藥物的安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)方法

關(guān)于藥物的安全性評(píng)價(jià)試驗(yàn)方法第一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三第一節(jié)新藥急性毒性試驗(yàn)急性毒性：24h內(nèi)單次或多次大劑量給予某種藥物所出現(xiàn)的有害作用。急性毒性試驗(yàn)

毒性反應(yīng)類型定性出現(xiàn)和消失時(shí)間可能的靶器官和死亡原因致死量定量最大給藥量半數(shù)致死量第二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三急性毒性試驗(yàn)的目的和意義：1、測定藥物的半數(shù)致死量及相關(guān)參數(shù)2、通過觀察藥物急性中毒癥狀，推測藥物的毒性靶器官3、為長期毒性試驗(yàn)和特殊毒性試驗(yàn)提供劑量設(shè)計(jì)參考第三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三二、試驗(yàn)內(nèi)容（一）半數(shù)致死量（LD50）試驗(yàn)?zāi)康模河^察一次給予受試藥物后動(dòng)物產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和死亡情況，計(jì)算LD50。試驗(yàn)方法：1、動(dòng)物：小鼠或大鼠2、動(dòng)物分組：隨機(jī)原則3、劑量設(shè)計(jì)：5~6個(gè)劑量組（LD0~LD100）4、給藥途徑：兩種5、觀察時(shí)間：14天左右第四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三6、觀察指標(biāo)：中毒癥狀、LD50中毒癥狀：被毛，行為學(xué)變化，情緒，神經(jīng)癥狀（震顫、痙攣、抽搐、步態(tài)不穩(wěn)等），呼吸頻率，肛門周圍有無污染，眼、鼻、口有無分泌物，體溫，體重變化等剖檢檢查：各臟器的變化等。組織切片第五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三急毒試驗(yàn)常見觀察指針及可能涉及的組織、器官、系統(tǒng)第六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三LD50測定的缺陷：1、動(dòng)物消耗量大，獲得的信息有限2、影響因素較多，數(shù)據(jù)重復(fù)性較差3、從安全性評(píng)價(jià)角度來看，需要的不是精確的LD50值，而是更多的毒性信息第七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三（二）最大給藥量試驗(yàn)在受試藥物合理的最大容積和最高濃度條件下，單次或24h內(nèi)多次給予試驗(yàn)動(dòng)物不產(chǎn)生死亡的最大給藥量試驗(yàn)。常用于某些低毒的藥物急性毒性試驗(yàn)。第八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三（三）最大耐受量試驗(yàn)單次給藥引起動(dòng)物出現(xiàn)明顯的中毒反應(yīng)而未發(fā)生死亡的劑量。多用于毒性較小的藥物研究第九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三試驗(yàn)方法：1、動(dòng)物：小鼠、大鼠、犬等2、動(dòng)物數(shù)：小動(dòng)物10~20只；大動(dòng)物4~6只（雌雄各半）3、給藥途徑：臨床給藥途徑4、試驗(yàn)對(duì)照：5、觀察時(shí)間：7~14天大體解剖

