科曉儀器色譜培訓(xùn)班資料(二)

/科曉儀器色譜培訓(xùn)班資料（二）液相色譜儀維護(hù)手冊科曉儀器濟(jì)南分公司色譜技術(shù)服務(wù)中心地址:濟(jì)南市華能路１９號446室中國（濟(jì)南）留學(xué)人員創(chuàng)業(yè)園二期電話：2轉(zhuǎn)80１傳真：１網(wǎng)址:杭州科曉化工儀器設(shè)備有限公司濟(jì)南分公司色譜儀－金牌服務(wù)專業(yè)經(jīng)營：色譜儀及其它實(shí)驗(yàn)室設(shè)備★GＣ1690型高性能氣相譜儀全國范圍20０5年銷量達(dá)350臺★上海伍豐LC－100系列高效液相色譜儀一級經(jīng)銷商及售后服務(wù)點(diǎn)★上海精密科學(xué)儀器有限公司色譜及光譜產(chǎn)品華東、華中總代理及服務(wù)中心★蘭化所毛細(xì)管柱及大連依利特液相色譜柱山東、河北、河南地區(qū)代理★上海海欣、上海科創(chuàng)、溫嶺福立、山東魯南等色譜儀的經(jīng)銷及維修★上海雷磁、安亭、博迅、恒平、亞榮等廠家特約經(jīng)銷及維修點(diǎn)★島津、安捷倫氣液相色譜儀、普析通用光譜儀特約經(jīng)銷及維修點(diǎn)★國內(nèi)外數(shù)十種實(shí)驗(yàn)室分析儀器銷售及售后服務(wù)點(diǎn)★氣、液相色譜儀配件及耗材供應(yīng)站（批發(fā)和零售）新型的GC16９0型氣相色譜儀(科曉公司生產(chǎn)）1690型氣相色譜儀是科曉儀器公司采用國際先進(jìn)技術(shù)，整合國內(nèi)氣相色譜儀的優(yōu)點(diǎn),而研發(fā)出的最新一代氣相色譜,具有優(yōu)異的性能和極高的性價(jià)比,標(biāo)志著國產(chǎn)儀器已經(jīng)達(dá)到一個(gè)新的水平。上海精密科學(xué)儀器有限公司分析儀器（總代理）作為國產(chǎn)分析行業(yè)龍頭老大,以"市場導(dǎo)向、規(guī)范管理、品質(zhì)領(lǐng)先、追求卓越"為企業(yè)追高目標(biāo)，為市場和新老客戶提供值得信賴的優(yōu)異產(chǎn)品.上海伍豐LC-100系統(tǒng)高效液相色譜儀（總代理）科曉公司作為上海伍豐ＬC—1００系列S-HＰLC智能全控制液相色譜儀總代理，為了將這款優(yōu)異的新型產(chǎn)品介紹給更多的新老客戶,特舉行增值派送活動(dòng)回報(bào)社會!科曉儀器－－－—精誠服務(wù)聯(lián)系電話：2８803４１28技術(shù)服務(wù)中心：2—８0９科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料高效液相色譜儀常規(guī)分析操作步驟及規(guī)程

?

1)。嚴(yán)格過濾色譜純流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。?

2）．對抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣２0－３0分鐘。

３)。打開色譜工作站,連接好流動(dòng)相管道，連接檢測系統(tǒng)。

4）.有一段時(shí)間沒用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口,用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，沖洗時(shí)速度不要超過1０ml/min。

５）.調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相,可以先試一下壓力,流速越大，壓力越大，一般不要超過2000psｉ.選用合適的流速。?

6)．設(shè)定不同樣品的檢測器分析參數(shù)。7)．

等基線走穩(wěn)即可進(jìn)樣分析,分析樣品時(shí)對樣品的前處理非常重要。8）．關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)檢測器,泵不要關(guān)掉,應(yīng)改用流動(dòng)相沖洗泵,不同的流動(dòng)相沖洗時(shí)間不同，一般沖洗30miｎ，若是緩沖鹽作流動(dòng)相應(yīng)先用水沖洗30miｎ,再用純甲醇沖洗。

9)．然后關(guān)液相泵。

10）。需要把進(jìn)樣閥沖洗干凈，另把注射器等工具清理整潔。?

