IVF實(shí)驗(yàn)室的基本操作

IVF實(shí)驗(yàn)室的基本操作當(dāng)前1頁(yè)，總共37頁(yè)。實(shí)驗(yàn)室操作原則

防止污染配子標(biāo)本的標(biāo)記；受精、胚胎移植；

兩人核對(duì)毒性測(cè)試；培養(yǎng)液、耗材的使用；實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制和管理無(wú)誤無(wú)菌無(wú)毒當(dāng)前2頁(yè)，總共37頁(yè)。輔助生殖技術(shù)基本操作配子、胚胎培養(yǎng)系統(tǒng)1配子的收集和處理2體外受精技術(shù)3胚胎培養(yǎng)和移植4胚胎冷凍和解凍5當(dāng)前3頁(yè)，總共37頁(yè)。培養(yǎng)液的準(zhǔn)備培養(yǎng)液的基本組分無(wú)機(jī)鹽離子---維持pH和滲透壓碳水化合物---能量來(lái)源蛋白質(zhì)來(lái)源抗生素礦物油有利于維持培養(yǎng)液溫度、pH值和滲透壓穩(wěn)定防護(hù)屏障，減少污染吸收脂溶性毒素防止液體蒸發(fā)當(dāng)前4頁(yè)，總共37頁(yè)。培養(yǎng)液的準(zhǔn)備取卵前一日下午進(jìn)行原則：高效、方便、安全、經(jīng)濟(jì)四孔培養(yǎng)皿—卵處理精液所需培養(yǎng)液微滴培養(yǎng)—受精卵、胚胎胚胎移植液37℃，5%或6%CO2培箱內(nèi)平衡過(guò)夜當(dāng)前5頁(yè)，總共37頁(yè)。卵母細(xì)胞的獲取注射hCG后36-38小時(shí)取卵陰道超聲探頭引導(dǎo)下經(jīng)陰道穿刺抽吸卵泡核對(duì)姓名解剖顯微鏡下辨認(rèn)卵冠丘復(fù)合物OCCC37℃,5－6%CO2

培養(yǎng)操作迅速，避光當(dāng)前6頁(yè)，總共37頁(yè)。精液處理正常精液：同IUI極度少精：增加離心力死精癥：低滲腫脹實(shí)驗(yàn)附睪穿刺精子：睪丸穿刺或活檢精子：

1ml注射器針頭挑碎組織，離心懸液附睪、睪丸精子的冷凍當(dāng)前7頁(yè)，總共37頁(yè)。常規(guī)受精

取卵后4-8h

適應(yīng)癥：精液正常，輕度少、弱精癥受精率：65－80％（MII卵）受精時(shí)間：長(zhǎng)受精、短受精當(dāng)前8頁(yè)，總共37頁(yè)。當(dāng)前9頁(yè)，總共37頁(yè)。卵母細(xì)胞漿內(nèi)單精子顯微注射適應(yīng)癥：嚴(yán)重少弱精、梗阻性無(wú)精、畸精癥、既往IVF常規(guī)受精失敗史、某些不明原因不孕等時(shí)間：取卵后2小時(shí)剝卵：利用透明質(zhì)酸酶（80mIU/ml)和機(jī)械法剝除顆粒細(xì)胞當(dāng)前10頁(yè)，總共37頁(yè)。卵母細(xì)胞漿內(nèi)單精子顯微注射卵母細(xì)胞成熟度的評(píng)價(jià)GVMIMII當(dāng)前11頁(yè)，總共37頁(yè)。卵母細(xì)胞漿內(nèi)單精子顯微注射操作滴的準(zhǔn)備：7％PVP加精裝針顯微注射受精率：70％當(dāng)前12頁(yè)，總共37頁(yè)。受精方式的選擇ICSI的安全性？逃避了自然選擇過(guò)程垂直傳遞遺傳缺陷操作過(guò)程對(duì)配子的損傷嚴(yán)格掌握ICSI適應(yīng)癥當(dāng)前13頁(yè)，總共37頁(yè)。非男性因素不孕ICSI治療結(jié)局非男性因素不孕癥，ICSI未顯現(xiàn)出優(yōu)勢(shì)當(dāng)前14頁(yè)，總共37頁(yè)。檢查受精時(shí)間：受精后15－18小時(shí)機(jī)械法除去顆粒細(xì)胞及放射冠正常受精：兩個(gè)原核，兩個(gè)極體當(dāng)前15頁(yè)，總共37頁(yè)。當(dāng)前16頁(yè)，總共37頁(yè)。當(dāng)前17頁(yè)，總共37頁(yè)。合子形態(tài)評(píng)價(jià)原核的大小、位置及方向核仁前體的數(shù)目、大小、分布胞漿的外觀早期卵裂情況當(dāng)前18頁(yè)，總共37頁(yè)。異常受精－1PN發(fā)生率1－5％卵裂率74%染色體二倍體率5％囊胚形成率29%(Noyes2008)機(jī)制：雌雄原核發(fā)育不同步雌雄原核融合孤雌來(lái)源ICSI多見(jiàn)當(dāng)前19頁(yè)，總共37頁(yè)。異常受精－多PN發(fā)生率：IVF5-8%ICSI1%發(fā)生機(jī)制：

