實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制第1頁(yè)/共74頁(yè)2第四章實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物及寄生蟲(chóng)學(xué)質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)學(xué)質(zhì)量控制第2頁(yè)/共74頁(yè)3第一節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分級(jí)及特點(diǎn)一、從微生物控制方面分級(jí)第3頁(yè)/共74頁(yè)4(1)普通動(dòng)物(conventionalanimal,CV)(2)清潔動(dòng)物(cleaninganimal,CL)(3)無(wú)特定病原體動(dòng)物(specificpathogenfreeanimal,SPF)(4)悉生動(dòng)物(animalwithknownbacterialflora)(5)無(wú)菌動(dòng)物(germfreeanimal,GF)1、按微生物學(xué)控制的動(dòng)物分類第4頁(yè)/共74頁(yè)52、國(guó)際分級(jí)法等級(jí)種類飼養(yǎng)條件控制程度備注三級(jí)無(wú)菌動(dòng)物Germfreeanimal隔離系統(tǒng)Isolationsystem以封閉的無(wú)菌技術(shù)獲得,用現(xiàn)有方法不能檢出任何微生物和寄生蟲(chóng)的動(dòng)物。三級(jí)悉生動(dòng)物Gnotobioticsanimal隔離系統(tǒng)Isolationsystem確知已帶的微生物，經(jīng)無(wú)菌條件飼養(yǎng)的動(dòng)物。明確所帶的微生物。二級(jí)無(wú)特定病原體動(dòng)物Specificpathogenfreeanimal屏障系統(tǒng)Barriersystem不帶有指定的致病性微生物和寄生蟲(chóng)的動(dòng)物。帶有非特定的微生物和寄生蟲(chóng)一級(jí)普通動(dòng)物Conventionalanimal開(kāi)放系統(tǒng)Opensystem不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原和動(dòng)物烈性傳染病的病原。對(duì)微生物攜帶狀況不明確第5頁(yè)/共74頁(yè)63、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分級(jí)等級(jí)種類飼養(yǎng)條件四級(jí)無(wú)菌動(dòng)物GermfreeanimalGF隔離系統(tǒng)Isolationsystem四級(jí)悉生動(dòng)物GnotobioticsanimalGN隔離系統(tǒng)Isolationsystem三級(jí)無(wú)特定病原體動(dòng)物SpecificpathogenfreeanimalSPF屏障系統(tǒng)Barriersystem二級(jí)清潔動(dòng)物CleananimalCL屏障系統(tǒng)Barriersystem一級(jí)普通動(dòng)物ConventionalanimalCV開(kāi)放系統(tǒng)Opensystem第6頁(yè)/共74頁(yè)7二.主要?jiǎng)游锾攸c(diǎn)及應(yīng)用1.清潔動(dòng)物與SPF動(dòng)物的應(yīng)用CL動(dòng)物國(guó)際上認(rèn)為僅適合短期或部分科研實(shí)驗(yàn)；我國(guó)認(rèn)為適用于大多數(shù)科研實(shí)驗(yàn)，可用于生物醫(yī)學(xué)研究的各領(lǐng)域。SPF動(dòng)物適用于所有科研實(shí)驗(yàn)，是目前國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。第7頁(yè)/共74頁(yè)82、無(wú)菌動(dòng)物的特點(diǎn)形態(tài)學(xué)改變消化系統(tǒng):盲腸膨大，易發(fā)生盲腸扭轉(zhuǎn)，導(dǎo)致破裂。循環(huán)系統(tǒng)：心臟變小。免疫系統(tǒng)：胸腺上皮細(xì)胞變大，胞漿泡狀結(jié)構(gòu)和溶酶體變小。生理學(xué)改變免疫功能：免疫應(yīng)答慢，過(guò)敏反應(yīng)、對(duì)異體移植物的排斥反應(yīng)以及自身免疫現(xiàn)象消失或減弱。對(duì)微生物感染非常敏感。生長(zhǎng)率：豚鼠、兔生長(zhǎng)率降低，大、小鼠改變不大。代謝：水分代謝周期延長(zhǎng)，腸管對(duì)水的吸收率低。營(yíng)養(yǎng)：體內(nèi)不能合成VitB、VitK?？馆椛淠芰Γ涸鰪?qiáng)。壽命：長(zhǎng)于普通動(dòng)物。第8頁(yè)/共74頁(yè)93、悉生生物學(xué)(gnotobiology)：