１１）.填寫登記本,由負(fù)責(zé)人簽字。

注意事項(xiàng)：

１.首先必須是HPＬC級的,這一條相信大家都做到了。2。脫氣.由于流動(dòng)相里含有微量空氣，經(jīng)泵的壓力作用，會在流通池里產(chǎn)生氣泡，這對分析產(chǎn)生一定的影響，如噪音增大，甚至于掩蓋信號峰。因此,流動(dòng)相在使用前必須經(jīng)超聲脫氣20分鐘以上。3。過濾.由于流動(dòng)相里有很微小的垃圾，如不經(jīng)過過濾,偶爾會卡在單向閥門中，從而產(chǎn)生壓力波動(dòng)。這一點(diǎn)很多用戶不太注意，等到產(chǎn)生壓力波動(dòng)又不知道什么原因產(chǎn)生的.科曉儀器—-－-精誠服務(wù)聯(lián)系電話:288０34128技術(shù)服務(wù)中心：2—80９科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料如何選擇液相色譜儀一臺品質(zhì)優(yōu)良的液相色譜系統(tǒng)應(yīng)從以下幾個(gè)方面考慮：一．主要技術(shù)指標(biāo)優(yōu)異:首先是如何看指標(biāo)。液相色譜儀的指標(biāo)很多,有泵的、檢測器的、色譜柱等等。我們認(rèn)為要看主要技術(shù)指標(biāo),根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)，儀器的主要指標(biāo)有噪音，漂移，最小檢測濃度,定性定量重復(fù)性等.這些指標(biāo)都要放在系統(tǒng)，回路里去看，去比較。就是需要把各單元裝置都要聯(lián)接好，如接好色譜柱，進(jìn)樣閥，并且要通上流動(dòng)相。因?yàn)槟诜治鲋幸捕际锹?lián)接好以后才可以進(jìn)行分析的,而不是單單用個(gè)檢測器或是泵的。然后在這個(gè)基礎(chǔ)上，我們再去比較這些主要指標(biāo)。1。噪音是指由儀器的電器元件、溫度波動(dòng)、電壓的線性脈沖以及其他非溶質(zhì)作用產(chǎn)生的高頻噪聲和基線的無規(guī)則波動(dòng)。噪音的大小直接關(guān)系到儀器的檢測靈敏度，噪音越大，檢測的靈敏度就越低。對于檢測低含量的樣品就要求儀器的噪音越小越好,否則噪音過大將會導(dǎo)致基線不穩(wěn)，甚至影響分析結(jié)果。2.最小檢測濃度(最小檢測限）是反映儀器靈敏度的重要參數(shù).CL＝2×Nd×C/H(CL:最小檢測濃度Nd：噪音C：樣品濃度最小檢測濃度H：樣品峰高）由上式可見,最小檢測濃度是和噪音成正比的,噪音越大，最小檢測濃度就越大,靈敏度就越低.某些廠家回避了這個(gè)指標(biāo)，說明他們不愿在最小檢測濃度的基礎(chǔ)上去比較噪音。3．漂移是指儀器穩(wěn)定后一段時(shí)間內(nèi)基線漂離原點(diǎn)的距離，通常用來衡量儀器穩(wěn)定快慢.高品質(zhì)的儀器能在較短的時(shí)間內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，從而在一定程度上提高了分析效率.4.定性定量重復(fù)性主要是考核儀器穩(wěn)定性的指標(biāo)，這對于分析樣品來說是非常重要的.好的儀器其穩(wěn)定性應(yīng)該是十分優(yōu)秀的，這就要求多次進(jìn)樣保留時(shí)間及含量的一致性，這樣做出來的結(jié)果才能使人信服。有的朋友會認(rèn)為這些指標(biāo)好像都是檢測器的。對的，但是就前面所說條件是要放在整個(gè)回路和系統(tǒng)里去看去比較。例如:泵的脈動(dòng)會直接影響噪音指標(biāo)，泵的流量準(zhǔn)確度、精確度指標(biāo)，以及密封性不好也會影響相關(guān)指標(biāo)。所以要系統(tǒng)地看指標(biāo)。例如：某些公司在公布的指標(biāo)中,噪音和漂移指標(biāo)寫的條件是空池或有的干脆不寫.這個(gè)指標(biāo)只考核了UV檢測器光學(xué)和電氣的特性,與實(shí)際情況相差甚遠(yuǎn),并沒有考驗(yàn)泵的壓力脈動(dòng)，液流回路的阻尼和UV檢測器流通池的性能。所以我們認(rèn)為從以上的主要指標(biāo)中可以反應(yīng)出儀器的一些真實(shí)水平.二．操作方便:操作方便性無論是對新手還是成熟的用戶都是很重要的。操作越簡單,有利于提高分析效率,也為以后分析方法的拓展提供有力的幫助。上海伍豐科學(xué)儀器有限公司的WS-100工作站軟件實(shí)科曉儀器-－--精誠服務(wù)聯(lián)系電話:２880341２8技術(shù)服務(wù)中心：２-809科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料現(xiàn)了真正的智能化操作.它摒棄了以往工作站軟件只能起到數(shù)據(jù)處理的理念，率先在國內(nèi)推出了集控制與后處理于一身的軟件，在操作使用上給用戶帶來了極大的方便。三.系統(tǒng)的，整體開發(fā)這里指的是儀器的整體開發(fā)，是一個(gè)完整的系統(tǒng)。目前市場上有這個(gè)現(xiàn)象，說我的泵是進(jìn)口的，或者是檢測器怎么好，用了什么很多的進(jìn)口件組裝等等。其實(shí)這是個(gè)誤區(qū).液相色譜是個(gè)復(fù)雜的系統(tǒng),不是整體開發(fā)的,各項(xiàng)指標(biāo)之間、軟件和硬件、硬件和硬件等都不匹配，整體水平不會高到哪里去，而且在售后服務(wù)方面對用戶也是不負(fù)責(zé)任的。整體開發(fā)的主要優(yōu)點(diǎn)有:各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)統(tǒng)一、儀器各單元的通信協(xié)調(diào)、能夠建立一個(gè)整體的數(shù)字化評價(jià)系統(tǒng)、體現(xiàn)了企業(yè)的科技及開發(fā)實(shí)力.國外知名的儀器生產(chǎn)廠家的產(chǎn)品也是整體開發(fā)的,所以能夠保證儀器的整體水平。四．穩(wěn)定可靠,故障率低這個(gè)大家都知道，就不多說了。從以上各方面比較，伍豐儀器的LC－１０0智能液相色譜系統(tǒng)完全符合一臺優(yōu)秀儀器的所有特點(diǎn)，代表了目前國產(chǎn)液相色譜的真正水平。高效液相色譜系統(tǒng)中氣泡對檢測的影響及其解決方法在我們進(jìn)行液相色譜分析時(shí)，有時(shí)會遇到這樣一個(gè)問題：系統(tǒng)的流路中存在氣泡.由于氣泡的存在,會造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰，嚴(yán)重時(shí)會造成分析靈敏度下降；氣泡變大進(jìn)入流路或色譜柱時(shí)會使流動(dòng)相的流速變慢或不穩(wěn)定,使基線起伏。造成上述現(xiàn)象的主要原因有三條：一是流動(dòng)相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡；二是系統(tǒng)開始工作時(shí)未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈；三是在注入樣品時(shí)不注意混入了空氣.為了避免這類問題的出現(xiàn),液相色譜實(shí)際分析過程中必須重視對流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理。常用的脫氣方法有以下幾種：1.吹氦脫氣法使用在液體中比空氣溶解度低的氦氣，在０.1Mpa壓力下,以約60ml/ｍin流速通入流動(dòng)相１0-15ｍｉn以驅(qū)除溶解的氣體。