專(zhuān)題1基因工程教案

2.情感態(tài)度與價(jià)值觀方面認(rèn)同基因工程的誕生和發(fā)展離不開(kāi)理論研究和技術(shù)創(chuàng)新。2.教學(xué)難點(diǎn)基因工程載體需要具備的條件。三、教學(xué)方法講授法，對(duì)話(huà)法2五、教學(xué)過(guò)程基因工程的概念：“基因工程是指按照人們的愿望，進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)，通過(guò)體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性，創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類(lèi)型和生物產(chǎn)品。”一、限制性核酸內(nèi)切酶——“分子手術(shù)刀”⑴來(lái)源⑵作用5磷酸二酯鍵是核酸中核苷酸的連接方式，組成了核酸的一縮合成酯鍵，該酯鍵稱(chēng)3,5磷酸二酯鍵。若干個(gè)核苷酸間以3′,5′磷酸二酯鍵(如下圖)連接，已參與二酯鍵的形成，故稱(chēng)核苷酸殘基。析出限制酶存在于原核生物中的作用是什么嗎？〖生思考討論回答，師提示〗：原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在長(zhǎng)期的進(jìn)化過(guò)程中形成了一套完善的防御機(jī)制，以防止外來(lái)病原物的侵害。限制酶就是細(xì)菌的一以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，從而達(dá)到保護(hù)自身的目的。〖生思考討論回答，師提示〗迄今為止，基因工程中使用的限制酶絕大部分都是從細(xì)菌或霉菌中提取出來(lái)的，它們各自可以識(shí)別和切斷DNA上特定的堿基序列。細(xì)菌中限制酶之所以不切斷自身識(shí)別切割序列，或者通過(guò)甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開(kāi)。A⑶結(jié)果①黏性末端②平末端一條中心軸線(xiàn)(如右圖)，中軸線(xiàn)兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ(chēng)重復(fù)排列的。(1)…CTGCA(2)…AC(3)GC…(4)…G(5)G…(6)…GC…G…TGCG……CTTAAACGTC……CG(7)GT…(8)AATTC…CA…G…用DNA連接酶將它們連接起來(lái)？〖生思考討論回答，師提示〗答：㈠分類(lèi)到的，稱(chēng)之為E·coli連接酶。另一種是從T4噬稱(chēng)為T(mén)4連接酶。㈡作用端磷酸基團(tuán)上的羥基連接起來(lái)形成酯鍵，而不是連接互補(bǔ)堿基之間的氫鍵。程中所用的連接酶有兩種：一種是從大腸桿菌中分離得到的，稱(chēng)之為E·coli連接酶。另一種是從T4噬菌體中分離得到，稱(chēng)為T(mén)4連接酶。這兩種連接酶催化反應(yīng)基本相同，都是連接雙鏈DNA的缺口(nick)，而不能連接單鏈DNA。DNA連接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯鍵(在相鄰核苷酸的3位碳原子上的羥基與5位碳原子上所連磷酸基團(tuán)的羥基之間形成)，那么，二者的差別主要表現(xiàn)在什么地方呢？ (1)DNA聚合酶只能將單個(gè)核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羥基上，形成磷酸二酯鍵；而DNA連接酶是在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵，不是在單個(gè)核苷酸與DNA片段 (2)DNA聚合酶是以一條DNA鏈為模板，將單個(gè)核苷酸通過(guò)磷酸二酯鍵形成一條與模板鏈互補(bǔ)的DNA鏈；而DNA連接酶是將DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接起來(lái)。