1885年pasteur認(rèn)為宿主動(dòng)物沒(méi)有腸道菌群參與，生命難以維持。無(wú)菌動(dòng)物的問(wèn)世，證明腸道菌群的存在，并非完全是哺乳動(dòng)物生存所必需。悉生生物學(xué)是以無(wú)菌隔離技術(shù)提供的各種動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身以及各種動(dòng)物與微生物之間相互依存和制約關(guān)系的一門(mén)綜合科學(xué)。第9頁(yè)/共74頁(yè)10悉生動(dòng)物的特點(diǎn)（1）GN動(dòng)物是動(dòng)物與微生物的共生復(fù)合體。（2）腸道存在能合成維生素和氨基酸的細(xì)菌，不會(huì)出現(xiàn)維生素缺乏癥。（3）生活力、抵抗力明顯增強(qiáng)，易于飼養(yǎng)。第10頁(yè)/共74頁(yè)114、GF動(dòng)物的應(yīng)用微生物研究（1）GF是研究微生物與宿主相互作用，即微生生物與宏生生物相互關(guān)系，微生物與微生物的共生與拮抗關(guān)系的最佳動(dòng)物。（2）口服霍亂弧菌使幼齡GF豚鼠死亡，口服前感染梭狀芽胞桿菌，動(dòng)物不發(fā)生死亡；口服福氏痢疾桿菌使幼齡GF豚鼠死亡，口服前接種大腸桿菌，動(dòng)物不發(fā)生死亡。（3）炎癥涉及細(xì)菌感染的多因素作用，GF可把多因素變成單因素，整體反應(yīng)變成局部反應(yīng)。第11頁(yè)/共74頁(yè)12老年學(xué)研究

GF大鼠壽命比CV大鼠延長(zhǎng)1/3。雌性GF壽命比雄性動(dòng)物短，雌性CV動(dòng)物比雄性長(zhǎng)。

2-3年的GF大鼠臟器均未呈現(xiàn)同齡CV大鼠所具有的各種衰老變化。第12頁(yè)/共74頁(yè)13腫瘤學(xué)研究在致癌因素中，微生物引起癌變的比重較大。GF大鼠比CV大鼠易發(fā)生激素依賴性腫瘤。GF動(dòng)物口服蘇鐵素不出現(xiàn)腫瘤，但CV動(dòng)物口服蘇鐵素出現(xiàn)腫瘤。第13頁(yè)/共74頁(yè)14三.按遺傳學(xué)控制分類①近交系(inbredstrain)②封閉群（closedcolony）或遠(yuǎn)交系(outbredstock)③雜交群(hybrids)第14頁(yè)/共74頁(yè)15（一）近交系的應(yīng)用1．遺傳組成和遺傳性狀一致，對(duì)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)一致，因此，只需用少量的動(dòng)物，即可得到非常規(guī)律的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2．組織相容性抗原一致，異體移植不產(chǎn)生排斥反應(yīng)，是組織細(xì)胞和腫瘤移植實(shí)驗(yàn)中最為理想的材料。3．明顯的生物學(xué)特征，如先天畸形，高腫瘤發(fā)病率，對(duì)某些因子敏感和耐受等，這些特點(diǎn)在醫(yī)學(xué)研究中是天然模型，非常重要。4．多個(gè)近交系同時(shí)使用不僅可分析不同遺傳組成對(duì)某項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的不同反應(yīng)與影響，還可觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果是否具有普遍意義。第15頁(yè)/共74頁(yè)16（二）封閉群的特征及應(yīng)用1．封閉群動(dòng)物的遺傳組成具有很高的雜合性，在遺傳學(xué)上可作為選擇實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)群體，用于某些性狀遺傳的研究。用于藥物篩選和毒性試驗(yàn)等。2．封閉群動(dòng)物具有較強(qiáng)的繁殖力和生活力，表現(xiàn)為每胎產(chǎn)仔多，胎間隔短，仔鼠死亡率低等、生長(zhǎng)快、成熟早、對(duì)疾病抵抗力強(qiáng)、壽命長(zhǎng)、生產(chǎn)成本低優(yōu)點(diǎn)。因而廣泛應(yīng)用于預(yù)實(shí)驗(yàn)、學(xué)生教學(xué)等實(shí)驗(yàn)中。3．突變種所攜帶的突變基因通常導(dǎo)致動(dòng)物在某些方面的異常，從而可成為生理學(xué)、胚胎學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的模型。第16頁(yè)/共74頁(yè)17（三）雜交一代動(dòng)物的特征及應(yīng)用