此法使用于所有的溶劑,脫氣效果較好,但在國內(nèi)因氦氣價(jià)格較貴,本法使用較少;2。加熱回流法此法的脫氣效果較好；3。抽真空脫氣法此時(shí)可使用微型真空泵，降壓至０.０5－0．07ＭＰa即可除區(qū)溶解的氣體.顯然使用水泵連接抽濾瓶和G4微孔玻璃漏斗可一起完成過濾機(jī)械雜質(zhì)和脫氣的雙重任務(wù)。由于抽真空會引起混合溶劑組成的變化，故此法適用于單一溶劑體系脫氣.對多元溶劑體系應(yīng)預(yù)先脫氣后科曉儀器--—－精誠服務(wù)聯(lián)系電話：28８０3412８技術(shù)服務(wù)中心：2—809科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料再進(jìn)行混合,以保證混合后的比例不變.４.超聲波脫氣法它是目前實(shí)驗(yàn)室使用最廣泛的脫氣方法,將配制好的流動(dòng)相連同容器一起放入超聲波水漕中脫氣10—20ｍin即可.該方法操作簡便,基本能滿足日常分析的要求。5。在線真空脫氣法把真空脫氣裝置串聯(lián)到儲液系統(tǒng)中，并結(jié)合膜過濾器,實(shí)現(xiàn)了流動(dòng)相在進(jìn)入輸液泵前的連續(xù)真空脫氣.此法的脫氣效果明顯優(yōu)于上述幾種方法，并適用于多元溶劑體系。其二,在液相色譜系統(tǒng)開始工作前，可以用注射器連接恒流泵的排空閥,抽入流動(dòng)相，將流路中的空氣驅(qū)趕干凈。其三，在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣.液相色譜儀的最小檢測濃度和流通池光程的關(guān)系與含義某些國產(chǎn)儀器在公布其技術(shù)指標(biāo)時(shí)，大多只寫了"噪音和漂移"的指標(biāo).用戶覺得指標(biāo)都差不多，但卻忽略了另外二個(gè)較為重要的指標(biāo)："最小檢測濃度和光程",這二個(gè)指標(biāo)有什么作用呢？它們代表了什么含義？這里來解釋一下:最小檢測濃度是考驗(yàn)儀器的靈敏度.最小檢測濃度數(shù)值大，儀器的靈敏度就小，不能反應(yīng)真正的噪音和漂移水平。例如:我公司的最小檢測濃度小于1×1０-8g/ml（萘/甲醇溶液)，而某些儀器是:4×10-8g／ml（萘/甲醇溶液）.這就說明我們的儀器靈敏度大，可以檢測更微量的樣品。同樣如我公司儀器把最小檢測濃度調(diào)較得和其它產(chǎn)品是一樣，也就表明我們可以做得比其它產(chǎn)品噪音和漂移低4倍。可以從這個(gè)公式看出:最小檢測濃度=２×儀器的噪音×進(jìn)樣的樣品濃度／樣品的峰高值那光程又代表什么?我們先看下面一個(gè)公式，比爾定律：A=ｌｏg(I0/I）＝ΕclA是吸收率；I０代表參照池的光強(qiáng);Ｉ為樣品池的光強(qiáng);ε為摩爾吸光系數(shù)；Ｃ是樣品濃度;L就是流通池的光程?？梢钥闯鲈谕瑯拥?C”樣品濃度情況下,＂L”流通池的光程越大,儀器的＂A吸收率＂也就越大.這樣可以檢測到的樣品濃度就越小。為什么有些廠家把儀器的流通池光程做得很小，有些只有：3．5mm、4。5ｍｍ或5．5mｍ,而不是我公司的8mm.這是因?yàn)檫@些廠家不能有效的降低整個(gè)系統(tǒng)的”噪音和漂移水平”，只能犧牲流通池光程，也就是犧牲了儀器的檢測靈敏度和最小檢測濃度,來達(dá)到降低＂噪音和漂移水平”目的。用通俗的說法比喻：HPLＣ就是一臺音響，光程就是這臺音響的音量控制鍵,光程越小就是把音量調(diào)小了，耳朵對音響本身的噪音和失真(可以理解為儀器的噪音和漂移)感覺就越小.但也就說明了這些儀器整體系統(tǒng)的制造水平不高.知道了這些道理,你在挑選液相色譜儀時(shí)別忘了這二點(diǎn)哦。科曉儀器—精誠服務(wù)聯(lián)系電話:2８８0341２8技術(shù)服務(wù)中心：2-809科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料怎樣選擇色譜柱現(xiàn)代高效液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬,要做合適的選擇,必須對此有一定的認(rèn)識和了解.一。硅膠基質(zhì)填料:1.正相色譜正相色譜用的固定相通常為硅膠（Siｌica)以及其它具有極性官能團(tuán)，如胺基團(tuán)（ＮＨ2,ＡPＳ）和氰基團(tuán)（CＮ,CＰS)的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基（SｉOH）或其它極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此,分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動(dòng)相極性相對比固定相低,如：正己烷(Hexane）、氯仿（Ｃhｌorｏform）、二氯甲烷（MetｈylｅneCｈlｏrｉde）等。２。反相色譜反相色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì),表面鍵合有極性相對較弱的官能團(tuán)的鍵合相。反相色譜所使用的流動(dòng)相極性較強(qiáng)，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物.樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組份最先被沖洗出,而極性弱的組份會在色譜柱上有更強(qiáng)的保留。常用的反相填料有：C１8（ODS）、C8（MOＳ）、Ｃ4(Butyl）、C6Ｈ5(Phｅnｙｌ）等。二.聚合物填料聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優(yōu)點(diǎn)是在ｐH值為１～１4均可使用.相對于硅膠基質(zhì)的C１8填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性；大孔的聚合物填料對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)有的聚合物填料的缺點(diǎn)是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。三．其它無機(jī)填料其它ＨPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質(zhì),一般僅限于特殊的用途。如，石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料.這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體,又由于在HPLC流動(dòng)相中不會被溶解，這類柱可在任何pH與溫度下使用。氧化鋁也可用于HPLC，氧化鋁微粒剛性強(qiáng),可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可在pH高達(dá)１２的流動(dòng)相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應(yīng)用。新型氧化鋯基質(zhì)色譜填料也可用于ＨPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,應(yīng)用pH范圍1～14，溫度可達(dá)１00℃科曉儀器--－-精誠服務(wù)聯(lián)系電話：2８8０3４128技術(shù)服務(wù)中心：２—８０9科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料如何保證良好的柱性能與柱壽命

