),相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),EPC與患者年齡顯著負(fù)相關(guān)P<0.01),EPC與患者高密度脂蛋白水平相關(guān)(P<0.05)。進(jìn)一步行多元線(xiàn)性回歸分析結(jié)果顯示水平僅與患者年齡及高密度脂蛋白水平相關(guān)霧病患者外周血中CEC占PBMC的±1.16%,健康對(duì)照組占PBMC的1.38%±0.78%,二者比較有顯著差異P<0.01)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),兩類(lèi)細(xì)胞在外周血的表達(dá)沒(méi)有相關(guān)性(Pearson數(shù)為-0.095;P=0.401)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)僅與合并疾病相關(guān)(Pearson系數(shù)為0.25,P<0.05),與其它因素等均明顯相關(guān)性。結(jié)論:煙霧病患者體內(nèi)外周血EPC及CEC數(shù)量較健康人群明顯增高;EPC表達(dá)水平與患者年齡及高密度脂蛋白水平相關(guān)而CEC表達(dá)水平僅與合并基礎(chǔ)疾病相關(guān),兩類(lèi)細(xì)胞在外周血的表達(dá)沒(méi)有明確相關(guān)性;對(duì)煙霧病致病機(jī)制進(jìn)行了推測(cè),在致病因素(異常血流動(dòng)力學(xué)改變傳感染氧等)作用下,Willis環(huán)附近的血管出現(xiàn)內(nèi)皮損傷內(nèi)皮損傷后EPC和相關(guān)細(xì)胞因子介導(dǎo)的自身修復(fù)出現(xiàn)失衡或紊亂,導(dǎo)致血管內(nèi)膜增厚最終形成管腔狹窄甚至是閉塞。第二部分內(nèi)皮祖細(xì)胞與煙霧病血管重建術(shù)效果的關(guān)系研究背景及目的煙霧病(moyamoyadisease,MMD)是一種原因不明的慢性進(jìn)展性腦血管疾病,其特征性表現(xiàn)為雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈末端和(或)大腦中動(dòng)脈、大腦前動(dòng)脈起始端狹窄或閉塞,并在腦底部伴有代償形成的異常血管網(wǎng)(通常稱(chēng)為“煙霧血管”),腦血管造影時(shí)這

些異常血管網(wǎng)如同噴出的煙霧,由此得名煙霧病。近年來(lái),隨著影像技術(shù)的發(fā)展及對(duì)該病認(rèn)識(shí)的提高煙霧病的發(fā)病率逐年增高,目前已成為兒童缺血性卒中最常見(jiàn)的原因也是成人缺血性卒中的常見(jiàn)原因之一霧病可導(dǎo)致患者神經(jīng)功能缺損,嚴(yán)重影響患者的工作和生活質(zhì)量,給社會(huì)帶來(lái)沉重的負(fù)擔(dān)。目前尚無(wú)有效的藥物可以治療煙霧病外科血管重建手術(shù)是治療該病的有效方法,通過(guò)血流重建可改善局部腦缺血的狀態(tài),緩解臨床癥狀。腦-硬腦膜-動(dòng)脈血管融通術(shù)(encephaloduroarteriosynangiosis,EDAS)為間接血管重建手術(shù)的一種,目前已廣泛運(yùn)用到煙霧病的治療中EDAS術(shù)后血流重建的關(guān)鍵因素是頸外動(dòng)脈系統(tǒng)的供血?jiǎng)用}與顱內(nèi)的皮層血管之間能否形成溝通的橋動(dòng)脈,供血?jiǎng)用}通過(guò)新生的橋動(dòng)脈與皮層血管聯(lián)通從而向顱內(nèi)代償供血這個(gè)過(guò)程中,與血管新生相關(guān)的內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelialprogenitor是否發(fā)揮了作用目前還尚不明確。本研究采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)煙霧病患者體內(nèi)細(xì)胞的表達(dá),同時(shí)行內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外培養(yǎng)并鑒定,進(jìn)而分的表達(dá)EDAS術(shù)后血流重建效果的關(guān)系,為EDAS術(shù)后血流重建效果提供預(yù)后參考。