1．遺傳和表型上的一致性

2．雜交優(yōu)勢(shì)

3．雜合的遺傳組成

4．作為某些疾病研究的模型第17頁(yè)/共74頁(yè)18

一、微生物和寄生蟲(chóng)感染的危害性

1．影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物和寄生蟲(chóng)感染可不同程度干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，從而影響研究工作的準(zhǔn)確性和可靠性，甚至得出錯(cuò)誤的結(jié)論。隱性感染常導(dǎo)致動(dòng)物生理生化指標(biāo)的改變，使實(shí)驗(yàn)得不到應(yīng)有的結(jié)果?；蛞?qū)嶒?yàn)處置，動(dòng)物抵抗力下降，使隱性感染顯性化，導(dǎo)致疾病的發(fā)生。第二節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物與寄生蟲(chóng)學(xué)質(zhì)量控制第18頁(yè)/共74頁(yè)192．影響動(dòng)物生產(chǎn)某些烈性傳染病如鼠痘、兔出血癥、犬細(xì)小病毒性腸炎等的流行，可導(dǎo)致動(dòng)物大批死亡或質(zhì)量下降，從而給動(dòng)物的生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行帶來(lái)嚴(yán)重影響。3．威脅人類健康許多人獸共患性疾病對(duì)飼養(yǎng)和研究人員的健康構(gòu)成威脅。特別是那些在動(dòng)物呈隱性感染、而對(duì)人類呈致死性感染的病原微生物（如流行性出血熱病毒），應(yīng)引起我們高度重視。4．污染實(shí)驗(yàn)材料如病原微生物污染了細(xì)胞培養(yǎng)物、腫瘤移植物或以動(dòng)物組織和細(xì)胞為生產(chǎn)原料的生物制品，不僅干擾實(shí)驗(yàn)，而且還可將病原擴(kuò)散，以至危害人類的健康。第19頁(yè)/共74頁(yè)205.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物感染寄生蟲(chóng)后不僅蟲(chóng)體對(duì)機(jī)體造成一定的損害，而且動(dòng)物機(jī)體也對(duì)蟲(chóng)體產(chǎn)生反應(yīng)，使動(dòng)物機(jī)體的生理、生化及免疫學(xué)指標(biāo)發(fā)生改變，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

1）掠奪宿主的營(yíng)養(yǎng)：

2）體外寄生蟲(chóng)對(duì)動(dòng)物的騷擾：

3）對(duì)宿主機(jī)體產(chǎn)生機(jī)械性損傷：

4）對(duì)宿主產(chǎn)生毒性作用：

5）對(duì)宿主生理、生化和免疫系統(tǒng)的影響。第20頁(yè)/共74頁(yè)21二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常見(jiàn)感染性疾病★重要的人獸共患病★主要的烈性傳染病★常見(jiàn)的微生物和寄生蟲(chóng)感染第21頁(yè)/共74頁(yè)221、重要的人獸共患病

（1）流行性出血熱

（2）弓形蟲(chóng)病

（3）淋巴細(xì)胞脈絡(luò)從腦膜炎

（4）沙門(mén)菌病

（5）狂犬病

（6）猴B病毒感染

（7）猴結(jié)核病第22頁(yè)/共74頁(yè)23疾病病原媒介動(dòng)物人類臨床癥狀傳染途徑猴皰疹病毒感染(B-Virusinfection)cercopithecineHerpesvirusType1獼猴類肌痛、發(fā)熱、頭痛；迅速發(fā)展的上行性麻痹；感覺(jué)異常、復(fù)視、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、潴尿、抽搐、吞咽困難，直至死亡唾液(咬傷)、抓傷出血熱(Koreanhemorrhagicfever)HantaanVirus

大鼠、小鼠肌痛、咳嗽，發(fā)熱、腹瀉、出血、蛋白尿、腎臟損害，嚴(yán)重致死吸入感染、嚙齒類動(dòng)物咬傷、傷口污染淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒感染癥(LCM)

Lyphocyticchoriomeningitisvirus

小鼠、倉(cāng)鼠類似流行性感冒的癥狀，頭痛、肌痛、發(fā)熱、惡心、嘔吐、喉痛、畏光。接觸感染(接觸小鼠糞便和尿液)；吸入；咬傷，或由節(jié)肢動(dòng)物如蚊子、蟑螂傳播狂犬病