認(rèn)真閱讀色譜柱使用說明書；

使用填充良好的色譜柱;

盡量減少壓力波動(dòng)，避免機(jī)械及熱沖擊;

使用保護(hù)柱及在線過濾器;

經(jīng)常以強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱;

充分過濾樣品及流動(dòng)相，盡量避免雜質(zhì)微粒與強(qiáng)保留成分；

用穩(wěn)定的固定相（C18最穩(wěn)定）；

在中等ｐＨ值操作時(shí)(6～8）,用有機(jī)緩沖溶液；

色譜柱使用溫度最好小于40℃

硅膠基質(zhì)的的色譜柱,應(yīng)保持流動(dòng)相的pH值范圍在3。0～８。0；

在水流動(dòng)相與緩沖溶液中加200ｐpm的疊氮鈉;

流動(dòng)相中含有緩沖溶液，應(yīng)注意用９５:5的水及有機(jī)溶劑過渡，有機(jī)溶劑不能低于５％。

過夜或貯存時(shí)，沖洗掉鹽和緩沖液，用純有機(jī)溶劑流動(dòng)相保存（乙晴最好）。科曉儀器－—-—精誠服務(wù)聯(lián)系電話:28８034１２8技術(shù)服務(wù)中心：2—809科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料如何解決色譜柱使用過程中出現(xiàn)的問題一、保留值與分離度重現(xiàn)性不好原因分析問題原因表現(xiàn)不同色譜柱間差異使用期間柱變化填料、鍵合相不同柱床破壞鍵合相丟失硅膠基質(zhì)溶解強(qiáng)保留組分堆積堵塞保留因子（k)，分離因子（ａ）柱效（N)保留因子（k）,分離因子（a)柱效(N)保留因子（k）,柱效(Ｎ)柱外效應(yīng)系統(tǒng)差異、進(jìn)樣量大、進(jìn)樣閥與色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。柱效（Ｎ）分離效果變差流動(dòng)相組分改變流速改變溫度改變保留因子(k），柱效變化很小保留因子(ｋ），分離因子（ａ)保留因子(ｋ),柱效變化很小柱平衡慢重新平衡時(shí)間不夠保留因子(k)，柱效變化很小柱超載樣品量太大保留因子(k)，柱效(N）二、造成色譜峰（不對稱）拖尾的原因1．色譜柱本身填裝問題，篩板堵塞或填料塌陷；2.柱頭有污染;3。樣品超載；4.樣品溶劑不合適；5．柱外效應(yīng);科曉儀器－精誠服務(wù)聯(lián)系電話：2８８０34１２８技術(shù)服務(wù)中心:2—809科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料6?；瘜W(xué)或二次保留(硅羥基)效應(yīng)；7.緩沖容量不足或不合適；8。重金屬污染。三、如何解決峰形拖尾的問題Ａ.與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題１．流動(dòng)相中,加入30mM的三乙胺（用于堿性化合物）或醋酸胺（用于酸性化合物)，未知化合物加醋酸三乙胺；2。如仍然拖尾，將三乙胺換為二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；3。降低進(jìn)樣量至＜1μg.B.與色譜柱有關(guān)的拖尾問題1．如柱頭處有強(qiáng)保留的樣品組分積聚,反相柱可用2０倍柱體積的9６％的二氯甲烷與4％甲醇，加１%氫氧化銨混合液沖洗；正向柱可用甲醇沖洗;2。使用保護(hù)柱。C.與ＨPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬1。進(jìn)樣體積過大，（通?！?5μL）;２。進(jìn)樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大(最佳連接管應(yīng)〈20ｃm,內(nèi)徑為0.0０7"）;3.檢測器流通池的體積過大。四、如何貯存色譜柱1。防止緩沖溶液和水溶液流動(dòng)相產(chǎn)生微生物，做到流動(dòng)相用多少配多少,或在水流動(dòng)相中加200ppm的疊氮鈉以抑制細(xì)菌生長（一定當(dāng)心其毒性和潛在的爆炸性）;或在流動(dòng)相中加20%的有機(jī)改性劑,也可抑制微生物生長，有機(jī)改性劑還有助于流動(dòng)相脫氣.2.盡可能將色譜柱貯存于100％有機(jī)溶劑（乙晴最好）中,避免在緩沖溶液中保存.3．使用緩沖溶液后的色譜柱，應(yīng)用１5～20倍柱體積的不含緩沖劑的同種水—有機(jī)溶劑流動(dòng)相沖洗色譜柱,后換成10０％有機(jī)溶劑貯存。4．避免用純水沖洗鍵合致密的Ｃ1８柱。5。將色譜柱的兩端用堵頭擰好,以免柱床填料干裂?？茣詢x器———-精誠服務(wù)聯(lián)系電話:２880341２8技術(shù)服務(wù)中心：2—８０9科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料如何選擇保護(hù)柱

