醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗

醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實驗第1頁/共32頁1、細(xì)菌的人工培養(yǎng)（講授）2、細(xì)菌的培養(yǎng)方法：

固體培養(yǎng)基接種法（自做）；半固體、液體培養(yǎng)基接種法（示教）3、葡萄球菌、鏈球菌培養(yǎng)及生化（示教）4、細(xì)菌的形態(tài)觀察自閱片：甲型鏈球菌、結(jié)核桿菌示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、白喉桿菌、炭疽桿菌實驗內(nèi)容

牛牛文庫文檔分享第2頁/共32頁第四節(jié)細(xì)菌的人工培養(yǎng)p31一、培養(yǎng)基（culturemedium）：是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)物制品。

牛牛文庫文檔分享第3頁/共32頁常用培養(yǎng)基的種類

按營養(yǎng)組成和用途分厭氧培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基

牛牛文庫文檔分享第4頁/共32頁二、細(xì)菌在培養(yǎng)基中的生長情況

據(jù)物理狀態(tài)分1、液體培養(yǎng)基：均勻混濁、沉淀生長、表面生長（菌膜）；多用于增菌均勻混濁對照沉淀生長

牛牛文庫文檔分享第5頁/共32頁2、固體培養(yǎng)基：

含1.5%瓊脂

用于分離培養(yǎng)菌落：單個細(xì)菌分裂繁殖成一堆肉眼可見的細(xì)菌集團(tuán)。純培養(yǎng)：挑取一個菌落，移種到另一培養(yǎng)基中，生長出來的細(xì)菌均為純種，稱為純培養(yǎng)。菌落特征－大小、形狀、顏色、氣味、透明度、光滑或粗糙、濕潤或干燥、隆起或扁平、邊緣整齊與否、是否溶血等→有助于細(xì)菌鑒定

牛牛文庫文檔分享第6頁/共32頁菌落（S型）菌苔菌落（R型）光滑型(S型)粗造型(R型)粘液型(M型)

牛牛文庫文檔分享第7頁/共32頁3、半固體培養(yǎng)基：含0.3%~0.5%瓊脂

鞭毛菌—混濁生長（沿穿刺線呈云霧狀/羽毛狀）

無鞭毛菌—沿穿刺線呈線狀生長用于檢測細(xì)菌的動力和保存菌種

牛牛文庫文檔分享第8頁/共32頁斜面劃線示意圖4、斜面培養(yǎng)基接種法應(yīng)用：短期保存菌種

牛牛文庫文檔分享第9頁/共32頁三、人工培養(yǎng)細(xì)菌的用途在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

1.感染性疾病的病原學(xué)診斷：明確病因，指導(dǎo)用藥

2.細(xì)菌學(xué)的研究：細(xì)菌遺傳、變異、耐藥性

3.生物制品的制備：疫苗、類毒素、抗毒素在工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用

（抗生素、維生素、酶制劑等）

在基因工程中的應(yīng)用（

基因工程菌→乙肝疫苗）進(jìn)入實驗內(nèi)容講授

牛牛文庫文檔分享第10頁/共32頁1、固體培養(yǎng)基(平板)接種法分區(qū)劃線法連續(xù)劃線法

牛牛文庫文檔分享第11頁/共32頁第一區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第二區(qū)劃線滅菌接種環(huán)第三區(qū)劃線滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)，取菌準(zhǔn)備分區(qū)劃線法原劃線標(biāo)本：混合菌液分組：1人一個固體平板

牛牛文庫文檔分享第12頁/共32頁連續(xù)劃線法

牛牛文庫文檔分享第13頁/共32頁菌落示意圖細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象

牛牛文庫文檔分享第14頁/共32頁細(xì)菌在固體培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象

菌落

★

菌落特征：大小、形狀、顏色、氣味、透明度、表面光滑或粗糙、濕潤或干燥、邊緣整齊與否、溶血性等。

★菌落類型：S型、R型、M型菌落。菌苔：指多個菌落融合在一起形成的細(xì)菌堆積物。

牛牛文庫文檔分享第15頁/共32頁菌落（S型）菌苔菌落（R型）光滑型(S型)粗造型(R型)粘液型(M型)

牛牛文庫文檔分享第16頁/共32頁注意事項1、無菌操作

2、密而不重疊

3、勿劃破瓊脂

4、做好標(biāo)記，第二天觀察結(jié)果

牛牛文庫文檔分享第17頁/共32頁2、葡萄球菌培養(yǎng)（示教）營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基生長良好