方法外周血標(biāo)本來(lái)源于年6月份-2018年3月份我科收治成人煙霧病患者,并收集患者的一般資料,臨床癥狀及影像學(xué)資料進(jìn)行分析。應(yīng)用流式細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)對(duì)外周血進(jìn)行檢測(cè)對(duì)所得數(shù)據(jù)通過(guò)FLOWJO軟件進(jìn)行分析,外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞的表面標(biāo)志定義為CD34brCD133+CD45dimKDR+細(xì)胞。同時(shí)選取20例煙霧病患者的外周血進(jìn)行內(nèi)皮祖細(xì)胞的體外培養(yǎng)并進(jìn)行免疫熒光鑒定所有入組的煙霧病患者均行EDAS血管重建手術(shù)治療,并于手術(shù)后6個(gè)月返院行全腦血管造影術(shù)評(píng)估血流重建效果分析血管重建效果的影響因素。

結(jié)果:共計(jì)116例煙霧病患者納入到本研究中,73例為女性,患者的平均發(fā)病年齡為33.8±15.2歲。首發(fā)癥狀方面,45例(38.8%)患者首次發(fā)病表現(xiàn)為T(mén)IA發(fā)作,52例(44.8%)患者為腦梗塞剩余19例患者為腦出血45例煙霧病患者合并了高血壓、糖尿病或冠心病等基礎(chǔ)性疾病。全腦血管造影結(jié)果顯示24例(20.7%)患者為單側(cè)煙霧病,46例(39.7%)患者累及了大腦后動(dòng)脈。鈴木分期方面,1期為4例,2期12例3期21例,4期32例5期26例,6期為21例25患者造影無(wú)煙霧狀血管網(wǎng),38例患者有少量的煙霧狀血管網(wǎng),53例患者有大量煙霧狀血管網(wǎng)。煙霧病患者外周血中占PBMC(周血單個(gè)核細(xì)胞)的0.071%±0.050%。20例進(jìn)行外周血內(nèi)皮祖細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)本中,16例患者均培養(yǎng)出克隆的細(xì)胞集落,免疫熒光染色提示該細(xì)胞集落CD34+CD133CD45dimEDAS術(shù)后全腦血管造影復(fù)查提示25例(21.6%)患者松島分級(jí)為A,21例(18.1%)患者為B級(jí),70例(60.3%)患者為C級(jí)。46例(39.7%)患者手術(shù)后血管重建效果一般(gradeA及gradeB),70例患者血管重建效果優(yōu)秀(gradeC)。血管重建效果優(yōu)秀組煙霧病患者外周血計(jì)數(shù)顯著高于血管重建效果一般組(0.085%±0.054%VS0.048%±0.034%,P=0.000)年齡、首發(fā)癥狀、鈴木分期、異常血管網(wǎng)的數(shù)量以及大腦后動(dòng)脈的累及均與煙霧病患者術(shù)后血流重建的效果密切相關(guān)(P<0.05)。煙霧病患者外周血數(shù)量的多少僅與較小的年齡(P=0.047)和大腦后動(dòng)脈的累及(P=0.039)切相關(guān)。結(jié)論:煙霧病患者外周EPC量術(shù)后的血管重建效果密切相關(guān),EPC數(shù)量越多,手術(shù)重建效果越好;較小的年齡及大腦后循環(huán)的累及為煙霧病患者

