細(xì)胞常見污染情況分析

僅供個(gè)人參考細(xì)胞養(yǎng)常污染判別應(yīng)對(duì)措施2011-01-0210:19:04|分類：

|標(biāo)簽：污染

|號(hào)大中小訂閱一、避免細(xì)胞培養(yǎng)污染的措施：污染是細(xì)胞培養(yǎng)中一個(gè)大敵，一旦污染，前功盡棄！決定要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，首先一定要有強(qiáng)烈的無(wú)菌意識(shí)！操作中要遵守嚴(yán)格的操作規(guī)程，不要怕麻煩，越細(xì)心越好！注意以下幾點(diǎn)，大部份的污染是可以避免的：1.每次開始實(shí)驗(yàn)前先用紫外照無(wú)菌臺(tái)和實(shí)驗(yàn)室20分，用酒精擦手臺(tái)和不消毒的器（如移液槍等）；實(shí)驗(yàn)中，如允許，盡量多過(guò)火，開起或蓋蓋都靠近火焰或在無(wú)菌臺(tái)深處；使用無(wú)菌臺(tái)后，再用酒精擦臺(tái)面，紫外照20分！2.滴管不要接觸瓶口，吸取廢液及加入新鮮培養(yǎng)基時(shí)都要注意不要滴在瓶口上等等。3.凡是接觸瓶口后都要用酒精燈燒燒。4.提取組織時(shí)往往頭會(huì)距離組織很近所以帶口罩很重要還要換無(wú)菌（紫外照過(guò)的白大褂。5.注意配制完全培養(yǎng)基時(shí)不要發(fā)生污染，在使用前一定要做無(wú)菌培養(yǎng)，因?yàn)橐话銘?yīng)用污染后的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞后，很快就會(huì)發(fā)生特別嚴(yán)重的污染。6.操作時(shí)一定按照實(shí)驗(yàn)室的要求，切忌粗心大意。7.使用完的東西盡快移出無(wú)菌臺(tái)！另外無(wú)菌臺(tái)上的器械，試劑擺放，也盡量遵循一定的順序！依污染可能程度依次向外擺。二、常見的細(xì)胞培養(yǎng)污染：下面是幾種細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中常見的污染：1.支原體污染：傳說(shuō)中的黑焦蟲，長(zhǎng)得暴快。小時(shí)就滿視野都是了。污染源大多數(shù)情況下是培養(yǎng)用血清。圖1支原體污染的光鏡檢測(cè)（圓圈所示，×10倍）圖2支原體污染的光鏡檢測(cè)（×20倍）圖3支原體污染的熒光檢測(cè)圖4支原體污染的電鏡檢測(cè)（×30k，煎狀和其他形狀）圖5支原體污染的電鏡檢測(cè)2.念珠菌污染：似乎無(wú)處不在，而且頑固得很。長(zhǎng)得暴快12h就在細(xì)胞上面密布）。培養(yǎng)液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細(xì)胞上，高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。圖6念珠菌污染的光鏡檢測(cè)（低倍鏡）圖7念珠菌污染的光鏡檢測(cè)（高倍鏡）不得用于商業(yè)用途

僅供個(gè)人參考圖8念珠菌污染的光鏡檢測(cè)（高倍鏡）圖9念珠菌污染的檢測(cè)（革蘭氏染色陽(yáng)性）這么大面積的污染，你可以看看是不是操作上出了問題，要不然就是培養(yǎng)基的問題。既然已經(jīng)污染了，就全部更換你的器皿。培養(yǎng)箱的水沒有必要用無(wú)菌水，但最起碼要是蒸餾水。3.菌污染比較常見的一種污染，常常來(lái)源于污染的空氣、水和器械。圖10霉菌污染的光鏡檢測(cè)（低倍）圖11霉菌污染的光鏡檢測(cè)（典型的霉菌污染，肉眼看到白色的團(tuán)塊或白點(diǎn)，鏡下呈絲狀。