真菌顯微鏡標本制

真菌顯微鏡標本制備與形態(tài)觀察技術酵母菌的血球計數(shù)技術酵母菌的形態(tài)觀察

實驗原理酵母菌是不運動的單細胞真核微生物，其大小通常比細菌大幾十倍甚至十幾倍。大多數(shù)以出芽方式進行無性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通過接合產(chǎn)生子囊孢子。本實驗是通過美藍染液水浸片和水—碘液水浸片來觀察酵母的形態(tài)和出芽生殖方式。

美藍是一種無毒的染料，它的氧化型呈藍色，還原型無色。用美藍對酵母的活細胞進行染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內(nèi)具有較強的還原能力，使美藍由藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。因此，具有還原能力的酵母活細胞是無色的，而死細胞或代謝作用微弱的衰老細胞則呈藍色，借此即可對酵母菌的死活細胞進行鑒別。5）染色約0.5h后再次進行觀察，注意死活細胞數(shù)量是否增加。6）用0.05%呂氏堿性美藍染液重復上述操作。3、水一碘液鏡片的觀察在載玻片中央加一小滴革蘭氏染色用碘液，然后在其上加3小滴水，取少許酵母菌苔放在水一碘液中混勻，蓋上蓋玻片后鏡檢。

注意事項1、加染液不宜過多或過少，否則，在蓋上蓋玻片時，菌液會溢出或出現(xiàn)大量氣泡而影響觀察。2、蓋玻片不宜平著放下，以免產(chǎn)生氣泡影響觀察。酵母菌的出芽生殖蜉蝣體表面的酵母菌霉菌的形態(tài)觀察實驗原理霉菌為真核微生物，菌絲較粗大，有分枝或不分枝的。菌絲體為五色透明或暗褐色至黑色，或呈現(xiàn)鮮艷的顏色。在顯微鏡下觀察時，菌絲皆呈管狀。在固體培養(yǎng)基上生長，為絨毛狀或棉絮狀。一些較高等的霉菌絲狀管道中皆有橫隔，由橫格狀菌絲隔成許多細胞。細胞易收縮變形，而且孢子很容易分散，所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。該染色液使細胞不變形，具有防腐殺菌作用，且不易干燥．，能保持較長時間，溶液本身呈藍色，有一定的染色效果。水浸片法觀察1）取一塊潔凈的載玻片，于載玻片的中央加一滴美藍染色液，2）按無菌操作用接種環(huán)挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均勻。3）用潔凈的加蓋玻片輕輕蓋上，注意不要產(chǎn)生氣泡，4）置于顯微鏡下觀察，菌絲呈蘭色，顏色的深度隨菌齡的增加而減弱。各種霉菌的形態(tài)結構觀察根霉時，注意觀察其菌絲有無橫隔、假根、孢子囊柄、孢子囊、囊軸、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。觀察毛霉時，注意觀察其菌絲無橫隔、孢子囊柄、囊軸、孢子囊孢子及后垣孢子。觀察曲霉時，注意觀察其菌絲有橫隔、足細胞、分生孢子梗、頂囊、小梗（形狀、層數(shù)及著生情況）、分生孢子。觀察青霉時，注意觀察其菌絲有橫隔、分生孢子梗、帚狀枝（小梗的輪數(shù)及對稱性）、分生孢子。觀察紅曲霉時，注意觀察其菌絲有橫隔、分生孢子著生情況、閉囊殼、子囊孢子。米曲霉黑曲霉血球計數(shù)板酵母菌的血球計數(shù)(1)將血球計數(shù)板用擦鏡紙擦凈,在中央的計數(shù)室上加蓋蓋玻片.

(2)將稀釋后的酵母菌懸液,用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣,使菌液緩緩滲入,多余的菌液用吸水紙吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球計數(shù)室內(nèi).

計數(shù)原則(1)計數(shù)時,如果使用16格×25格規(guī)格的計數(shù)室,要按對角線位,取左上,右上,左下,右下4個中格(即100個小格)的酵母菌數(shù).如果規(guī)格為25格×16格的計數(shù)板,除了取其4個對角方位外,還需再數(shù)中央的一個中格(即80個小方格)的酵母菌數(shù).

3.計算公式

(1)16格×25格的血球計數(shù)板計算公式:

酵母細胞數(shù)/ml=100小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)/100×400×10000×稀釋倍數(shù)

(2)25格x16格的血球計數(shù)板計算公式:

酵母細胞