EPC數(shù)量的影響因素;臨床上可通過(guò)動(dòng)員患者的數(shù)量及功能來(lái)獲得更佳的血管重建效果三部分出血型煙霧病患者血管重建術(shù)后的長(zhǎng)期隨訪(fǎng)研究背景及目的:煙霧病(moyamoyadisease,MMD)是一種慢性進(jìn)展性腦血管疾病,其特征性表現(xiàn)為雙側(cè)頸內(nèi)動(dòng)脈末端和(或)大腦中動(dòng)脈、大腦前動(dòng)脈起始端狹窄或閉塞,同時(shí)在腦底部伴有代償異常血管網(wǎng)的形成。目前該病的病因尚未明確根據(jù)患者的主要臨床表現(xiàn)可分為腦缺血型和腦出血型。兒童多為腦缺血型,而成年人則腦出血型多見(jiàn)于缺血型煙霧病患者應(yīng)當(dāng)積極行血管重建手術(shù)治療,而對(duì)于出血型煙霧病是否應(yīng)當(dāng)行手術(shù)治療、何時(shí)應(yīng)當(dāng)行手術(shù)治療用何種術(shù)式治療以及手術(shù)能否降低再發(fā)腦出血風(fēng)險(xiǎn)等目前尚有爭(zhēng)議。本研究對(duì)出血型煙霧病患者在行腦硬膜血管融通術(shù)(encephaloduroarteriosynangiosis,EDAS)進(jìn)行了長(zhǎng)期隨訪(fǎng),以期明確EDAS血管重建手術(shù)對(duì)于降低患者再發(fā)顱內(nèi)出血風(fēng)險(xiǎn)的效果同時(shí)探討出血型煙霧病患者發(fā)生再出血的危險(xiǎn)因素。研究方法:本研究納入了年8月份-2010年1月份于我科收治的95例成人出血型煙霧病患者,所有病人均接受了血管重建手術(shù)治療并定期接受隨訪(fǎng)所有納入患者的一般臨床資料影像學(xué)特征以及長(zhǎng)期隨訪(fǎng)結(jié)局都被詳細(xì)記錄并分析。脈絡(luò)膜前動(dòng)脈的擴(kuò)張情況依據(jù)全腦血管造影結(jié)果進(jìn)行分級(jí)比較出血側(cè)腦半球與未出血腦半球脈絡(luò)膜前動(dòng)脈擴(kuò)張的程度有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。依據(jù)患者首次發(fā)生腦出血的具體位置所有納入的患者被分為前腦出血組及后腦出血組,應(yīng)用Kaplan–Meier生存曲線(xiàn)來(lái)比較兩組患者發(fā)生再出血的風(fēng)險(xiǎn)有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析出血型煙霧病患者再發(fā)顱內(nèi)出血的危險(xiǎn)因素,納入分析的因素包括患者首次發(fā)病的年齡、性別、合并高血壓、合

并高脂血癥、合并糖尿病、有吸煙史及或飲酒史、鈴木分期、是否合并大腦后動(dòng)脈受累的情況、腦出血類(lèi)型、脈絡(luò)膜前動(dòng)脈擴(kuò)張情況及單側(cè)煙霧病等。結(jié)果該組患者的平均首次發(fā)病年齡為37.1歲(20歲54歲),其中51例為女性患者,44例為男性患者,男女性別比例為1:1.16。95側(cè)發(fā)生出血的腦半球中,61側(cè)(64.2%)出現(xiàn)了脈絡(luò)膜前動(dòng)脈的明顯擴(kuò)張同時(shí)伴有側(cè)枝血管形成,18側(cè)(18.9%)由于頸內(nèi)動(dòng)脈的閉塞而導(dǎo)致脈絡(luò)膜前動(dòng)脈未顯影;而在86側(cè)未發(fā)生出血的腦半球中,僅有側(cè)(32.6%)出現(xiàn)了脈絡(luò)膜前動(dòng)脈的明顯擴(kuò)張并伴有側(cè)枝血管形成,4側(cè)(4.7%)絡(luò)膜前動(dòng)脈未顯影。單因素分析提示出血側(cè)腦半球脈絡(luò)膜前動(dòng)脈的擴(kuò)張情況較未出血側(cè)具有顯著差異(p<0.01)腦出血患者人數(shù)多于后腦出血組57例,60.0%,vs.38例,40.0%)。在平均長(zhǎng)達(dá)8.5±1.7年的隨訪(fǎng)時(shí)間中,16例(16.8%)患者發(fā)生了顱內(nèi)再出血,7例患者由于再發(fā)腦出血而死亡,年平均再發(fā)腦出血率為2.2%/人/年腦出血組中有8例(14.0%)患者發(fā)生了顱內(nèi)再出血而后腦出血組中則有8例(21.1%)患者發(fā)生了顱內(nèi)再出血,后腦出血組的年平均再發(fā)腦出血率高于前腦出血組,然而Kaplan-Meier生存曲線(xiàn)分析提示兩者的差異無(wú)確切的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義3.1%vs1.6%,p=0.404)。Cox比例風(fēng)