倍）圖12霉菌污染的光鏡檢測(cè)（樹枝狀，高倍）圖13霉菌污染的倒置顯微鏡檢測(cè)（樹枝狀）4.桿菌污染：培養(yǎng)基中加入抗生素可以減少此種污染，但也不是絕對(duì)的。圖14桿菌污染的光鏡檢測(cè)（瑞氏染色，高倍）圖15桿菌污染的光鏡檢測(cè)（瑞氏染色，低倍）細(xì)胞中的顆粒到底是怎么回事？我的細(xì)胞總有顆粒，開始是細(xì)胞中有，后來(lái)細(xì)胞之間也好像有許多顆粒。好像是細(xì)胞碎片一樣。是什么東西??？是支原體污染嗎？這可是我剛買回來(lái)的細(xì)胞啊我們實(shí)驗(yàn)室也有這種情況，是不是黑的小碎片，有人說(shuō)是細(xì)胞代謝產(chǎn)物，后來(lái)拿到高倍鏡下看還會(huì)動(dòng)，就懷疑是污染了，也想問問大家到底是什么是黑色的小碎片。我沒注意到它會(huì)動(dòng)，只是覺得不像是活的微生物。我覺得是由于某種污染或外界因素導(dǎo)致的細(xì)胞狀態(tài)變差，裂解出的東西。但是，是什么東西不清楚。的確很常見在以前帖子見到說(shuō)是“黑焦蟲”長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)的很容易出現(xiàn)，我根據(jù)自己的經(jīng)驗(yàn)估計(jì)是一種污染，因?yàn)殡S著黑點(diǎn)增多，本來(lái)生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞逐漸停滯甚至死亡。而且我后來(lái)原代培養(yǎng)的幾批細(xì)胞并沒有發(fā)現(xiàn)，我懷疑有好多細(xì)胞系本身就是污染的過(guò)增加換液次數(shù)的情況下象一般不太嬌氣的細(xì)胞生長(zhǎng)不是很受影響。以前聽很有經(jīng)驗(yàn)的老師說(shuō)黑焦蟲是國(guó)產(chǎn)血清的問題，可以有條件換進(jìn)口血清試試，或者離心一下也可能能解決問題。那么所謂的“黑焦蟲”底是什么東西??？有誰(shuí)知道？我培養(yǎng)的細(xì)胞也出現(xiàn)過(guò)此中問題，放到高倍鏡下看時(shí)有東西在動(dòng)，但培養(yǎng)液不混濁，估計(jì)不是細(xì)菌污染，可能是血清問題，是支原體污染。我培養(yǎng)的細(xì)胞也出現(xiàn)過(guò)這樣的問題，我個(gè)人認(rèn)為是一種支原體污染。國(guó)產(chǎn)血清是罪魁禍?zhǔn)?，因?yàn)橹灰獙⒓?xì)胞饑餓一下，不超過(guò)24小時(shí)，這種東西就會(huì)瘋長(zhǎng)我培養(yǎng)的細(xì)胞也有出現(xiàn)這中情況。但是并不影響細(xì)胞生長(zhǎng)。應(yīng)該不是支原體污染不得用于商業(yè)用途

僅供個(gè)人參考最近，我復(fù)蘇細(xì)胞細(xì)胞的時(shí)候也發(fā)現(xiàn)過(guò)這樣的東西，盡管我用的是的FBS，后來(lái)，每天換液之前洗幾遍后，就慢慢變少，現(xiàn)在沒了細(xì)胞培養(yǎng)的細(xì)菌污染我們新建的細(xì)胞室。每周都會(huì)做清潔，用2%新潔爾滅消毒，照外。實(shí)驗(yàn)前也會(huì)照至少30分鐘。培養(yǎng)基中加青霉素，鏈霉素?？墒桥囵B(yǎng)細(xì)胞時(shí)還是常有細(xì)菌污染，有時(shí)甚至分析不出原因。用培養(yǎng)瓶還好一點(diǎn)，用多孔板或平皿就更凄慘。我養(yǎng)的是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，不知各位有什么好的方法避免污染！謝謝！很可能是超凈臺(tái)無(wú)效了，，或者培養(yǎng)基？