因此DNA連接此外，二者雖然都是由蛋白質(zhì)構(gòu)成的酶，但組成和性質(zhì)各不相同?！忌伎加懻摶卮?，師提示〗：迄今為止，所發(fā)現(xiàn)的DNA連接酶都不具有連接單鏈DNA的能力，至于原因，現(xiàn)在還不清楚，也許將來(lái)會(huì)發(fā)現(xiàn)可以連接單鏈DNA的酶。三、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)載車(chē)”〖生思考討論回答，師提示〗：能自我復(fù)制、有一個(gè)或多個(gè)切割位點(diǎn)、有標(biāo)記基因位點(diǎn)及對(duì)受體細(xì)胞無(wú)害等〖生思考討論回答，師提示〗：基因工程中作為載體使用的DNA分子很多都是質(zhì)粒 (plasmid)，即獨(dú)立于細(xì)菌擬核處染色體DNA之外的一種可以自我復(fù)制、雙鏈閉環(huán)的裸露的DNA分子。是否任何質(zhì)粒都可以作為基因工程載體使用呢？其實(shí)不然，作為基因工程使用的載體必需滿(mǎn)足以下條件。 (1)載體DNA必需有一個(gè)或多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)，以便目的基因可以插入到載體上去。這些供目的基因插入的限制酶的切點(diǎn)所處的位置，還必須是在質(zhì)粒本身需要的基因片段之外，這樣才不至于因目的基因的插入而失活。 (2)載體DNA必需具備自我復(fù)制的能力，或整合到受體染色體DNA上隨染色體DNA (3)載體DNA必需帶有標(biāo)記基因，以便重組后進(jìn)行重組子的篩選。 (4)載體DNA必需是安全的，不會(huì)對(duì)受體細(xì)胞有害，或不能進(jìn)入到除受體細(xì)胞外的其他 〖生思考討論回答，師提示〗可能是剪切位點(diǎn)或連接位點(diǎn)選得不對(duì)(也可能是其他原因)。簡(jiǎn)述基因工程原理及基本操作程序。2.能力方面嘗試設(shè)計(jì)某一轉(zhuǎn)基因生物的研制過(guò)程。基因工程基本操作程序的四個(gè)步驟。2.教學(xué)難點(diǎn)(1)從基因文庫(kù)中獲取目的基因。(2)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因。三、教學(xué)方法講授法、對(duì)話(huà)法2五、教學(xué)過(guò)程1．為什么要有“目的基因的獲取”這一步？〖學(xué)生思考討論回答，師提示〗引導(dǎo)學(xué)生看本專(zhuān)題題圖中基因工程的概念：“基因工程是指2．為什么要有“表達(dá)載體的構(gòu)建”這一步？到構(gòu)建表達(dá)載體的目的是為了使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時(shí)使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用。3.為什么要有“目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞”這一步？〖學(xué)生思考討論回答，師提示〗教材指出含有目的基因的表達(dá)載體只有進(jìn)入受體細(xì)胞，并且維持穩(wěn)定和表達(dá)，才能實(shí)現(xiàn)一種生物的基因在另一種生物中的轉(zhuǎn)化?！紝W(xué)生思考討論回答，師提示〗這是因?yàn)槟康幕蚴欠裾嬲迦胧荏w細(xì)胞的DNA中，是否能夠在受體細(xì)胞中穩(wěn)定遺傳和正確表達(dá)，只有通過(guò)檢測(cè)、鑒定才能得知?！忌伎加懻摶卮穑瑤熖崾尽?970年，特明(H.M.Temin)和巴爾的摩(D.Baltimore)酶，由于與中心法則中的從DNA到RNA的轉(zhuǎn)錄是反向的，所以稱(chēng)為反轉(zhuǎn)錄酶(reversetranscriptase)。