(Rabies)Rhabdovirus

所有哺乳類頭痛、肌痛、發(fā)熱、恐水、狂妄、抽搐、昏厥、死亡

咬傷、皮膚傷口或黏膜感染含狂犬病毒的唾液

結(jié)核病(Tuberculosis)Mycobacteriumtu-berculosis犬、貓、猴

咳嗽、生痰、咳血、體重減輕、無(wú)力疲倦、發(fā)熱、發(fā)冷、惡病質(zhì)

吸入傳染，或經(jīng)口腔、傷口及消化道感染

弓形蟲(chóng)病toxoplasmosis貓、豬、羊、狗、鼠等導(dǎo)致自然流產(chǎn)、死胎、早產(chǎn)和新生兒嚴(yán)重感染，后天：局限性感染以淋巴結(jié)炎最為多見(jiàn)；全身性感染多見(jiàn)于免疫缺損者（愛(ài)滋病、惡性腫瘤）①先天性弓形蟲(chóng)病系通過(guò)胎盤(pán)傳染，②后天獲得性弓形蟲(chóng)病主要經(jīng)口感染沙門(mén)氏菌病

(Salmonellosis)Salmonellatyphimu-riumS．enteritidis鼠類、犬、貓、靈長(zhǎng)類急性腸胃炎，腹痛、腹瀉、惡心、發(fā)熱、厭食經(jīng)由食物、飲水感染第23頁(yè)/共74頁(yè)242、主要的烈性傳染?。?）鼠痘（2）兔出血癥（兔瘟）疾病病原癥狀傳播方式控制小鼠脫腳病(ectromelia)Mousepoxvirus腳、尾、鼻出現(xiàn)皮疹和潰瘍，嚴(yán)重出現(xiàn)尾壞死脫落。皮膚傷口、呼吸道、消化道兔出血癥RabbithemorrhagicdiseaseRabbithemorrhagicdiseasevirus病兔精神沉郁，食欲不振或廢絕，飲欲增加，被毛零亂、無(wú)光澤，兔耳耷拉。幼兔多呈急性型，通常看不到臨床癥狀，突然死亡。病兔的排泄物及污染物等，空氣傳播是主要傳播方式。第24頁(yè)/共74頁(yè)253、常見(jiàn)的微生物和寄生蟲(chóng)感染

（1）鼠肝炎病毒感染

（2）仙臺(tái)病毒感染

（3）鼠肺支原體病

（4）嗜肺巴斯德桿菌病

（5）小鼠呼腸孤3型病毒感染

（6）球蟲(chóng)病

（7）犬細(xì)小病毒感染

（8）犬瘟熱第25頁(yè)/共74頁(yè)26三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物和寄生蟲(chóng)控制國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)不同等級(jí)嚙齒類、兔、犬和猴等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物要求排除的細(xì)菌、病毒應(yīng)根據(jù)國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局制定的有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)(GB14922.2—2001)。有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)學(xué)等級(jí)及監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)是(GB14922.1—2001)

。第26頁(yè)/共74頁(yè)27第27頁(yè)/共74頁(yè)28第28頁(yè)/共74頁(yè)29第29頁(yè)/共74頁(yè)30

四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物學(xué)和寄生蟲(chóng)學(xué)質(zhì)量監(jiān)測(cè)（一）監(jiān)測(cè)的意義實(shí)施微生物學(xué)與寄生蟲(chóng)學(xué)監(jiān)測(cè)，是保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量及標(biāo)準(zhǔn)化的必要手段。通過(guò)監(jiān)測(cè)可掌握動(dòng)物群中病毒、細(xì)菌、寄生蟲(chóng)的流行情況，及時(shí)診斷感染性疾病，發(fā)現(xiàn)并控制其傳播，以保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的健康。（二）監(jiān)測(cè)的內(nèi)容不同級(jí)別實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物和寄生蟲(chóng)監(jiān)測(cè)內(nèi)容不同。國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局制定了標(biāo)準(zhǔn)(GBl4922.1—2001和GBl4922.2—2001)。（三）檢驗(yàn)方法目前國(guó)標(biāo)推薦使用的方法學(xué)和詳細(xì)檢驗(yàn)程序。病原菌以分離培養(yǎng)鑒定為主，病毒以檢測(cè)抗體為主，寄生蟲(chóng)以鏡檢為主。第30頁(yè)/共74頁(yè)31實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物及寄生蟲(chóng)監(jiān)測(cè)監(jiān)測(cè)程序：1.微生物檢測(cè)程序分離血清，檢查病毒抗體或其它病原的抗體