其實(shí)嚴(yán)格操作箱污染都難我們是新的超凈臺(tái)，不可能失效。而且用同一瓶培養(yǎng)基，一瓶傳兩瓶，原始的一瓶污染，新傳的很好。所以我分析不出原因呀那么假如把原始的那瓶換新瓶養(yǎng)可以么？都污染了，我仍還來(lái)不及，那還敢換新瓶染菌有很多原因，因?yàn)檎麄€(gè)細(xì)胞操作過(guò)程均要求無(wú)菌，所以看看操作是否規(guī)范，例如戴手套等。多半是環(huán)境因素，做點(diǎn)平板，操作時(shí)放在幾個(gè)地方，培養(yǎng)后看看長(zhǎng)菌情況。消毒用新潔爾滅好象不是太有用。人是最大的污染源，不知你做好手部的消毒工作以及戴口罩沒有，其實(shí)，只要你操作的好，嚴(yán)格在靠近火的附近操作，污染的幾率是很小的。從你的描述中可以看出培養(yǎng)基應(yīng)該沒有問題，新的一瓶很好，老的一瓶污染，只有操作不當(dāng)引起的，還需要加強(qiáng)練手。求助！關(guān)于細(xì)胞培養(yǎng)中的真菌污染！感激！先謝謝大家的幫助！現(xiàn)在細(xì)胞培養(yǎng)基里出現(xiàn)了很多白色和黑色的小點(diǎn)，有好長(zhǎng)的時(shí)間了！細(xì)胞的形態(tài)看起來(lái)不太好但是有些胞也長(zhǎng)的很好如成纖維細(xì)胞是內(nèi)皮細(xì)胞就差很多加大量的抗生素沒效果！不知道是不是真菌污染，怎么鑒別！因?yàn)榕囵B(yǎng)了很長(zhǎng)時(shí)間都沒有出現(xiàn)真菌的菌絲，所以不能肯定是真菌！那些白色的小圓點(diǎn)有點(diǎn)象白色鏈球菌或鏈珠菌是不能確定么樣才能判斷確定改用什么辦法解決！謝謝大家的幫助！殺滅真菌聽說(shuō)用兩性霉素，但從沒試過(guò)。真菌污染是件很麻煩的事，可能重新復(fù)蘇細(xì)胞是最好的辦法。同時(shí)該注意如何防止污染。我覺得如果是真菌污染，培養(yǎng)基會(huì)渾濁，是肉眼可見的渾濁。在這種情況下最好趕緊將該瓶細(xì)胞扔掉，免得引起培養(yǎng)箱中的大規(guī)摸污染。在顯微鏡下，真菌是成念珠狀的，這時(shí)細(xì)胞界限不清。這可能是不規(guī)范操作引起的，安全起見還是將細(xì)胞室全面打掃一下，用新潔爾滅擦，紫外照！謝謝大家的幫助，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室以前從來(lái)就沒有這樣的污染，所以大家也沒有經(jīng)驗(yàn)！現(xiàn)在就是不能確定是不是污染。我不可能把實(shí)驗(yàn)室所有的細(xì)胞都扔掉，因?yàn)橛泻枚嗳硕荚谝黄痧B(yǎng)不同類型的細(xì)胞！現(xiàn)在確實(shí)是問題，培養(yǎng)基也沒有渾濁，操作的時(shí)候已經(jīng)十二分的小心了！我想問一下，你看到的那些白色或黑色的圓點(diǎn)是在低倍還是高倍顯微鏡下？若培養(yǎng)基不混濁，可能真的是細(xì)胞狀態(tài)太差有壁還縮成球狀道你們實(shí)驗(yàn)室所有胞都用一瓶培養(yǎng)基？只要將污染的扔掉就行，沒必要都扔掉！兩性霉素！sigma在華美有分裝！但是濃度很小，關(guān)鍵還是環(huán)境問題！黑白圓點(diǎn)在100顯微鏡下有多大，是不是酵母菌不得用于商業(yè)用途