聚合酶一樣，反轉(zhuǎn)錄酶也以5′→3′方向合成DNA(圖1-3)。mRNAcDNA程cDNA合成過(guò)程是：第一步，反轉(zhuǎn)錄酶以RNA為模板合成一條與RNA互補(bǔ)的DNA單鏈，形成RNA-DNA雜交分子。第二步，核酸酶H使RNA-DNA雜交分子中的RNA鏈降解，使之PCR擴(kuò)增是獲取目的基因的一種非常有用的方法，也是進(jìn)行分子鑒定和檢測(cè)的一種很靈敏的第一步：將反應(yīng)體系(包括雙鏈模板、引物、耐高溫的DNA聚合酶、四種脫氧核糖核苷酸以及酶促反應(yīng)所需的離子等)加熱至90~95℃，使雙鏈DNA模板兩條鏈之間的氫鍵打開(kāi)，變第二步：將反應(yīng)體系降溫至55~60℃，使兩種引物分別與模板DNA鏈3′端的互補(bǔ)序列互補(bǔ)配對(duì)，這個(gè)過(guò)程稱(chēng)為復(fù)性。第三步：將反應(yīng)體系升溫至70~75℃，在耐高溫的DNA聚合酶催化作用下，將與模板互補(bǔ)的單個(gè)核苷酸加到引物所提供的3-OH上，使DNA鏈延伸，產(chǎn)生一條與模板鏈互補(bǔ)的DNA從基因文庫(kù)中找到目的基因是一件比較復(fù)雜的事情，要根據(jù)目的基因已有的某些信息來(lái)進(jìn)行。下面介紹一種根據(jù)基因的部分核苷酸序列找到目的基因的方法。第一步，通過(guò)PCR方法將目的基因已知的部分核苷酸序列擴(kuò)增出來(lái)，進(jìn)行放射性同位素標(biāo)記(也可以用別的標(biāo)記方法進(jìn)行，如生物素、熒光素等)，即用標(biāo)記了放射性同位素的目的DNA第二步，將基因文庫(kù)中的所有菌落轉(zhuǎn)移至硝酸纖維膜上(也可以用其他類(lèi)型的膜)，然后，通過(guò)處理溶解消化掉細(xì)菌中的蛋白質(zhì)，并使DNA固定在膜上。ern第四步，在X光底片上出現(xiàn)黑斑的菌落，這表明這個(gè)菌落中含有所需要的目的基因(若選用別的標(biāo)記方法，有陽(yáng)性信號(hào)的菌落則含有所需要的目的基因)。第五步，從該菌落中再提取目的基因?！忌伎加懻摶卮?，師提示〗：不可以。因?yàn)槟康幕蛟诒磉_(dá)載體中得到表達(dá)并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是： (1)生物之間進(jìn)行基因交流，需使用啟動(dòng)子和終止子才能比較有利于基因的表達(dá)；如通過(guò)cDNA文庫(kù)獲得的目的基因沒(méi)有啟動(dòng)子，只將編碼序列導(dǎo)入受體生物中無(wú)法轉(zhuǎn)錄； (2)為了增強(qiáng)目的基因的表達(dá)水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強(qiáng)子等； (3)目的基因是否導(dǎo)入受體生物中需要有篩選標(biāo)記； (4)有時(shí)需要確定目的基因表達(dá)的產(chǎn)物存在于細(xì)胞的什么部位，往往要加上可以標(biāo)識(shí)存在部位的基因(或做成目的基因與標(biāo)識(shí)基因的融合基因)，如綠色熒光蛋白基因等。主要考慮以下幾方面的因素。 (1)基因的特點(diǎn)：如果一個(gè)來(lái)自動(dòng)物的目的基因含有內(nèi)含子，就不能用于轉(zhuǎn)基因植物，因?yàn)閯?dòng)物中內(nèi)含子的剪接系統(tǒng)與植物的不同，植物不能將動(dòng)物基因的內(nèi)含子剪切掉，只能用該基因的cDNA?；虻漠a(chǎn)物如果是一個(gè)糖蛋白，那么該基因在原核生物細(xì)菌中表達(dá)出來(lái)的蛋白就可能不具備天然狀態(tài)下的活性，因?yàn)樘堑鞍咨系奶擎準(zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體上加上的，而細(xì)菌無(wú)這些細(xì)胞器。黃澤穎第8頁(yè)2022-3-23 (2)要選擇強(qiáng)啟動(dòng)子或組織特異性啟動(dòng)子。