如有改變——組織切片6、結(jié)果與評(píng)價(jià)：描述動(dòng)物單次大劑量給藥或在24h內(nèi)接受多次大劑量給藥后，在短期內(nèi)出現(xiàn)的與藥物相關(guān)的毒性反應(yīng)，發(fā)生、發(fā)展過程提供不引起動(dòng)物死亡的最大劑量。第十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三（四）固定劑量試驗(yàn)不以死亡作為觀察終點(diǎn)，而是以明顯的毒性體征作為重點(diǎn)進(jìn)行藥物的急性毒性評(píng)價(jià)。試驗(yàn)方法：選5、50、500、2000mg/kg四個(gè)固定劑量進(jìn)行試驗(yàn)動(dòng)物：大鼠預(yù)試：500mg/kg正式試驗(yàn)：根據(jù)預(yù)試結(jié)果，從四個(gè)固定劑量中選擇一個(gè)可能產(chǎn)生明顯毒性，但不引起死亡的劑量進(jìn)行試驗(yàn)。觀察指標(biāo)：同半數(shù)致死量試驗(yàn)。第十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三固定劑量法試驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)劑量（mg/kg）試驗(yàn)結(jié)果存活數(shù)<100%100%存活，毒性表現(xiàn)明顯100%存活，無明顯毒性反應(yīng)5高毒（LD50<mg/kg）有毒（LD50：25~50mg/kg）用50mg/kg試驗(yàn)50有毒或高毒，用5mg/kg試驗(yàn)有害（LD50：200~2000mg/kg）用500mg/kg試驗(yàn)500有毒或有害，用50mg/kg試驗(yàn)LD50>2000mg/kg用2000mg/kg試驗(yàn)2000用500mg/kg試驗(yàn)該藥物無嚴(yán)重急性中毒的危險(xiǎn)性第十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三（五）近似致死劑量試驗(yàn)1、估計(jì)可能的毒性范圍2、按50%遞增法，設(shè)計(jì)出含10~20個(gè)劑量組3、測出最低致死劑量和最高非致死劑量后，用二者之間的劑量（即近似致死劑量）給一只動(dòng)物第十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三三、LD50計(jì)算方法Bliss法加權(quán)概率單位法寇氏法改良寇氏法LD50=㏒-1[Xm–i(∑P–0.5)]Xm：最大劑量的對(duì)數(shù)值

i：相鄰兩組劑量對(duì)數(shù)值之差

P：各組動(dòng)物死亡率，用小數(shù)表示（如死亡率為80％應(yīng)寫成0.80）

∑P：各組動(dòng)物死亡率之總和第十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三第二節(jié)新藥長期毒性試驗(yàn)長期毒性：試驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)多次接觸較大劑量的藥物所引起的中毒效應(yīng)。長期毒性試驗(yàn)：為觀察藥物的長期毒性而設(shè)計(jì)的毒理學(xué)試驗(yàn)。又被稱為重復(fù)給藥毒性試驗(yàn)。第十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三長期毒性試驗(yàn)的目的1、反復(fù)多次給藥的情況下，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物出現(xiàn)的毒性反應(yīng)、量效關(guān)系、主要的靶器官、損害程度及其可逆性。2、獲得反復(fù)給藥情況下，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物能耐收的劑量范圍及完全無毒性反應(yīng)的安全范圍。第十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三一、一般原則1、試驗(yàn)動(dòng)物：二種（嚙齒類和非嚙齒類）動(dòng)物數(shù)量、性別、年齡、敏感性2、給藥期限：一般為臨床療程的3~4倍時(shí)間創(chuàng)新藥品試驗(yàn)周期不少于90天3、劑量選擇：高中低三個(gè)組高劑量組：能充分反映藥物的毒性，但不能造成太多動(dòng)物死亡。低劑量組：無毒。第十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三4、給藥方法：最好與臨床給藥途徑一致5、觀察途徑：日常觀察（生長率、食耗、一般觀察等）測定指標(biāo)：器官重量、血液學(xué)變化、血液生化學(xué)指標(biāo)第十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三二、檢測項(xiàng)目1、日常觀察：一般指標(biāo)：被毛、皮膚、眼睛、呼吸、行為活動(dòng)、病理檢查等。生長率食耗2、測定指標(biāo)血液學(xué)指標(biāo)（紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、白細(xì)胞總數(shù)級(jí)分類、血小板等）