僅供個(gè)人參考小黑點(diǎn)和小白點(diǎn)是在200倍顯微鏡下觀察所見，大小可能是細(xì)胞核1/5到1/4左右！細(xì)胞狀態(tài)不好是因?yàn)楦郧芭囵B(yǎng)的細(xì)胞來(lái)比較所得細(xì)胞能貼壁能生長(zhǎng)但沒有以前的那么快而且形態(tài)看的不好！另外問一下sleevexz，母菌是什么樣的，怎么鑒別！還有一個(gè)問題就是，實(shí)驗(yàn)室用的雙抗是從公司買過(guò)來(lái)的直接使用的液體，具體規(guī)格是一瓶，Pelicillin-Streptomycin一起50倍的，要求儲(chǔ)存在－20C，但是有效只20029月，現(xiàn)在都已經(jīng)差不多過(guò)期半年了，但是實(shí)驗(yàn)室的老師都說(shuō)沒有問題，可以用，現(xiàn)在大家就都是一直用這樣的抗生素在！你們說(shuō)會(huì)不會(huì)是抗生素的問題的！養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)常無(wú)緣無(wú)辜的染菌？煩煩煩我是一個(gè)新手但已養(yǎng)細(xì)胞近半年最近一段時(shí)間經(jīng)常染菌，有時(shí)是培養(yǎng)基有時(shí)原因都找不到在實(shí)驗(yàn)中我也非常小但果總讓我傷心現(xiàn)在都有點(diǎn)神質(zhì)了，請(qǐng)各位指點(diǎn)你這個(gè)問題說(shuō)大不大，說(shuō)小也不小。說(shuō)不大呢，七個(gè)字就可以回答你：嚴(yán)格按照無(wú)菌要求。說(shuō)不小呢，這無(wú)菌要求的話匣子一打開太大。還是簡(jiǎn)要吧：1.將試驗(yàn)用品放入超凈工臺(tái)用紫外線照射分鐘；2.照射30分鐘后，進(jìn)入緩沖間，換滅菌的無(wú)菌衣，換專用拖鞋3.手部用5的潔爾滅浸泡2分鐘，進(jìn)入潔凈區(qū)后，用75％的酒精棉球再次擦拭裸露的手部。好戴口罩；5.操時(shí)盡量靠近火焰；6.裝培養(yǎng)基的瓶子等不要直接口向上，用一個(gè)架子斜放，瓶口朝向火焰；標(biāo)準(zhǔn)操作，要讓無(wú)菌吸管到處碰來(lái)碰去；8.中途出入無(wú)菌室，再次操作時(shí)，一定要再次用75％的酒精棉球消毒。一下也想不了那么多，具體的你再問吧。最好把你怎么操作的過(guò)程描述一遍，我們就好針對(duì)性的指出錯(cuò)誤了。建議你把細(xì)胞室，好好清理一下，污染是這樣的，出現(xiàn)一次就比較麻煩，千萬(wàn)別急。還有，你們的紫外燈沒有問題吧？非常感謝樓上的回信操作中我也嚴(yán)格按照無(wú)菌要求去做為操作臺(tái)是公用的而其它同學(xué)很少染菌，我想主要問題應(yīng)在我身上，但是又找不到主要原因。我一般是這樣操作的：紫外照后，用酒精棉檫拭手部開始操作基本步驟吸培養(yǎng)液到方瓶再在方瓶中吹打混按例傳代有時(shí)吸管頭部碰在培瓶口，有時(shí)吸管口棉花塞的太緊或太松不好用，有時(shí)原因都找不到，請(qǐng)各位指點(diǎn)。戴手套試試巴最好是涂片看看是什么菌？注意操作，吸管碰別處立即更換。污染是常有的事，也不必太給自己壓力，熟能生巧。你的滴管吸管進(jìn)培養(yǎng)液瓶和細(xì)胞培養(yǎng)瓶前要在酒精燈上仔細(xì)烤一下，滴管不要反復(fù)用。其實(shí)無(wú)菌操作第一重要的就是你的超凈臺(tái)是不是還能用，濾網(wǎng)要及時(shí)清洗的。其次就是瓶口、滴管、移液器操作是過(guò)火的是否正確。還有一點(diǎn)很重要，手一定不能在任何瓶口上方經(jīng)過(guò)！從你操作的步驟來(lái)看，你的細(xì)胞應(yīng)該是很好操作的。沒看到你要用消化液，這就減少了污染的機(jī)會(huì)。你用的吸管是自己做的嗎？經(jīng)常練練，熟能生巧，時(shí)間長(zhǎng)了，你就知道如何控制所塞的棉花量了。（用牙簽或12號(hào)針頭等工具來(lái)塞比較方便，塞完后用火將露出的部分燒掉再滅菌，這樣就不會(huì)在上吸耳球的過(guò)程中，出現(xiàn)將棉花弄掉的情況），另外，你要勤剪指甲，不要戴首飾，吸管一周滅一次菌，不要沒用完老用。