實(shí)驗(yàn)一 雞胚接種

實(shí)驗(yàn)一雞胚接種第1頁(yè)/共24頁(yè)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私怆u胚接種的優(yōu)缺點(diǎn)。掌握雞胚接種病毒操作方法。第2頁(yè)/共24頁(yè)雞胚用于病毒培養(yǎng)的優(yōu)缺點(diǎn)（一）優(yōu)點(diǎn)

1、組織分化程度低

2、可選擇不同的日齡和接種途徑

3、病毒易于增殖

4、感染病毒的組織和液體中含大量病毒

5、容易采集和處理

6、來(lái)源充足

7、設(shè)備和操作簡(jiǎn)便易行第3頁(yè)/共24頁(yè)（二）缺點(diǎn)

1、胚內(nèi)可能污染細(xì)菌和病毒

沙門氏菌、禽白血病病毒、新城疫、禽腦脊髓炎病毒

2、母源抗體

3、許多病毒在雞胚中增殖缺乏特異性的感染指針第4頁(yè)/共24頁(yè)二、雞胚的結(jié)構(gòu)與功能第5頁(yè)/共24頁(yè)第6頁(yè)/共24頁(yè)1、卵殼上有細(xì)孔，進(jìn)行氣體交換

2、殼膜使氣體分子和液體分子在內(nèi)外兩方面進(jìn)行交換。

3、氣室呼吸和調(diào)節(jié)壓力第7頁(yè)/共24頁(yè)4、絨毛尿囊膜起胚胎呼吸器官的功能，氧氣的交換是在膜的血管內(nèi)通過(guò)卵殼孔而進(jìn)行的。第8頁(yè)/共24頁(yè)5、尿囊腔胚胎的排泄器官，內(nèi)含有尿囊液，初為透明液體，是單純生理鹽溶液，以后尿囊液中尿酸鹽迅速增加，胚胎發(fā)育到第12-13天后，尿囊液開始變得混濁。第9頁(yè)/共24頁(yè)6、羊膜與羊膜腔其中盛有羊水，胎體浸泡于其中

7、卵黃在胚胎發(fā)育早期供給雞胚營(yíng)養(yǎng)。

8、卵白在胚胎發(fā)育晚期供給雞胚營(yíng)養(yǎng)。第10頁(yè)/共24頁(yè)接種途徑1、絨毛尿囊膜接種

2、尿囊腔接種

3、卵黃囊接種

4、靜脈接種藍(lán)舌病毒

5、羊膜腔接種正粘病毒和副粘病毒

6、腦內(nèi)接種狂犬病毒

7、眼球接種第11頁(yè)/共24頁(yè)1、雞胚9-11日齡

2、病毒新城疫病毒

3、照蛋燈

4、打孔器

5、石蠟

6、注射器

7、蛋座

8、酒精棉球、碘酊棉球三、實(shí)驗(yàn)材料第12頁(yè)/共24頁(yè)四、雞胚接種方法實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備1、用檢卵燈檢查雞胚活力。2、用鉛筆畫出氣室和胚胎的位置，并在將要接種的部位做好記號(hào)。3、對(duì)雞胚進(jìn)行消毒。第13頁(yè)/共24頁(yè)（一）卵黃囊接種法

主要用于蟲媒披膜病毒以及鸚鵡熱衣原體和立克次氏體等的分離和增殖。方法一：

1）取6-8日齡雞胚，用檢卵燈照視畫出氣室和胚胎位置后，垂直放置在卵座上(大頭向上)

2）用碘酊和酒精消毒氣室端

3）用鋼錐在氣室中央錐一小孔

4）用注射器吸取病毒懸液，沿氣室端所穿小孔垂直刺入3cm，注入0.1-0.5ml病毒液。

5）用熔化的石蠟封孔，置孵卵箱內(nèi)繼續(xù)孵育，每天翻卵1-2次，24h內(nèi)死亡者廢棄。第14頁(yè)/共24頁(yè)方法二：

1）2）同一

3）將卵橫放在卵座上，胚胎位置向下。在卵長(zhǎng)徑的1/2處用碘酊和酒精消毒。

4）用鋼錐打一小孔，將針頭刺入約1.5cm，注入病毒液0.1-0.5ml。

5）用熔化的石蠟封孔，置孵卵箱內(nèi)繼續(xù)孵育，24h內(nèi)死亡者廢棄。第15頁(yè)/共24頁(yè)（二）絨毛尿囊膜接種主要用于痘V和皰疹V的分離和增殖。

方法一：

1）取10-12日齡雞胚，畫出氣室部，消毒

2）在氣室端的卵殼上開一1.5×1.5cm的口

3）用滅菌眼科鑷子撕去一小片內(nèi)殼膜。

4）滴入接種物。

5）用膠布或透明膠紙封閉切口。第16頁(yè)/共24頁(yè)方法二：（要做人工氣室）

1、在胚胎附近近氣室處，選擇血管較少的部位，用電烙器在卵殼上烙一個(gè)直徑約3-4mm的烤焦圈。

2、用碘酊和酒精消毒后，小心用刀尖撬起卵殼，造成卵窗。

3、在氣室端中央鉆一個(gè)小孔。

4、用針尖挑破卵窗中心的殼膜，切勿損傷其下的絨毛尿囊膜，滴加生理鹽水于刺破處。

第17頁(yè)/共24頁(yè)5、用橡皮乳頭緊貼于氣室中央小孔上吸氣，造成氣室內(nèi)負(fù)壓，使卵窗部位的絨毛尿囊膜下陷而形成人工氣室，此時(shí)可見(jiàn)滴于殼膜上的生理鹽水迅速滲入。

6、用1ml注射器滴2-3滴接種物于絨毛尿囊膜上。第18頁(yè)/共24頁(yè)7、用透明膠紙封住卵窗，或用玻璃紙蓋于卵窗中，周圍涂上熔化的石蠟密封，氣室中央的小孔用石蠟密封。

8、胚橫臥于卵箱中，不許翻動(dòng)，保持卵窗向上。

第19頁(yè)/共24頁(yè)（三）

尿囊腔接種

主要用于正粘V和副粘V，如流感V、新城疫V的分離和增殖。

1、選用10-11日齡的雞胚，畫出氣室和胚位

2、在氣室接近胚體處用碘酊和酒精進(jìn)行消毒

3、用鋼錐穿一小孔

4、將注射器沿小孔插入0.5-1.0cm，注入0.1-0.2ml接種物

5、用石蠟封口，并置孵卵箱中孵育，每天翻卵并檢卵一次，24h內(nèi)死亡者廢棄。第20頁(yè)/共24頁(yè)五、新城疫病毒接種雞胚后病變1、雞胚停止生長(zhǎng)。2、全身出血（頭頸部，背部等）。3、尿囊液增量。4、病毒經(jīng)尿囊腔接種后36h，最高滴度可達(dá)107個(gè)雞胚致死量。5、雞胚死亡（病毒接種量大）。第21頁(yè)/共24頁(yè)六、收毒

收毒前將雞胚直立放置于4冰箱半小時(shí)以上，凍死胚胎，防止出血。

根據(jù)接種途徑的不同，收獲相應(yīng)的材料1、絨毛尿囊膜接種收獲接種部位絨毛尿囊膜2、尿囊腔接種收獲尿囊液（5~8ml）3、卵黃囊接種收獲卵黃囊或