糖類、蛋白質(zhì)、脂肪的鑒定

思考題：1、糖類、脂肪、蛋白質(zhì)鑒定的實(shí)驗(yàn)原理2、常見的還原糖有哪些？取材的要求3、斐林試劑的組成，使用時(shí)的注意事項(xiàng)4、雙縮脲試劑的組成，使用時(shí)注意事項(xiàng)5、斐林試劑和雙縮脲試劑的比較6、脂肪鑒定中酒精的用法和作用7、脂肪鑒定中能否直接觀察顏色？借助什么來觀察？8、如何鑒定淀粉，顏色反應(yīng)如何第一頁，共21頁。1.實(shí)驗(yàn)原理：化學(xué)試劑+有機(jī)化合物→特定的顏色(1)還原糖+斐林試劑水浴加熱磚紅色沉淀(2)脂肪+蘇丹Ⅲ→橘黃色脂肪+蘇丹Ⅳ→紅色(3)蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑→紫色第二頁，共21頁。2、常見的還原糖有哪些？取材的要求還原糖：可被氧化充當(dāng)還原劑的糖。(常見的有：葡萄糖、果糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖)

注意：蔗糖不是還原糖3、斐林試劑的組成，使用時(shí)注意事項(xiàng)斐林試劑：甲液：0.1g/mL的NaOH溶液乙液：0.05g/mL的CuSO4溶液使用注意事項(xiàng)：等量混合，現(xiàn)配現(xiàn)用（

NaOH+CuSO4）第三頁，共21頁。1.點(diǎn)撥：還原糖+斐林試劑

磚紅色沉淀

可溶性還原糖與斐林試劑發(fā)生作用，可生成磚紅色的Cu2O沉淀。（放在盛有50-65℃溫水的大燒杯）水浴加熱顏色變化：淺藍(lán)色棕色磚紅色第四頁，共21頁。1步驟：樣液制備:（取材5g，加入石英砂和

5ml水）(1)取樣液2ml于試管中(2)加入新配制的斐林試劑1ml（甲液和乙液等量混合均勻后再加入）盛有50-65℃溫水的大燒杯）

(3)水浴加熱2min左右(（4）觀察顏色變化（淺藍(lán)色→棕色→磚紅色）第五頁，共21頁。注意事項(xiàng)：（1）材料的選?。哼€原糖含量高，白色或近于白色，如蘋果》梨》白蘿卜。

思考：西瓜、甘蔗、甜菜可以嗎？為什么？（2）試劑：斐林試劑(等量混合、現(xiàn)配現(xiàn)用)

甲液：0.1g/mL的NaOH溶液

乙液：0.05g/ml的CuSO4溶液第六頁，共21頁。4、雙縮脲試劑組成，使用時(shí)注意事項(xiàng)第七頁，共21頁。雙縮脲試劑組成：A液：0.1g/mL的NaOH溶液B液：0.01g/mL的CuSO4溶液使用注意事項(xiàng)：先加A液1mL于樣液中，再加B液4滴于樣液中（1）蛋白質(zhì)+雙縮脲試劑→紫色

第八頁，共21頁。2步驟：（1）試管中加樣液2mL（2）加雙縮脲試劑A液1mL（造成堿性環(huán)