血液生化指標(biāo)（天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶、

丙氨酸氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶、堿性磷酸酶、尿酸氮

、總蛋白、白蛋白、血糖、

總膽紅素、肌酐、

總膽固醇）

器官重量第十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三三、檢測指標(biāo)的時(shí)間（一）檢查間隔一般癥狀：每天觀察記錄測定指標(biāo)：定期檢查（二）恢復(fù)期觀察最后一次給受試藥物后，部分動(dòng)物進(jìn)行活殺檢測各項(xiàng)指標(biāo)，留下約1/3~1/4動(dòng)物進(jìn)行恢復(fù)期觀察?；謴?fù)期觀察目的：了解毒性反應(yīng)的可逆性和可能出現(xiàn)的延遲性毒性。第二十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三四、結(jié)果評(píng)價(jià)1、試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)應(yīng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理2、根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，結(jié)合觀察到的毒性表現(xiàn)作出恰當(dāng)?shù)脑u(píng)價(jià)3、通過實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定毒性靶器官和毒性表現(xiàn)4、可結(jié)合其他試驗(yàn)同時(shí)觀察第二十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三第三節(jié)制劑的全身毒性試驗(yàn)一、靜脈注射制劑的全身毒性試驗(yàn)1、血管刺激性試驗(yàn)?zāi)康模河^察受試靜脈注射制劑經(jīng)多次給藥后對(duì)血管刺激反應(yīng)情況。試驗(yàn)方法：動(dòng)物：家兔分組：試驗(yàn)組、空白對(duì)照組給藥方法：多次靜脈注射觀察指標(biāo)：肉眼觀察病理切片第二十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三2、體外溶血試驗(yàn)?zāi)康模河^察靜脈注射劑是否能引起溶血現(xiàn)象。試驗(yàn)方法：（1）制備2%紅細(xì)胞懸液（2）加樣（3）保溫（4）結(jié)果觀察全溶血：溶液澄明，紅色，管底無紅細(xì)胞殘留部分溶血：溶液澄明，紅色或棕色，管底有少量紅細(xì)胞殘留不溶血：紅細(xì)胞全部下沉，上層液體無色透明。鏡檢紅細(xì)胞不凝集。第二十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三3、過敏性試驗(yàn)（致敏試驗(yàn)）目的：觀察受試藥物經(jīng)注射給藥后有無過敏反應(yīng)。試驗(yàn)方法：動(dòng)物：豚鼠分組：3組（給藥組、空白對(duì)照組、陽性致敏組）給藥方法：腹腔注射結(jié)果觀察：過敏性反應(yīng)（痙攣、呼吸困難、皮疹等）第二十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三熱源：微生物產(chǎn)生的能引起人及恒溫動(dòng)物體溫異常升高的物質(zhì)，主要是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁分離出來的內(nèi)毒素。4、熱原試驗(yàn)第二十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三目的：將受試藥靜脈注射給予家兔，觀察家兔體溫升高情況，以判定藥物是否具有致熱作用。試驗(yàn)方法：動(dòng)物：家兔給藥方法：耳緣靜脈注射觀察指標(biāo)：體溫第二十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三一般藥理學(xué)評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)新藥在擬推薦臨床使用劑量下對(duì)重要的生命活動(dòng)（如心血管系統(tǒng)功能、中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能、呼吸系統(tǒng)功能、胃腸道功能、內(nèi)分泌功能、外周神經(jīng)功能、尤其是體液傳遞機(jī)制及其神經(jīng)沖動(dòng)和骨骼肌功能等）的影響的研究，以預(yù)期用于臨床防治疾病主要目的以外的其它廣泛的藥理作用，從而達(dá)到基本認(rèn)識(shí)全身用藥對(duì)機(jī)體主要器官系統(tǒng)影響的目的。第二十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三一般藥理學(xué)評(píng)價(jià)的基本要求1、精神神經(jīng)系統(tǒng)常用動(dòng)物：小鼠觀察指標(biāo)：行為學(xué)變化、對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的興奮或抑制作用。第二十八頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三2、心血管系統(tǒng)常用動(dòng)物：大鼠、犬、貓等觀察指標(biāo)：血壓、心率、心電、血流動(dòng)力學(xué)變化等第二十九頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三3、呼吸系統(tǒng)常用動(dòng)物：犬、貓等大動(dòng)物觀察指標(biāo)：呼吸頻率、呼吸深度、呼吸類型等。第三十頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三局部用藥的毒性試驗(yàn)是根據(jù)局部用藥部位的解剖和生理特點(diǎn)設(shè)計(jì)的。