怎樣選擇保護(hù)柱,但又不影響分離分析？這是色譜工作者經(jīng)常提出的一個(gè)問題。通常，在選擇保護(hù)柱之前首先要考慮的是樣品是否清潔。對于大部分分析工作者來說,一只1ｃm長的保護(hù)柱便能提供充分的保護(hù)作用.但是,如果樣品非常不清潔,或工作中發(fā)現(xiàn)要經(jīng)常更換１cm的保護(hù)柱，那么就應(yīng)選擇2cm或3cm長的保護(hù)柱.保護(hù)柱越長,自然所裝填的色譜填料越多，則其越能避免污染物進(jìn)入分析色譜柱的機(jī)會。當(dāng)然，隨著保護(hù)柱的長度加長,樣品的保留時(shí)間會比使用短保護(hù)柱長。一般來說，保護(hù)柱的內(nèi)徑與分析色譜柱的內(nèi)徑相同或相當(dāng)即可。保護(hù)柱的填料裝填方式也很重要。目前有薄膜裝填法的保護(hù)柱,使用過程很簡單方便，而且可以在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行干裝。但是，其最大的缺點(diǎn)是不經(jīng)濟(jì),特別是針對中國的具體情況,一次性使用相對費(fèi)用較高。另外，薄膜裝填法的保護(hù)柱所裝填的色譜填料有限，只能提供很有限的保護(hù)作用；不過也因?yàn)樗b填的色譜填料較少,保護(hù)柱的長度也較短,所以對分析樣品的保留時(shí)間的影響也很小。另一種保護(hù)柱結(jié)構(gòu)其實(shí)質(zhì)是縮短了的色譜分析柱，設(shè)計(jì)方式上有直連式、手緊式或整體式。整體式設(shè)計(jì)是由色譜柱的生產(chǎn)廠商直接安裝在色譜分析柱上的,必須與色譜分析柱一同訂貨，可以非常方便地使用，但不能夠被修改。直連式結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)可在任何時(shí)候由色譜工作者來安裝連接,可以與任何品牌的色譜分析柱連接使用，而且還可以根據(jù)樣品的相關(guān)情況選擇不同的保護(hù)柱長度。手緊式保護(hù)柱從結(jié)構(gòu)上講是與直連式保護(hù)柱一樣,只是在連接時(shí)不需要借助扳手等工具，直接用手上緊即可。另外從保護(hù)柱結(jié)構(gòu)的角度看，保護(hù)柱的結(jié)構(gòu)又分為是否可以更換保護(hù)柱柱芯。現(xiàn)在大多數(shù)的保護(hù)柱均可以更換保護(hù)柱柱芯，可以降低保護(hù)柱的使用成本。大多數(shù)人是根據(jù)色譜分析柱的填料選擇保護(hù)柱的填料，正常情況下可以選擇與分析色譜柱一樣的色譜填料.但是，根據(jù)實(shí)際的分析工作，也可不必與分析色譜柱的填料完全相匹配。對于選擇保護(hù)柱的原則是:在滿足分析分離要求的前提條件下,盡可能地選擇較短的保護(hù)柱結(jié)構(gòu)，盡可能選擇對分離樣品小一些保留性的填料?？茣詢x器－-－－精誠服務(wù)聯(lián)系電話:288０３4128技術(shù)服務(wù)中心:2－80９科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料液相色譜柱使用注意事項(xiàng)色譜柱在使用前,最好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考.但要注意:柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行(出廠測試所使用的條件是最佳條件），只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。１、樣品的前處理:a、最好使用流動(dòng)相溶解樣品。b、使用予處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。c、使用0.45μｍ的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì).2、流動(dòng)相的配制：液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達(dá)到分離的目的,因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：a、流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中(或長時(shí)間保留在柱中）。ｂ、流動(dòng)相具有一定惰性,與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)（特殊情況除外)。c、流動(dòng)相的黏度要盡量小,以便在使用較長的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長液體泵的使用壽命（可運(yùn)用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）.d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應(yīng)。如使用UV檢測器，最好使用對紫外吸收較低的溶劑配制。ｅ、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡,導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。f、在流動(dòng)相配制好后,一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。3、流動(dòng)相流速的選擇：因柱效是柱中流動(dòng)相線性流速的函數(shù)，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求最佳柱效，最好使用最佳流速。對內(nèi)徑為4。6ｍm的色譜柱,流速一般選擇１ml／miｎ，對于內(nèi)徑為4。0mｍ柱,流速0.8ml/min為佳。當(dāng)選用最佳流速時(shí),分析時(shí)間可能延長。可采用改變流動(dòng)相的洗滌強(qiáng)度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量）。注意：a．由于甲醇廉價(jià),對于反相柱推薦使用甲醇體系（必須使用乙腈的場合除外)。b．對于正相柱推薦使用沸程為3０—60ｃ。含水流動(dòng)相最*在實(shí)驗(yàn)前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要過夜。最好加入疊氮化鈉，防止細(xì)菌生長。d。流動(dòng)相要求使用0。4５μm濾膜過濾，除去微粒雜質(zhì)。e．使用HPLＣ級溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長色譜柱的使用壽命,提高柱性能科曉儀器--－—精誠服務(wù)聯(lián)系電話：288034１28技術(shù)服務(wù)中心：2-8０9科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料液相色譜儀色譜柱使用及維護(hù)每天用足夠的時(shí)間來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得最大的”補(bǔ)償”,而且您的色譜柱的壽命也會變得更長?。欢ǖ米觯?

新的色譜柱在使用之前應(yīng)該在您自己的液相色譜儀上進(jìn)行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗(yàn)報(bào)告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且,在以后的使用中,應(yīng)時(shí)常對色譜柱進(jìn)行測試。?

卡套柱的安裝（不加預(yù)柱）1．將卡套架套入柱芯

2．將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使柱芯高于夾套(見左圖)?

3.將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片?

４。將卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手?jǐn)Q緊

5。然后依同樣的順序連接好柱子的另一端?

6.連接到液相色譜儀，ＰEEK接頭手?jǐn)Q即可;若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專用扳手?

注意:使用卡套柱時(shí)，兩端的卡套應(yīng)時(shí)刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗，任何時(shí)候都不能將卡套取下來,否則會造成填料的流失.?