操作是導(dǎo)致污染的最主要原因根據(jù)本人的經(jīng)驗(yàn)，操作是導(dǎo)致細(xì)菌污染的最主要原因。本人以前曾經(jīng)在一個(gè)相當(dāng)嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室工作過(guò)，那里的細(xì)胞室的要求是按照外科手術(shù)室要求的，更衣，換鞋，洗手，酒精擦手，戴口罩、帽子，所有培養(yǎng)液中加雙抗，所有細(xì)胞操作器械專用；每天紫外燈照射40分鐘后才允許進(jìn)入。但是，就是這樣的條件，操作不好，一樣要污染?，F(xiàn)在本人工作的實(shí)驗(yàn)室要求比那個(gè)實(shí)驗(yàn)室差的天遠(yuǎn)地遠(yuǎn)，但是只要操作仔細(xì)了，一樣可以把最難養(yǎng)的細(xì)胞養(yǎng)好。本人曾經(jīng)參觀過(guò)一些名人進(jìn)行細(xì)胞操作，也就是換上拖鞋，連工作服都不換就進(jìn)細(xì)胞室，細(xì)胞一樣不得用于商業(yè)用途

僅供個(gè)人參考沒有問題所以最主要的是工作服尤其是袖口消毒情況如何，袖口是否能夠扎緊如果不保證，不如索性把袖口挽起來(lái)，把手臂用酒精擦一遍（其實(shí)我本人連擦都懶得擦，一樣沒事）。操作時(shí)，滴管兩頭都要燒。還有一點(diǎn)很重要，就是滴管頭在加液體的時(shí)候，不要深入瓶口太多。在倒培養(yǎng)液的時(shí)候，可以拿起培養(yǎng)瓶直接倒，但是注意要倒干凈，瓶口沾的最后一滴液體千萬(wàn)不可回流倒瓶?jī)?nèi)。還有一些基本的問題，比如瓶口要多燒一會(huì)，懷疑滴管有污染就一定要換。一旦細(xì)胞出現(xiàn)污染的跡象了，就一定要扔掉。如果實(shí)在想挽救以用一些高檔抗生醫(yī)院里給病人加藥后的藥瓶無(wú)菌鹽水涮涮就能用度足夠但要小心濃度太高細(xì)胞也會(huì)死亡。對(duì)付霉菌通常用飽和的硫酸銅溶液，放在培養(yǎng)箱的裝水盤中，細(xì)胞房的空調(diào)要用除濕的功能。如果不幸染上，要用84液擦培養(yǎng)箱，再用酒精擦。滅菌操作：在無(wú)菌箱內(nèi)每立方米用甲醛10毫升，高錳酸鉀5，熏45分鐘后接種在無(wú)菌箱中每立方米用甲醛10毫升、高錳酸鉀克，熏蒸分鐘后接種，栽培種接種量按每瓶二級(jí)種接30－40袋宜。（一）常用消毒劑現(xiàn)將常用的消毒藥品及其配制、使用方法，介紹如下：135甲醛水溶液（HCHO：又名福爾馬林，使蛋白質(zhì)變性。用于培養(yǎng)室、無(wú)菌室的滅菌。20.1％的汞（HgCL3能使蛋白質(zhì)變性，抑制酶類升汞配制方法是稱取升汞克，用少許酒精溶解，再加水至毫升即成。用于無(wú)菌箱、培養(yǎng)箱、培養(yǎng)皿四周表面以及手指的滅菌。3石炭酸（C6H5OH），5濃度噴霧后，能使蛋白變性沉淀。石炭酸（苯酚）50毫升，加水毫升配成。用于工作服、實(shí)驗(yàn)桌的滅菌。殺菌效果同升汞。4高錳酸鉀KMnO4）氧化劑％濃度能使蛋白質(zhì)與氨基酸氧化，失去酶的活性，用于消毒，能抑制或殺死雜菌。5乙醇（CH3CH3OH）：又稱酒精。消毒以75濃度的效果最好。它能使蛋白質(zhì)脫水變性。高濃度酒精會(huì)使蛋白質(zhì)很快脫水凝固，消毒作用反而減弱。6新潔爾滅：0.25新潔爾滅用于無(wú)菌箱、無(wú)菌室的滅菌。一般新潔爾滅原液50升；加水950毫升配成。7漂白粉水：取漂白10克，加140毫升配成。通常在使用前臨時(shí)配制，靜12時(shí)，取上清液噴射，進(jìn)行室內(nèi)消毒，每平方米用1。