氣管分泌物，腸內(nèi)容物臟器分離細(xì)菌

真菌檢查動(dòng)物編號(hào)外觀檢查麻醉皮膚取樣取血無(wú)菌解剖檢測(cè)檢測(cè)報(bào)告（四）檢驗(yàn)程序

第31頁(yè)/共74頁(yè)322.寄生蟲(chóng)檢測(cè)程序弓形蟲(chóng)檢測(cè)

體外寄生蟲(chóng)檢測(cè)體內(nèi)寄生蟲(chóng)檢測(cè)

體外寄生蟲(chóng)檢測(cè)動(dòng)物編號(hào)外觀檢查麻醉拔毛或梳毛取血擠壓或刀片刮取皮層物取樣檢測(cè)檢測(cè)報(bào)告解剖、臟器、腸內(nèi)容物、糞便取樣第32頁(yè)/共74頁(yè)33取樣要求與監(jiān)測(cè)規(guī)則：1.普通動(dòng)物、清潔級(jí)動(dòng)物和無(wú)特定病原體動(dòng)物每三個(gè)月至少檢測(cè)一次。2.無(wú)菌動(dòng)物每年至少檢測(cè)一次。3.每2-4周檢測(cè)一次糞便標(biāo)本。第33頁(yè)/共74頁(yè)34實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不同生產(chǎn)繁殖單元取樣數(shù)量群體大小，只取樣數(shù)量<100100—150>500>5只>10只>20只

每個(gè)隔離器檢測(cè)2只取樣應(yīng)在每一生產(chǎn)繁殖單元的不同方位（如四角和中央）選取動(dòng)物。動(dòng)物的送檢容器應(yīng)按動(dòng)物級(jí)別要求編號(hào)和標(biāo)記，包裝好后安全送達(dá)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，并附送檢測(cè)單，寫(xiě)明送檢動(dòng)物的品種品系、級(jí)別、數(shù)量和檢測(cè)項(xiàng)目。第34頁(yè)/共74頁(yè)35檢測(cè)項(xiàng)目的分類

國(guó)標(biāo)對(duì)必須檢測(cè)和必要時(shí)檢測(cè)作了限定性說(shuō)明：“必須檢測(cè)項(xiàng)目：是指在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量評(píng)價(jià)時(shí)必須檢測(cè)的項(xiàng)目。必要時(shí)檢測(cè)項(xiàng)目：是指從國(guó)外引進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)、懷疑有本病流行時(shí)、申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證時(shí)必須檢測(cè)的項(xiàng)目”。第35頁(yè)/共74頁(yè)36監(jiān)測(cè)方法：1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒檢測(cè)：1）血清學(xué)診斷：血凝抑制試驗(yàn)（HI）；酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。2）病原學(xué)檢查：接種細(xì)胞培養(yǎng)物觀察CPE出現(xiàn)（鼠痘、鼠肝炎）；血吸附試驗(yàn)（仙臺(tái)病毒）；免疫酶試驗(yàn)（LCM病毒）。連續(xù)三次傳代未有病毒跡象為陰性。接種敏感動(dòng)物，觀察發(fā)病、抗體產(chǎn)生、病理改變、接種動(dòng)物病毒再分離。動(dòng)物組織細(xì)胞傳代培養(yǎng)。第36頁(yè)/共74頁(yè)373）病毒顆粒、抗原和核酸的檢出光鏡檢查病理改變或包涵體的存在。電鏡檢查組織內(nèi)或排泄物中的病毒顆粒。PAGE、PCR檢查病毒核酸。免疫法檢查組織內(nèi)、排泄物中的病毒抗原。第37頁(yè)/共74頁(yè)382.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物細(xì)菌檢測(cè)：1）正常動(dòng)物主要取氣管或鼻咽分泌物和盲腸內(nèi)容物作細(xì)菌培養(yǎng)。2）發(fā)病動(dòng)物對(duì)發(fā)生病變的各組織和臟器做細(xì)菌檢查。3）細(xì)菌監(jiān)測(cè)多采用病原學(xué)方法。第38頁(yè)/共74頁(yè)393.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物寄生蟲(chóng)檢測(cè)：1）體內(nèi)寄生蟲(chóng)檢查直接涂片：適于腸道蠕蟲(chóng)蟲(chóng)卵、腸道原蟲(chóng)及血液內(nèi)寄生蟲(chóng)。蟲(chóng)卵收集：飽和生理鹽水漂??；沉淀集卵，用于吸蟲(chóng)卵；透明膠紙粘取，用于蟯蟲(chóng)蟲(chóng)卵；尿液檢查，用于鼠膀胱線蟲(chóng)卵；尸體剖檢。2）體外寄生蟲(chóng)檢查被毛檢查透明膠紙粘取皮刮取法第39頁(yè)/共74頁(yè)40