卡套柱的安裝（加預(yù)柱)?

1．將卡套架套入柱芯?

2.將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽，使夾套高于柱芯（見左圖）

３．將已套到柱芯上的卡套架向上推，直至高過夾套片?

4.將"子彈頭”預(yù)柱放入卡套片內(nèi)?

5。將卡套帽和卡套架旋在一起，然后用手?jǐn)Q緊?

６．然后依同樣的順序連接好柱子的另一端?

7．連接到液相色譜儀，ＰEＥＫ接頭手?jǐn)Q即可;若為不銹鋼接頭應(yīng)使用專用扳手

更換色譜柱濾網(wǎng)和玻璃棉過濾片(同時(shí)可以修補(bǔ)色譜柱）?

注意:在取出反相柱芯的濾網(wǎng)和玻璃片之前,應(yīng)該將色譜柱充分用水和甲醇／乙腈沖洗,而且修補(bǔ)工具的頭部也應(yīng)該蘸取少量的甲醇/乙腈,以避免在取出濾網(wǎng)和玻璃棉濾片時(shí)帶出柱子內(nèi)的填料。

１.將修補(bǔ)工具中的2套入柱芯的頂端

２．將修補(bǔ)工具中的3輕輕地旋入已套著2的柱芯中，并順時(shí)針方向旋轉(zhuǎn)到旋緊?

3。一手握柱芯，另一只手輕輕地向外拉3，取出柱芯頂端的濾網(wǎng)

4.用一個(gè)小鏟子輕輕地取出濾網(wǎng)下面的玻璃棉以及被污染的填料?

5。將新的填料用甲醇潤濕，然后填入挖去的部位，壓平?

6．照(左圖）裝上新的玻璃棉濾網(wǎng)，并用修補(bǔ)工具中的4將玻璃棉壓入柱芯頂端?

７。柱芯頂端套上２，然后參照（左圖）將濾網(wǎng)放入?

８。壓緊，然后取下2，再用4將濾網(wǎng)的邊緣壓平

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平衡色譜柱反相色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在乙腈/水中的。請一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲存或運(yùn)輸過程中可能會干掉,因此在用流動(dòng)相分析科曉儀器－－-－精誠服務(wù)聯(lián)系電話:28８0341２8技術(shù)服務(wù)中心：２—80９科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料樣品之前，應(yīng)使用10－20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱;如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水”過渡＂.

硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相,請?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡?

如何平衡色譜柱？?

平衡過程中，將流速緩慢地提高?

用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線（緩沖鹽或離子對試劑度如果較低，則需要較長的時(shí)間來平衡)

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色譜柱的再生進(jìn)行色譜柱再生時(shí)，應(yīng)使用一個(gè)謙價(jià)的泵，我們建議最好不使用您的高效液相色譜儀上的泵.?

?

表1建議用來沖洗的溶劑體積

色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積

１2５—41.6ml３０ml

25０—43。2mｌ60ml

250-10—20ml40０ml?

請根據(jù)下表選擇您的再生方法：

極性固定相(如Ｓi,NＨ2＊，ＤIOL基色譜填料）的再生：?

正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**?

非極性固定相（如反相色譜填料RＰ－18，RP－8，CN等）的再生：?

水→乙腈→氯仿(或異丙醇)→乙腈→水?

0.０５M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱

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注意：?

在對ＮＨ2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能成銨根離子的形式存在，因此應(yīng)該在水洗后用０.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。

＊*如果簡單的有機(jī)溶劑／水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì),用0．05Ｍ稀硫酸沖洗非常有效。?

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色譜柱的維護(hù)

1．使用預(yù)柱保護(hù)分析柱(硅膠在極性流動(dòng)相/離子性流動(dòng)相中有一定的溶解度）

2．大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是２—７．5,盡量不超過該色譜柱的pH范圍?

3．避免流動(dòng)相組成及極性的劇烈變化?

４．流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理?

5.如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢柱子沖洗干凈,并保存大乙腈中?