8藥皂：煤酚皂、硼酸皂等各種藥皂的水溶液，均可用于器具、橡皮塞及手指的消毒。92硫酸銅溶液：用硫酸銅（膽礬）2克，加水至100升加熱溶解配成。用于床架、木架等各種菌種架的消毒。還可用5％硫酸銅溶液。100.5％波爾多液：先用硫酸銅1斤，溶于100斤水，再用石灰1斤，加水100。然后等量混合起來(lái)即成。用于菌種架、段木的消毒。11.菌靈：用于殺滅真菌、半知茵。800倍拌料或1：500倍噴灑均可。（二）無(wú)菌箱及無(wú)菌室的消毒滅菌無(wú)菌箱的消毒滅菌，可采取以下幾種方法：l用甲醛和高錳酸鉀混合熏蒸：一般每平方米需％甲醛10毫升、高錳酸鉀8升，進(jìn)行熏蒸。使用時(shí)，先密閉門窗，量甲醛溶液盛入容器中、然后倒入量好的高錳酸鉀，人員隨之離開接種室，關(guān)緊房門，熏蒸20—30分即可。20.1升汞水消毒：用％升汞水浸過(guò)的紗布或海綿進(jìn)行指擦，或用噴霧器噴霧滅菌，使箱內(nèi)的上下左右都沾上升汞水，手也可用升汞水消毒，并把袖子卷起來(lái)。噴霧后20～分鐘，箱內(nèi)的雜菌和霧不得用于商業(yè)用途

僅供個(gè)人參考滴一起落到箱底被殺死，內(nèi)部的空氣就變得很清潔。3紫外線照射滅菌：在無(wú)菌箱中裝一200伏3O的紫外線燈管；每次2030分鐘，就能達(dá)到空間殺菌的目的。照射結(jié)束后，罩黑布半小時(shí)，以增強(qiáng)殺菌效果。4石炭酸噴霧：在每次接種之前，用石炭酸溶液噴霧，可促使空氣中的微粒和雜菌沉降，防止桌面微塵飛揚(yáng)，并有殺菌作用。5石灰揩擦：經(jīng)常用藥物熏蒸，易造成酸性環(huán)境，特別用甲醛和高錳酸鉀熏蒸長(zhǎng)久，污染往往越來(lái)越嚴(yán)重，預(yù)防辦法可把各種藥品交替使用，過(guò)一段時(shí)間（約五周）用石灰擦洗一遍。實(shí)踐證明，這樣做效果很好。無(wú)菌室消毒同無(wú)菌箱。（三）無(wú)菌室的使用規(guī)程無(wú)菌室無(wú)固定程序，但按一般操作應(yīng)遵循如下規(guī)程：1接種室內(nèi)和緩沖室內(nèi)使用前，用石炭酸溶液噴霧。把所需要的器材搬入緩沖室清洗，等曬干后搬入接種室，打開紫外線燈，照射殺菌。2穿上工作服及無(wú)菌工作帽、鞋，然后用煤皂液洗2分鐘。進(jìn)人接種室后，查驗(yàn)器械是否放在一定位置。然后用5％石炭酸溶液重點(diǎn)在工作臺(tái)的上方和附近的地面上噴霧。然后退回緩沖室。還可給接種室門口地面灑一層石灰，進(jìn)門時(shí)踩石灰可使鞋底保持無(wú)雜菌狀態(tài)。3接種操作前，用70的酒精棉球擦手。進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí)，要嚴(yán)格認(rèn)真，動(dòng)作輕捷，盡量減少空氣流動(dòng)。4工作結(jié)束后，立即將臺(tái)面收拾干凈，不留殘物。然后用5石炭酸全面噴灑。5操作時(shí)，注意安全。如棉塞著火，用手緊握即可熄滅。如打破菌瓶，可用抹布沾5％石炭酸，收拾到廢物桶內(nèi)。每次的污染物應(yīng)小心放在盤內(nèi)，蓋嚴(yán)拿出室外深埋或燒掉。（四）無(wú)菌室空氣污染情況的檢驗(yàn)定期檢驗(yàn)無(wú)菌室空氣污染情況，對(duì)改進(jìn)滅菌措施，提高成品率是非常必要的。常用方法步驟如下：1平板檢驗(yàn)法：用常規(guī)培養(yǎng)基，倒成平板，收入接種室。在事先熏蒸好的接種室，使用前半小時(shí)或1小把供試的培養(yǎng)皿或試管打開，按預(yù)定時(shí)間蓋好培養(yǎng)皿或試管。留對(duì)照皿不打開。然后一起放入30℃的溫箱中培養(yǎng)48小時(shí)，檢查有無(wú)菌殖生長(zhǎng)，并由菌落形態(tài)，判斷