2精子進(jìn)入第2極體滯留雙倍體卵母細(xì)胞當(dāng)前20頁(yè)，總共37頁(yè)。未見(jiàn)原核－未受精可能機(jī)制

卵母細(xì)胞未成熟卵母細(xì)胞染色體異常卵裂率<10%

染色體二倍體率3%優(yōu)胚率低(12/38)囊胚形成(0/12)(Noyes2008)

當(dāng)前21頁(yè)，總共37頁(yè)。受精失敗受精率<20%受精率低下所有成熟卵均未受精受精失敗常規(guī)受精周期失敗率10％精子功能障礙卵母細(xì)胞成熟障礙補(bǔ)打ICSI?ICSI周期失敗率2－3％嚴(yán)重精子畸形卵母細(xì)胞激活鈣離子載體？機(jī)械激活？

當(dāng)前22頁(yè)，總共37頁(yè)。胚胎培養(yǎng)當(dāng)前23頁(yè)，總共37頁(yè)。胚胎質(zhì)量評(píng)價(jià)胚胎評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞數(shù)碎片:無(wú)碎片碎片<10%

碎片10－30％碎片30－50％碎片>50%

卵裂球均勻程度

當(dāng)前24頁(yè)，總共37頁(yè)。囊胚的評(píng)分體系4AA囊胚腔的大小內(nèi)細(xì)胞團(tuán)細(xì)胞分級(jí)滋養(yǎng)層分級(jí)三位評(píng)分法1:不到整個(gè)胚胎的一半2:超過(guò)了胚胎體積的一半3:完全占據(jù)整個(gè)胚胎4:擴(kuò)張囊胚5:孵化囊胚6:孵化后囊胚A包裹緊密，大量細(xì)胞B結(jié)構(gòu)松散，少量細(xì)胞C極少量細(xì)胞A許多細(xì)胞緊密結(jié)合B少量細(xì)胞，結(jié)構(gòu)松散C極少量細(xì)胞當(dāng)前25頁(yè)，總共37頁(yè)。

2AA5AA4BA4CC當(dāng)前26頁(yè)，總共37頁(yè)。胚胎移植操作選擇需要移植的胚胎,移入移植滴內(nèi)

35歲以下，首次移植的病人移植2枚胚胎

35歲以上，或非首次移植的病人移植3枚胚胎確認(rèn)核對(duì)患者姓名D3orD5移植？當(dāng)前27頁(yè)，總共37頁(yè)。移植液移植液移植液和胚胎氣～20μl 氣胚胎移植操作當(dāng)前28頁(yè)，總共37頁(yè)。胚胎冷凍意義：提高累計(jì)妊娠率，避免多胎，減少卵巢過(guò)度刺激風(fēng)險(xiǎn)溫度的急劇變化形成冰晶機(jī)械性損傷溶質(zhì)性損傷滲透壓損傷核心：避免冰晶形成冷凍方法：慢凍速融法玻璃化冷凍法冷凍保護(hù)劑滲透性保護(hù)劑：EGPRON甘油非滲透性保護(hù)劑：蔗糖大分子物質(zhì)當(dāng)前29頁(yè)，總共37頁(yè)。胚胎的冷凍:慢速冷凍室溫15min室溫5min室溫15minPBS1.5M丙二醇1.5M丙二醇0.1M蔗糖當(dāng)前30頁(yè)，總共37頁(yè)。慢凍速融法冷凍程序

20℃→－7℃3℃/min-7℃人工植冰

-7℃→－30℃0.3℃/min-30℃→－120℃30℃/min當(dāng)前31頁(yè)，總共37頁(yè)。胚胎復(fù)蘇12340.5M丙二醇0.2M蔗糖

5min0.2M蔗糖

5minPBS5min1.0M丙二醇0.2M蔗糖5min預(yù)防冰晶的再形成復(fù)蘇程序：室溫40s→30℃水浴1min當(dāng)前32頁(yè)，總共37頁(yè)。胚胎凍融損傷復(fù)蘇胚胎評(píng)價(jià)：>50%卵裂球完整存活復(fù)蘇率>90%無(wú)損傷胚胎著床率高部分損傷胚胎著床能力下降當(dāng)前33頁(yè)，總共37頁(yè)。玻璃化冷凍原理?xiàng)l件：高濃度冷凍保護(hù)劑極快的降溫速度載體：開(kāi)放式密閉式適應(yīng)癥：卵母細(xì)胞囊胚優(yōu)點(diǎn)：復(fù)蘇率高當(dāng)前34頁(yè)，總