６。壓力升高是需要更換預(yù)柱的信號科曉儀器-——-精誠服務(wù)聯(lián)系電話：２88０34１２8技術(shù)服務(wù)中心:2—８09科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料液相色譜儀的保養(yǎng)1。ＨPLC的日常操作條件：溫度：10—30℃2。泵的保養(yǎng):1）使用流動(dòng)相盡量要清潔；2）進(jìn)液處的沙芯過濾頭要經(jīng)常清洗;3）流動(dòng)相交換時(shí)要防止沉淀；4）避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡;３.進(jìn)樣器的保養(yǎng):每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進(jìn)樣口，防止樣品的交叉污染；4。柱的保養(yǎng)：1)柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強(qiáng)烈震動(dòng);2)當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時(shí),閥件或管路一定要清洗干凈；３)要注意流動(dòng)相的脫氣；4）避免使用高粘度的溶劑作為流動(dòng)相；5)進(jìn)樣樣品要提純；6）嚴(yán)格控制進(jìn)樣量；7）每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品；8)每天分析測定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗?）若分析柱長期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機(jī)溶劑保存并封閉；5．檢測器（ＵV）的保養(yǎng)：1)紫外燈的保養(yǎng):在分析前、柱平衡得差不多時(shí),打開檢測器;在分析完成后,馬上關(guān)閉檢測器。2）樣品池要保養(yǎng)?？茣詢x器-——-精誠服務(wù)聯(lián)系電話：28８０341２8技術(shù)服務(wù)中心：2—８0９科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料高效液相色譜日常簡易保養(yǎng)及維護(hù)１、流動(dòng)相的抽作要求:高效液相級色譜醇，二次蒸餾水,緩沖鹽一定要過濾；流動(dòng)相脫氣至關(guān)重要（可采用抽濾，超聲波脫氣等方法）2、吸濾頭:特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞；亦可用注射器吸取流動(dòng)相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗；清洗不成功則需要更換。３、單向閥：如遇到泵壓不穩(wěn)或流動(dòng)相不能抽取,則可能是單向閥出現(xiàn)問題,卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時(shí)須按其安裝的方向放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗！4、泵頭：泵頭漏液或出現(xiàn)其它故障一般要申請維修（如漏液,或更換柱塞桿及其密封墊等)5、過濾器：當(dāng)色譜峰出現(xiàn)異常情況時(shí),有可能是此部件被污染，拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片.6、排液閥：此處不能完全密封或漏液時(shí)一般是其中的墊片污染或磨損，可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。７、手動(dòng)進(jìn)樣器：平時(shí)應(yīng)注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態(tài)及進(jìn)樣分析狀態(tài)清洗；如出現(xiàn)漏液現(xiàn)象,原因極可能為轉(zhuǎn)子密封墊磨損或污染,一般須申請維修或更換配件。8、流通池：在色譜峰不正常時(shí)會可能是此部件補(bǔ)污染?？刹鹦逗笕〕銎渲械膲|片用異丙醇超洗(可根據(jù)說明書進(jìn)行操作或申請維修）。9、工作站：出現(xiàn)死機(jī)可重起計(jì)算機(jī)；不正常運(yùn)行時(shí)，首先可更換電腦測試其硬件故障；或在本機(jī)上重新插拔接口、重新安裝軟件。泵壓不穩(wěn)１、泵頭有氣泡—-流動(dòng)相脫氣／大流量沖洗泵／用注射器抽取流動(dòng)動(dòng)相2、單向閥故障--清洗若上述操作仍不能解決，可用異丙醇沖洗流動(dòng)（無色譜柱沖洗,由手動(dòng)進(jìn)樣器直接進(jìn)檢測器)，科曉儀器－－—-精誠服務(wù)聯(lián)系電話:２88034１28技術(shù)服務(wù)中心:2－８0９科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料流量為3－4mｌ/min，沖洗50分鐘左右,然后重新安裝色譜柱，更換流動(dòng)相平衡，如此再不能解決泵壓波動(dòng)故障，可申請更換配件。流動(dòng)相含有鹽分時(shí)，做完實(shí)驗(yàn)后一定要進(jìn)行流路沖洗；首先用水沖洗，打開排液閥用PURG鍵轉(zhuǎn)換出原有含鹽的流動(dòng)相,然后關(guān)閉排液閥打開泵沖洗全部流路45分鐘以上,如此更換流動(dòng)相為水和甲醇混合液沖洗全部流路30分鐘(此步驟一般可省去，根據(jù)實(shí)驗(yàn)而論)，最后更換純甲醇沖洗全部流路４5分鐘以上。泵頭沖洗用備件中的針頭和針管分別用蒸餾水和純甲醇沖洗３-5mｌ。如流動(dòng)相不含鹽,可對機(jī)器定期進(jìn)行簡單的沖洗維護(hù),根據(jù)實(shí)驗(yàn)多少而定。手動(dòng)進(jìn)樣器沖洗同樣用備件中的針管和專用沖洗針頭對手動(dòng)進(jìn)樣器的裝載狀態(tài)和進(jìn)樣狀態(tài)分別進(jìn)行沖洗3-4ml的蒸餾水,然后再沖洗3-4ml的純甲醇。確保每次做完實(shí)驗(yàn)，所有流路中充滿純甲醇！色譜的保養(yǎng)C１８柱絕對不能進(jìn)蛋白樣品、血樣，生物樣品.要注意柱子的ＰＨ值范圍,不得注射強(qiáng)酸強(qiáng)堿的樣品，特別是堿性樣品。長時(shí)間不用儀器，應(yīng)該將柱子取上用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應(yīng)該用有機(jī)相(如甲醇）保存,因?yàn)榧兯组L霉。流路堵塞問題堵塞導(dǎo)致壓力太大,按預(yù)柱→混合器中的過濾器→管路過濾器→單向閥檢查，并清洗。清洗方法:①以民丙醇作溶劑沖洗②放在異丙醇中超聲波清洗③用１0％稀硝酸清洗.科曉儀器—-—-精誠服務(wù)聯(lián)系電話：２88034128技術(shù)服務(wù)中心:２—809科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料HＰLC六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)六通閥進(jìn)樣器是高效液相色譜系統(tǒng)中最理想的進(jìn)樣器,它是由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座（定子）組成。美國Rhｅｏdyｎe公司的六通閥進(jìn)樣器最為通用，各大HPLC儀器制造商均以此產(chǎn)品作為儀器的進(jìn)樣器.工作原理:１、手柄位進(jìn)樣（Load）位置時(shí),樣品經(jīng)微量進(jìn)樣針從進(jìn)樣孔注射進(jìn)定量環(huán),定量環(huán)充滿后,多余樣品從放空孔排出;２、將手柄轉(zhuǎn)動(dòng)至進(jìn)樣（Iｎjｅｃt）位置時(shí),閥與液相流路接通,由泵輸送的流動(dòng)相沖洗定量環(huán),推動(dòng)樣品進(jìn)入液相分析柱進(jìn)行分析.