中藥注射液局部用藥安全性評(píng)價(jià)

過敏性試驗(yàn)刺激性試驗(yàn)溶血性試驗(yàn)一、過敏反應(yīng)過敏反應(yīng)是一種變態(tài)反應(yīng),即一型超敏反應(yīng).當(dāng)過敏原(包括抗原與半抗原,如異種血清,微生物代謝產(chǎn)物,花粉,某些藥物或食物等)進(jìn)入機(jī)體時(shí),可以通過特殊機(jī)制,刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體.這種抗體附著在肥大細(xì)胞上,此后當(dāng)又有同樣抗原進(jìn)入機(jī)體時(shí),即與抗體相反應(yīng),使肥大細(xì)胞釋放出組胺等物質(zhì).過敏原刺激機(jī)體產(chǎn)生IgEIgE與肥大細(xì)胞、嗜堿細(xì)胞結(jié)合致敏靶細(xì)胞脫顆粒釋放活性介質(zhì)（如組胺，白三烯等）毛細(xì)血管擴(kuò)張，通透性增加等全身反應(yīng)，呼吸道反應(yīng)，皮膚反應(yīng)致敏階段發(fā)敏階段實(shí)驗(yàn)步驟致敏反應(yīng)：取豚鼠2只，隔天肌內(nèi)注射蘆丁提取物0.5ml，連續(xù)3次，并行陰性對(duì)照組和陽性對(duì)照組各為2只豚鼠。激發(fā)反應(yīng)：于首次注射后的第14天，腹腔注射蘆丁提取物2-3ml，觀察注射后有無用爪搔鼻、噴嚏、豎毛、抽搐、呼吸困難、大小便失禁、休克和死亡等反應(yīng)。10分鐘內(nèi)先后出現(xiàn)上述體征，30分鐘內(nèi)死亡。過敏性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)二、蘆丁提取物刺激性反應(yīng)化學(xué)刺激物理刺激炎癥等其它刺激股四頭肌法

股四頭肌在后肢大腿的前面，正中為股直肌，股直肌之下為股中間肌，股直肌之外為股外側(cè)肌，股直肌之內(nèi)側(cè)為股內(nèi)側(cè)肌，四塊肌肉合稱股四頭肌。實(shí)驗(yàn)步驟取健康家兔兩只，分別于一側(cè)后肢的股四頭肌處注射蘆丁提取物提取物3ml，于另一側(cè)后肢的對(duì)應(yīng)部位注射同容積的滅菌生理鹽水作為對(duì)照。進(jìn)針角度30-45度為宜。48h后試驗(yàn)家兔健康如常。將家兔由耳緣靜脈注射空氣處死，解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射部位肌肉組織的反應(yīng)。并行陽性對(duì)照組：1%酒石酸銻鉀注射液刺激性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)將肌肉組織的反應(yīng)分為六級(jí)：0級(jí)（-）：注射供試品部位的肌肉組織與對(duì)照部位肌肉組織任何差異。1級(jí)（+）：注射供試品部位的肌肉組織有充血，直徑在0.5cm以下。2級(jí)（++）：注射供試品部位的肌肉組織有紅腫充血，直徑在1cm左右。3級(jí)（+++）：注射供試品部位的肌肉組織有紅腫、發(fā)紫、光澤消失、可見壞死點(diǎn)。4級(jí)（++++）：注射供試品部位的肌肉組織有紅腫、發(fā)紫、光澤消失、壞死范圍直徑達(dá)0.5cm左右。5級(jí)（+++++）：注射供試品部位肌肉的各項(xiàng)反應(yīng)更重，有大片壞死。靜脈注射制劑的安全性評(píng)價(jià)靜脈注射制劑根據(jù)我國藥政部門的規(guī)定，要必須進(jìn)行常規(guī)安全性評(píng)價(jià)，主要包括血管刺激性試驗(yàn)、體外溶血性試驗(yàn)、過敏性試驗(yàn)、熱原試驗(yàn)等。

血管刺激性試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?為確保注射液制劑安全性，檢查制劑經(jīng)多次靜脈注射后對(duì)血管刺激性反應(yīng)。動(dòng)物:家兔分組:供試品組生理鹽水對(duì)照組實(shí)驗(yàn)步驟家兔8只，禁食16小時(shí)，隨機(jī)分成2組，每組4只。設(shè)供試品組與生理鹽水對(duì)照組。兔固定于兔箱，藥液通過消毒恒速注射器與小兒頭皮針注入耳緣靜脈內(nèi)。每天給藥1次，連續(xù)3天。

實(shí)驗(yàn)給藥期間，觀察動(dòng)物全身反應(yīng)、血管及周圍組織的刺激性反應(yīng)。組織病理學(xué)檢查于末次給藥完畢后兩天，剪下各兔進(jìn)針點(diǎn)前方的耳靜脈及其周圍組織一段（長約1.5cm）固定于福爾馬林生理鹽水溶液中，送病理學(xué)檢查。

三、體外溶血試驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)?zāi)康?為確保注射液制劑安全性，檢查制劑,有無溶血和紅細(xì)胞凝集等反應(yīng)。動(dòng)物:家兔供試品：蘆丁提取物

實(shí)驗(yàn)步驟2%兔紅細(xì)胞生理鹽水混懸液制備：取兔1只，頸動(dòng)脈放血，將血盛于放有玻璃珠的燒杯內(nèi)，輕輕搖蕩約10分鐘，除去纖維蛋白，用生理鹽水反復(fù)洗3-4次，將所得紅細(xì)胞按其容積，用生理鹽水稀釋成2%的混懸液。實(shí)驗(yàn)步驟試管7支，編號(hào)后依次排列于試管架上，按表格分別加入2%兔紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水，混勻后置于37C水浴中30min，然后向各管內(nèi)加入不同量的蘆丁提取物注射液，第6管為陰性對(duì)照，第7管加入蒸餾水作為陽性對(duì)照。各管輕輕搖勻后，置37C恒溫水浴中。開始每隔15分鐘觀察1次，1小時(shí)后每隔1小時(shí)觀察1次，共觀察4小時(shí)（雙管法測(cè)定）。評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)全溶血:溶液澄明,紅色,管底無紅細(xì)胞殘留。部分溶血:溶液澄明,紅色或棕色,底部尚有