（五）報(bào)告規(guī)定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量判定原則，即：經(jīng)檢測(cè)，如有一只動(dòng)物的一項(xiàng)指標(biāo)不符合該級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)要求，則判為不符合該級(jí)別標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果，由檢驗(yàn)人員及其負(fù)責(zé)人簽發(fā)檢測(cè)報(bào)告。第40頁(yè)/共74頁(yè)41第三節(jié)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳質(zhì)量控制主要包括兩個(gè)方面內(nèi)容，一是科學(xué)地進(jìn)行引種、繁殖和生產(chǎn)，即對(duì)生產(chǎn)過(guò)程進(jìn)行控制；二是建立定期的遺傳監(jiān)測(cè)制度，對(duì)產(chǎn)品的質(zhì)量進(jìn)行控制。遺傳質(zhì)量控制的重點(diǎn)是近交系和封閉群動(dòng)物。

遺傳監(jiān)測(cè)的目的是為了證實(shí)各品系應(yīng)具有的遺傳特性，以及是否發(fā)生遺傳突變和遺傳污染等，以確保被監(jiān)測(cè)的樣品符合該品系的要求。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)應(yīng)作為常規(guī)工作，在某種程度上講，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量比微生物質(zhì)量對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響更大。第41頁(yè)/共74頁(yè)42

遺傳是會(huì)發(fā)生改變的我們?yōu)槭裁撮L(zhǎng)的不同呢？第42頁(yè)/共74頁(yè)43一、遺傳改變的原因1、近交系遺傳改變的原因殘余的雜合性，盡管我們采用嚴(yán)格的兄妹交配，20代后還是存在1.4％的殘余雜合性，雜合子個(gè)體在受精率、繁殖率和生活力上均遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)純合子遺傳型個(gè)體，其在群體中地?cái)U(kuò)散引起群體遺傳變異。1.4％第43頁(yè)/共74頁(yè)44人為失誤造成外來(lái)的基因組雜交成一個(gè)近交系，產(chǎn)生遺傳污染可以避免染色體片段存在重復(fù)，缺失，易位，倒位，基因位點(diǎn)存在突變，若這些變異在繁育過(guò)程中固定下來(lái)，會(huì)引起群體遺傳改變。（染色體結(jié)構(gòu)的改變）第44頁(yè)/共74頁(yè)45遺傳突變，來(lái)自DNA序列的變化，這種變化可能是某核苷酸堿基的置換、缺失或插入。（是在基因水平上遺傳物質(zhì)中任何可檢測(cè)的能遺傳的改變）各種品系分布到各地長(zhǎng)期隔離繁育，造成品系特性發(fā)生很大變異第45頁(yè)/共74頁(yè)462、封閉群（遠(yuǎn)交群）遺傳改變的原因

最主要的是選擇壓同近交系一樣，遺傳污染和基因突變都能造成遠(yuǎn)交群的遺傳差異，但遠(yuǎn)交群等位基因分布改變的主要原因在于選擇。

原因：理論上要保持一個(gè)遠(yuǎn)交群所有基因頻率的相對(duì)比例沒(méi)有變化，最恰當(dāng)?shù)暮诵姆庇簯?yīng)有1000個(gè)動(dòng)物。第46頁(yè)/共74頁(yè)47

但事實(shí)上我們不可能做到這一點(diǎn)，特別是近代，人們?yōu)榱丝刂莆⑸镂廴?，采用剖腹產(chǎn)和悉生生物學(xué)技術(shù)定期地重建新的群體。在重建過(guò)程中，群體驟然變小，近交系數(shù)必將上升，因而導(dǎo)致雜合性下降，這也意味著某些基因被固定下來(lái)。在不同的單位這種對(duì)位點(diǎn)的不同固定，往往導(dǎo)致了同一品種動(dòng)物等位基因分布的改變。無(wú)主觀意識(shí)的定向選擇第47頁(yè)/共74頁(yè)48