涂劑、擦劑皮膚用藥膏劑、凝膠劑

其他透皮吸收制劑常用局部用藥制劑滴眼劑、滴鼻劑噴霧劑、肌內(nèi)注射直腸和陰道制劑第十九章局部用藥的毒性研究第三十一頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三第一節(jié)皮膚用藥的毒性試驗(yàn)一、皮膚的組織結(jié)構(gòu)皮膚由表皮、真皮及皮下組織等構(gòu)成皮膚覆蓋全身。表皮較薄，厚為0.1-0.2mm。角質(zhì)層表皮顆粒層生發(fā)層真皮依附于皮下組織，厚約2mm。膠原真皮彈性硬蛋白纖維母細(xì)胞第三十二頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三二、化學(xué)物質(zhì)對(duì)皮膚毒性作用的類型（一）皮膚原發(fā)性刺激指藥物直接作用于皮膚引起的病理學(xué)反應(yīng)。原發(fā)性刺激的表現(xiàn)：紅斑、水腫、水皰疹、潰瘍、蕁麻疹等作用機(jī)理：1、直接刺激作用2、使皮膚表面蛋白質(zhì)變性藥物：強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化劑、重金屬等第三十三頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三（二）皮膚致敏作用機(jī)理：變態(tài)反應(yīng)藥物：抗生素、非甾體類抗炎藥、局麻藥、消毒藥等（三）皮膚致癌第三十四頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三三、皮膚用藥毒性試驗(yàn)（一）急性毒性試驗(yàn)1、試驗(yàn)?zāi)康模河^察動(dòng)物完整皮膚及破損皮膚短期內(nèi)接觸受試藥物所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。2、試驗(yàn)材料（1）動(dòng)物：成年健康家兔、豚鼠、大鼠（2）藥物制劑：膏劑、液體制劑、粉末3、試驗(yàn)方法（1）劑量：3個(gè)劑量組（2）給藥途徑：將藥物均勻涂布于動(dòng)物背部皮膚（經(jīng)脫毛處理）（3）觀察指標(biāo)：全身反應(yīng)、死亡情況、各系統(tǒng)變化、剖檢變化第三十五頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三（二）皮膚用藥長期毒性試驗(yàn)1、試驗(yàn)?zāi)康模河^察動(dòng)物皮膚長期接觸受試藥物，經(jīng)皮膚滲透或吸收后對(duì)機(jī)體產(chǎn)生的異常反應(yīng)及其可逆程度。2、試驗(yàn)材料（1）動(dòng)物：成年健康家兔、豚鼠、小鼠（2）受試藥物：膏劑、液體制劑、粉末3、試驗(yàn)方法（1）劑量：3個(gè)劑量組（2）給藥途徑：將藥物均勻涂布于動(dòng)物背部脫毛區(qū)，每日一次，每次至少接觸6小時(shí)（3）觀察指標(biāo)：全身反應(yīng)第三十六頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三第二節(jié)眼睛用藥刺激性試驗(yàn)1、試驗(yàn)?zāi)康模河^察動(dòng)物眼睛接觸受試藥物產(chǎn)生的刺激反應(yīng)情況。2、試驗(yàn)材料（1）動(dòng)物：成年健康家兔（2）受試藥物：原液或原3、試驗(yàn)方法（1）試驗(yàn)分組：1個(gè)劑量組，1個(gè)對(duì)照組（2）給藥方案：將藥物滴入或涂敷于動(dòng)物一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)作為對(duì)照。（3）觀察指標(biāo)：6、24、48、72h、7d觀察眼部反應(yīng)情況（具體觀察評(píng)分方式見書177頁）第三十七頁，共四十三頁，編輯于2023年，星期三第三節(jié)肌肉注射用藥局部刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)?zāi)康模河^察藥物肌內(nèi)注射后是否具有局部刺激作