雖然六通閥進(jìn)樣器具有結(jié)構(gòu)簡單、使用方便、壽命長、日常無需維修等特點(diǎn),但正確的使用和維護(hù)將能增加使用壽命，保護(hù)周邊設(shè)備,同時(shí)增加分析準(zhǔn)確度.如使用得當(dāng)?shù)脑?六通閥進(jìn)樣器一般可連續(xù)進(jìn)樣３萬次而無需維修.以下淺談?dòng)嘘P(guān)六通閥進(jìn)樣器的使用及保養(yǎng)事宜（僅供參考):１、手柄處于Load和Ｉｎjeｃt之間時(shí),由于暫時(shí)堵住了流路，流路中壓力驟增，再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位，過高的壓力在柱頭上引起損壞，所以應(yīng)盡快轉(zhuǎn)動(dòng)閥，不能停留在中途.在ＨＰLC系統(tǒng)中使用的注射器針頭有別于氣相色譜,是平頭注射器。一方面，針頭外側(cè)緊貼進(jìn)樣器密封管內(nèi)側(cè)，密封性能好,不漏液，不引入空氣；另一方面，也防止了針頭刺壞密封組件及定子。2、六通閥進(jìn)樣器的進(jìn)樣方式有部分裝液法和完全裝液法兩種。使用部分裝液法進(jìn)樣時(shí),進(jìn)樣量最多為定量環(huán)體積的75%,如20ｇL的定量環(huán)最多進(jìn)樣15p，L的樣品,并且要求每次進(jìn)樣體積準(zhǔn)確、相同;使用完全裝液法進(jìn)樣時(shí),進(jìn)樣量最少為定量環(huán)體積的3至５倍,即20ｇＬ的定量環(huán)最少進(jìn)樣60至１001aL的樣品，這樣才能完全置換樣品定量環(huán)內(nèi)殘留的溶液，達(dá)到所要求的精密度及重現(xiàn)性。推薦采用1００ul的平頭進(jìn)樣針配合２0ul滿環(huán)進(jìn)樣。3、可根據(jù)進(jìn)樣體積的需要自已制作定量環(huán)，一般不要求精確計(jì)算定量環(huán)的體積,譬如,一根名義上１０gL的定量環(huán),實(shí)際是９ｇL還是１lgL并不重要，因?yàn)楸粶y樣品和校正樣品的進(jìn)樣體積保持一致，在計(jì)算結(jié)果時(shí)誤差都被抵消了。４、進(jìn)樣樣品要求無微粒和能阻死針頭及進(jìn)樣閥的物質(zhì)，樣品溶液均要用0．４5～tm的濾膜過濾.防止微粒阻塞進(jìn)樣閥和減少對進(jìn)樣閥的磨損.為防止緩沖鹽和其它殘留物質(zhì)留在進(jìn)樣系統(tǒng)中，每次結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣器，通常用不含鹽的稀釋劑、水或不含鹽的流動(dòng)相沖洗，在進(jìn)樣閥的Load和Inｊect位置反復(fù)沖洗,再用無纖維紙擦凈注射器針頭的外側(cè)?？茣詢x器－－－-精誠服務(wù)聯(lián)系電話:288034128技術(shù)服務(wù)中心：2－809科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料高效液相色譜常見故障的斷定及解決（一)保留時(shí)間變化１．柱溫變化柱恒溫，必要時(shí)需配置恒溫箱2．等度與梯度間未能充分平衡至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱3．緩沖液容量不夠用>25ｍmｏｌ/L的緩沖液4．柱污染每天沖洗柱5.柱內(nèi)條件變化穩(wěn)定進(jìn)樣條件，調(diào)節(jié)流動(dòng)相6.柱快達(dá)到壽命采用保護(hù)柱(二）保留時(shí)間縮短１．流速增加檢查泵，重新設(shè)定流速２.樣品超載降低樣品量3．鍵合相流失流動(dòng)相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向4．流動(dòng)相組成變化防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀5.溫度增加柱恒溫（三)保留時(shí)間延長1.流速下降管路泄漏，更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡2．硅膠柱上活性點(diǎn)變化用流動(dòng)相改性劑，如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱3.鍵合相流失同前(二)34。流動(dòng)相組成變化同前（二)４5.溫度降低同前(二）5（四)出現(xiàn)肩峰或分叉1.樣品體積過大用流動(dòng)相配樣，總的樣品體積小于第一峰的15%2.樣品溶劑過強(qiáng)采用較弱的樣品溶劑3.柱塌陷或形成短路通道更換色譜柱，采用較弱腐蝕性條件4。柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品5.進(jìn)樣器損壞更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子(五）鬼峰1。進(jìn)樣閥殘余峰每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥，改進(jìn)閥和樣品的清洗2。樣品中未知物處理樣品3。柱未平衡重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑(尤其是離子對色譜)４。三氟乙酸（TFＡ)氧化(肽譜）每天新配，用抗氧化劑5。水污染（反相)通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量，用ＨPLC級的水科曉儀器--—－精誠服務(wù)聯(lián)系電話：2８803412８技術(shù)服務(wù)中心:2-80９科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料（六)基線噪聲1.氣泡（尖銳峰）流動(dòng)相脫氣，加柱后背壓2．污染(隨機(jī)噪聲）清洗柱，凈化樣品,用HPLC級試劑3。檢測器燈連續(xù)噪聲更換氘燈4.電干擾(偶然噪聲)采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源（如水浴等）5.檢測器中有氣泡流動(dòng)相脫氣，加柱后背壓(七)峰拖尾1.柱超載降低樣品量，增加柱直徑采用較高容量的固定相２。峰干擾清潔樣品，調(diào)整流動(dòng)相3。硅羥基作用加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相PＨ值，鈍化樣品４。死體積或柱外體積過大連接點(diǎn)降至最低,對所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整，盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管５。柱效下降用較低腐蝕條件，更換柱,采用保護(hù)柱（八)峰展寬1．進(jìn)樣體積過大同（四）１2.在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散３．?dāng)?shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢設(shè)定速率應(yīng)是每峰大于10點(diǎn)4.檢測器時(shí)間常數(shù)過大設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10%5.流動(dòng)相粘度過高增加柱溫，采用低粘度流動(dòng)相6。檢測池體積過大用小體積池，卸下熱交換器７。保留時(shí)間過長等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫8．柱外體積過大將連接管徑和連接管長度降至最小9。樣品過載進(jìn)小濃度小體積樣品科曉儀器－-——精誠服務(wù)聯(lián)系電話:2880３4128技術(shù)服務(wù)中心:2-80９科曉化工儀器有限公司色譜技術(shù)培訓(xùn)資料高效液相色譜儀的幾個(gè)使用問題

1。色譜柱中的流動(dòng)相會排干嗎？

不少做色譜分離試驗(yàn)的人遇