二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的繁殖方法（一）近交系動(dòng)物的繁殖方法

1、引種：引種動(dòng)物應(yīng)來(lái)自近交系的基礎(chǔ)群

2、基礎(chǔ)群：目的是保持近交系自身的傳代繁衍和提供種源

3、血緣擴(kuò)大群：種動(dòng)物來(lái)自基礎(chǔ)群

4、生產(chǎn)群：目的是生產(chǎn)供應(yīng)動(dòng)物，種子來(lái)自基礎(chǔ)群或血緣擴(kuò)大群第48頁(yè)/共74頁(yè)49（二）封閉群動(dòng)物的繁殖方法1、引種：引種動(dòng)物數(shù)量要足夠多，小型嚙齒類動(dòng)物引種數(shù)目一般不少于25對(duì)。2、繁殖：封閉群應(yīng)足夠大，盡量避免近親交配。第49頁(yè)/共74頁(yè)50

近交系動(dòng)物國(guó)際命名的規(guī)則是根據(jù)動(dòng)物在來(lái)源、歷史和培育經(jīng)過(guò)而命名的。除一些歷史較長(zhǎng)已經(jīng)廣泛使用并獲得認(rèn)可的品系外，近交系、亞系和支系的命名按下面原則進(jìn)行。

1、普通近交系的命名

(1)一般均用1至4個(gè)大寫(xiě)英文字母表示。如ABAAKRSTAR(2)有些品系可由大寫(xiě)英文字母為首，結(jié)合數(shù)字加以命名。如C3HC57BL(3)非正規(guī)的命名，如果已為國(guó)際廣泛認(rèn)同者，可保留沿用，如129、6l5等，

(4)近交代數(shù)表示，一般在品系符號(hào)后括號(hào)里寫(xiě)上代數(shù)，并在代數(shù)前加寫(xiě)“F”如A(F78)。

(5)品系命名符號(hào)書(shū)寫(xiě)要全，應(yīng)使用公布的全稱，不能隨便縮寫(xiě)，尤其寫(xiě)論文報(bào)告，在材料方法里一定要把品系命名符號(hào)寫(xiě)全。例如C57這個(gè)縮寫(xiě)意味著七、八個(gè)特征不同的品系；只寫(xiě)C57BL也包括C57BL/1、C57BL/6J、C57BL/6NC57BL/10J等特征不同的亞系。

（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物命名第50頁(yè)/共74頁(yè)512、重組近交系的命名重組近交系的命名是在兩個(gè)祖系名稱縮寫(xiě)中間加大寫(xiě)字母X。同一系列中不同的近交系可在其后順加連字號(hào)，再加數(shù)字表示。例如AKR和C57BL/10雜交培養(yǎng)的一系列重組近交系可命名為AKXB3、亞系的命名方法是在原品系的名稱后加一道斜線，斜線后標(biāo)明亞系的符號(hào)，如DBA/2、C57BL/6J等。有些近交系的不同亞系之間遺傳差異較大，對(duì)實(shí)驗(yàn)處理的反應(yīng)不同，在實(shí)驗(yàn)報(bào)告或論文中應(yīng)注明所使用的亞系名稱。第51頁(yè)/共74頁(yè)524、封閉群的命名封閉群由2～4個(gè)大寫(xiě)英文字母命名，種群名稱前標(biāo)明保持者的英文縮寫(xiě)名稱，第一個(gè)字母須大寫(xiě)，后面的字母小寫(xiě)，一般不超過(guò)4個(gè)字母。保持者與種群名稱之間用冒號(hào)分開(kāi)。例如：N:NIH表示由美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院（N）保持的NIH封閉群小鼠。某些命名較早，又廣為人知的封閉群動(dòng)物，名稱與上述規(guī)則不一致時(shí)，仍可沿用其原來(lái)的名稱。如：Wistar大鼠，日本的ddy小鼠等。

第52頁(yè)/共74頁(yè)53

三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)質(zhì)量監(jiān)測(cè)

(一)檢測(cè)目的是檢查是否發(fā)生遺傳變異、是否混入其它動(dòng)物血緣或發(fā)生了錯(cuò)誤的交配等，以確保檢測(cè)群體符合該遺傳群體的要求。第53頁(yè)/共74頁(yè)54(二)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)監(jiān)測(cè)的一般性原則