境），搖勻（3）加雙縮脲試劑B液4滴，搖勻（4）觀察顏色變化（紫色）

注：①樣液濃度不宜過高，以免實(shí)驗(yàn)后黏住試管壁，洗不干凈。②B液不能過量，多余的B液會(huì)與A液反應(yīng)成藍(lán)色，而掩蓋生成的紫色。第九頁，共21頁。5.比較斐林試劑和雙縮脲試劑0.1g/mLNaOH同甲液0.01g/mLCuSO40.05g/mLCuSO4還原性糖蛋白質(zhì)等量混合后再加入先加A液1mL，搖勻，再加B液4滴50-65℃水浴加熱磚紅色沉淀紫色絡(luò)合物不需加熱，搖勻第十頁，共21頁。6、脂肪鑒定中酒精的用法和作用7、脂肪鑒定中能否直接觀察顏色？借助什么來觀察？第十一頁，共21頁。3.脂肪+蘇丹Ⅲ→橘黃色脂肪+蘇丹Ⅳ→紅色第十二頁，共21頁。（2）步驟材料的選取：含脂肪量高的組織，如花生的子葉。①取材：取一粒浸泡過的花生種子，去掉種皮②切片③制片：（切片越薄越好）將最薄的花生切片放在載玻片中央④染色：滴2～3滴蘇丹Ⅲ染液，染色3min，用吸水紙吸去染液，再滴體積分?jǐn)?shù)50%的酒精洗去浮色，再用吸水紙吸去多余的酒精（蘇丹Ⅲ易溶于酒精中，避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果），滴1～2滴清水于材料切片上→蓋上蓋玻片⑤鏡檢觀察：光學(xué)顯微鏡對(duì)光→低倍鏡尋找著色圓形小顆?！弑剁R觀察染成橘黃色的脂肪顆粒第十三頁，共21頁。8、如何鑒定淀粉，顏色反應(yīng)如何第十四頁，共21頁。

用試管取2mL待測(cè)組織樣液，向試管內(nèi)滴加1～2滴碘液，觀察顏色變化。4、淀粉+碘→藍(lán)色加1~2滴碘液第十五頁，共21頁。1.鑒定生物組織中可溶性還原糖的試劑A．斐林試劑B．雙縮脲試劑C．蘇丹Ⅲ染液D．蘇丹Ⅳ染液2.能與斐林試劑反應(yīng)產(chǎn)生磚紅色沉淀的是A．淀粉B．果糖C．蔗糖D．纖維素3.下列哪個(gè)實(shí)驗(yàn)用到顯微鏡（）A可溶性還原糖的鑒定B．蛋白質(zhì)的鑒定C．脂肪的鑒定D．淀粉的鑒定ACB第十六頁，共21頁。4.用斐林試劑鑒定可溶性還原糖時(shí)，溶液顏色的變化過程為（）A．無色一磚紅色（沉淀）B．淺藍(lán)色一磚紅色（沉淀）C．淺藍(lán)色一藍(lán)色一磚紅色（沉淀）D．淺藍(lán)色一棕色一磚紅色（沉淀）5.下列物質(zhì)中，能被蘇丹IV染液染成紅色的是（）A馬鈴薯塊莖B．浸軟的蓖麻種子C．蛋清液D．蘋果DB第十七頁，共21頁。6.還原糖的實(shí)驗(yàn)中，加入斐林試劑時(shí)必須要A．先加入斐林試劑甲液，后加入乙液B．先加入斐林試劑乙液，后加入甲液C．將斐林試劑的甲液和乙液混合均勻后再加D．以上A、B、C三種操作方法都正確7.鑒定蛋白質(zhì)樣品時(shí)加雙縮脲試劑正確做法是A．先加A液，混合后再加B液搖勻觀察B．先加B液，混合后再加A液搖勻觀察C．A、B液混合后加入，搖勻后觀察D．A、B液同時(shí)加入樣液，搖勻后觀察CA第十八頁，共21頁。即：還原糖中的醛基（–CHO）被Cu(OH)2氧化，Cu(OH)2被還原成磚紅色的Cu2O沉淀還原糖的鑒定原理：第十九頁，共21頁。5.比較斐林試劑和雙縮脲試劑0.1g/mL的NaOH溶液0.1g/mL的NaOH溶液0.01g/mLCuSO4溶液0.05g/mL的CuSO4溶液還原性糖蛋白質(zhì)甲液和乙液等量混合均勻后再加入先加雙縮脲試劑A液1mL，搖勻，再加雙縮脲試劑B液4滴50-65℃水浴加熱磚紅色沉淀