菌落：S型菌落，金黃色、表皮、腐生葡萄球菌各自形成金黃色、白色、檸檬色-脂溶性色素

牛牛文庫文檔分享第18頁/共32頁血平板：

金黃色葡萄球菌形成的β-溶血環(huán)金黃色色素白色色素

牛牛文庫文檔分享第19頁/共32頁3、鏈球菌培養(yǎng)（示教）

血平板上的菌落：

甲型溶血性鏈球菌形成草綠色溶血現(xiàn)象，乙型溶血性鏈球菌形成透明的完全溶血現(xiàn)象，丙型鏈球菌無溶血現(xiàn)象。

牛牛文庫文檔分享第20頁/共32頁甲鏈α溶血草綠色溶血乙鏈β溶血丙鏈不溶血

牛牛文庫文檔分享第21頁/共32頁4、常見致病菌的形態(tài)與染色性

牛牛文庫文檔分享第22頁/共32頁甲型溶血性鏈球菌取材：純培養(yǎng)物染色法：革蘭染色放大倍數(shù)：10X100自閱片之一

牛牛文庫文檔分享第23頁/共32頁結(jié)核分枝桿菌取材：痰涂片染色法：抗酸染色放大倍數(shù)：10X100自閱片之二菌體染成紅色，細(xì)長略微彎曲桿菌，單個或分枝狀排列；（非抗酸菌及細(xì)胞染成藍(lán)色）

牛牛文庫文檔分享第24頁/共32頁淋病奈瑟菌示教片之一取材：泌尿道膿性分泌物染色法：革蘭染色放大倍數(shù)：10X100淋病奈瑟菌中性粒細(xì)胞分葉核淋球菌染成紅色/G-，腎形或豆形，成雙排列

牛牛文庫文檔分享第25頁/共32頁肉毒梭菌示教片之二取材：純培養(yǎng)物染色法：革蘭染色放大倍數(shù)：10X100G+粗短桿菌，芽胞呈橢圓形，比菌體粗，次極端，細(xì)菌呈湯匙狀或網(wǎng)球拍狀

牛牛文庫文檔分享第26頁/共32頁產(chǎn)氣莢膜梭菌示教片之三取材：小鼠腹腔滲出液染色法：革蘭染色放大倍數(shù)：10X100G+粗大桿菌，兩端幾乎平切，在被感染得人或動物體內(nèi)形成明顯的莢膜

牛牛文庫文檔分享第27頁/共32頁炭疽桿菌示教片之四取材：純培養(yǎng)物染色法：革蘭染色放大倍數(shù)：10X100G+粗大桿菌，有氧條件下形成橢圓形芽胞，位于菌體中央

牛牛文庫文檔分享第28頁/共32頁白喉棒狀桿菌取材：純培養(yǎng)物染色法：美藍(lán)染色放大倍數(shù)：10X100取材：純培養(yǎng)物染色法：Neisser染色放大倍數(shù)：10X100示教片之五菌體細(xì)長彎曲的桿菌，粗細(xì)不一，常一端或兩端膨大呈棒狀；排列不規(guī)則，呈柵欄狀、V字形或L字形。異染顆粒

牛牛文庫文檔分享第29頁/共32頁1、細(xì)菌的人工培養(yǎng)（講授）2、細(xì)菌的培養(yǎng)方法：

固體培養(yǎng)基接種法（自做）；半固體、液體培養(yǎng)基接種法（示教）3、葡萄球菌、鏈球菌培養(yǎng)及生化（示教）4、細(xì)菌的形態(tài)觀察自閱片：甲型鏈球菌、結(jié)核桿菌示教片：淋球菌、肉毒桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、白喉桿菌、炭疽桿菌第2頁：

實驗名稱：細(xì)菌平板劃線分離法

（記錄實驗結(jié)果－繪一簡圖并描述平板上的菌落特征）第3頁：

實驗名稱：細(xì)菌的形態(tài)觀察（繪圖）甲型鏈球菌、結(jié)核桿菌、淋球菌、肉毒桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、白喉桿菌、炭疽桿菌

實驗內(nèi)容第1頁：

實驗名稱：細(xì)菌培養(yǎng)及形態(tài)觀察

牛牛文庫文檔分享第30頁/共32頁甲型溶血性鏈球菌取材：純培養(yǎng)物染色法：革蘭染色放大倍數(shù)：10X100結(jié)核分枝桿菌取材：痰涂片染色法：抗酸染色放大倍數(shù)：10X100

淋病奈瑟菌取材：泌尿道膿性分泌物染色法：革蘭染色放大倍數(shù)：10X100肉毒梭菌取材：純培養(yǎng)物染色法：革蘭染