1.整體性原則

2.必要性原則

3.連續(xù)性原則第54頁(yè)/共74頁(yè)55四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)基本內(nèi)容（一）主題內(nèi)容與適用范圍（二）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的遺傳分類及命名（三）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的繁殖方法（四）近交系動(dòng)物的遺傳質(zhì)量監(jiān)測(cè)第55頁(yè)/共74頁(yè)56五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)監(jiān)測(cè)的常用技術(shù)方法（一）近交系動(dòng)物的遺傳質(zhì)量檢測(cè)原理：由一個(gè)基因和多個(gè)基因決定的任何特征都能用來(lái)檢測(cè)一個(gè)品系。1.生化標(biāo)志基因(Biochemicalmarkers)檢測(cè)法近交系小鼠生化基因位點(diǎn)有13個(gè)，近交系大鼠的生化基因位點(diǎn)有9個(gè)。2.免疫標(biāo)志（Immunogeneticmarkers）檢測(cè)法（1）皮膚移植法（Skingrafting）（2）混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)法（3）血清學(xué)反應(yīng)法（4）腫瘤移植法第56頁(yè)/共74頁(yè)573．形態(tài)學(xué)標(biāo)記（Extermalmanifestations）檢測(cè)法（1）毛色基因測(cè)試（Coatcolorgenetesting）（2）下頜骨分析4.細(xì)胞遺傳學(xué)標(biāo)記（Cytogeneticmarkers）檢測(cè)法5.分子生物學(xué)標(biāo)記（DNAmarkers）檢測(cè)法（1）限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性（RFLP）（2）DNA指紋（3）微衛(wèi)星DNA的多態(tài)性（4）小衛(wèi)星DNA（5）隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA（RAPD）（6）單核苷酸多態(tài)性（SNP）第57頁(yè)/共74頁(yè)58第58頁(yè)/共74頁(yè)59形態(tài)學(xué)方法1.毛色基因檢測(cè)遺傳群體發(fā)生遺傳變異有時(shí)產(chǎn)生明顯可見(jiàn)的表型特征。第59頁(yè)/共74頁(yè)60

近交系的毛色基因品系毛色基因品系毛色基因Aa.b.cDBA/2a.b.C.dABA.B.c.DNCA.b.C.D.S.AKRa.B.cNHa.B.C.D.p.s.ALA.b.cKKa.B.c.D.S.BALB/ca.b.cNZBa.B.C.BLA.B.CNZWA.b.c.CBAA.b.C.D.p.SWRA.B.c.CPB-Fa.b.c.D.p.101Aw.B.C.CPB-FTA.B.C.129Aw.B.cch.p.C3Ha.B.C.615a.b.C.DC57BLa.B.C.TA1a.b.c.DC57BL/6a.B.C.SSBa.b.c.DC57La.b.C.*A-野生色、aa非野生色、Aw-白腹野生色、B-黑色、bb褐色、C-有色、cch

青紫蘭色、cc白化、D-深色、dd淡色、In-鉛灰、in黑灰、S-無(wú)色斑、ss有色斑。許多遺傳變異并不涉及毛色的變化，現(xiàn)已很少用第60頁(yè)/共74頁(yè)612.下頜骨形態(tài)分析法動(dòng)物的骨骼形態(tài)具有高度的遺傳性，而各種骨骼的形態(tài)、大小及其出現(xiàn)的差異均可作為鑒定品系的方法。下頜骨形態(tài)分析圖

1972，英國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心Festing提出第61頁(yè)/共74頁(yè)62近交系動(dòng)物遺傳監(jiān)測(cè)的免疫學(xué)方法在同一物種的不同個(gè)體之間，細(xì)胞膜表面抗原、免疫球蛋白和其它血清蛋白存在著不同類型，稱為同種異型，從而成為同種異型抗原。同種異型是由遺傳基因決定的，因此而被選擇作為遺傳監(jiān)測(cè)的標(biāo)記。微量細(xì)胞毒法是根據(jù)特異性抗體與細(xì)胞表面的同種異型抗原結(jié)合，在存在適當(dāng)?shù)难a(bǔ)體時(shí)，能殺死細(xì)胞的原理而進(jìn)行的測(cè)試方法。皮膚移植試驗(yàn)的原理是由于個(gè)體間組織相容性抗原不同，受體對(duì)供體的組織細(xì)胞產(chǎn)生免疫排斥，導(dǎo)致植物壞死。第62頁(yè)/共74頁(yè)63免疫標(biāo)記探測(cè)法1.皮膚移植，主要用于探測(cè)組織相容性基因的差異，它是一個(gè)敏感、使用廣泛的方法，以尾部皮膚移植法為好第63頁(yè)/共74頁(yè)64小鼠組織相容性位點(diǎn)的分布第64頁(yè)/共