啟動(dòng)子有強(qiáng)有弱，選擇強(qiáng)啟動(dòng)子可以增加轉(zhuǎn)錄活性，使基因產(chǎn)物量增多。如果希望基因在生物的某個(gè)組織表達(dá)，如只在植物種子中表達(dá)，就要選擇種子中特異表達(dá)的啟動(dòng)子。 (3)要有選擇標(biāo)記基因，如抗生素基因，以便選擇出真正的轉(zhuǎn)基因生物。三、將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞〖思考與探究〗2.根據(jù)農(nóng)桿菌可將目的基因?qū)腚p子葉植物的機(jī)理，你能分析出農(nóng)桿菌不能將目的基因?qū)雴巫尤~植物的原因嗎？若想將一個(gè)抗病基因?qū)雴巫尤~植物，如小麥，從理論上〖生思考討論回答，師提示〗：農(nóng)桿菌可分為根瘤農(nóng)桿菌和發(fā)根農(nóng)桿菌，在植物基因工程中計(jì)，約有93屬643種雙子葉植物對(duì)根瘤農(nóng)桿菌敏感。裸子植物對(duì)該菌也敏感。當(dāng)這些植物被該菌侵染后會(huì)誘發(fā)腫瘤。近年來(lái)，也有報(bào)道該菌對(duì)單子葉植物也有侵染能力。根瘤農(nóng)桿菌侵染植物是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程。根瘤農(nóng)桿菌具有趨化性，即植物的受傷組織會(huì)產(chǎn)生一些糖類(lèi)和酚類(lèi)物質(zhì)吸引根瘤農(nóng)桿菌向受傷組織集中。研究證明，主要酚類(lèi)誘導(dǎo)物為乙酰丁香酮和羧基乙酰丁香酮，這些物質(zhì)主要在雙子葉植物細(xì)胞壁中合成，通常不存在于單子葉植物中，這也是單子葉植物不易被根瘤農(nóng)桿菌侵染的原因。近年來(lái)還發(fā)現(xiàn)一些中性糖，如L-阿拉伯糖、D-木糖等也有誘導(dǎo)作用。酚類(lèi)物質(zhì)和糖類(lèi)物質(zhì)既可以作為根瘤農(nóng)桿菌的趨化物，又可以作為農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上Vir區(qū)(毒性區(qū))基因的誘導(dǎo)物，使Vir區(qū)基因活化，導(dǎo)致T-DNA的加工和轉(zhuǎn)移，從而侵染植物細(xì)胞。以選擇使用。利用農(nóng)桿菌侵染單子葉植物進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化時(shí)，是需要加上述酚類(lèi)物質(zhì)的，同時(shí)單子葉植物種類(lèi)不同，農(nóng)桿菌侵染進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化的效果也有很大差異。如果想將一個(gè)抗病毒基因轉(zhuǎn)入小麥，也可以用農(nóng)桿菌，但要注意兩點(diǎn)：①要選擇合適的農(nóng)桿菌菌株，因?yàn)椴皇撬械霓r(nóng)桿菌菌株都可以侵染單子葉植物；②要加趨化和誘導(dǎo)的物質(zhì)，一般為乙酰丁香酮等，目的是使農(nóng)桿菌向植物組織的受傷部位靠攏(趨化性)和激活農(nóng)桿菌的Vir區(qū)(誘導(dǎo))的基因，使T-DNA轉(zhuǎn)移并插入到染色體DNA上?！忌伎加懻摶卮?，師提示〗：構(gòu)建基因文庫(kù)是獲取目的基因的方法之一，并不是惟一的方式。如果所需要的目的基因序列已知，就可以通過(guò)PCR方式從含有該基因的生物的DNA中，直接獲得，也可以通過(guò)反轉(zhuǎn)錄，用PCR方式從mRNA中獲得，不一定要構(gòu)建基因文庫(kù)。但如果所需要的目的基因的序列完全不知，或只知道目的基因序列的一段，或想從一種生物體內(nèi)獲得許多基因，或者想知道這種生物與另一種生物之間有多少基因不同，或者想知道一種生物在個(gè)體發(fā)育的不同階段表達(dá)的基因有什么不同，或者想得到一種生物的全基因組序列，往往就需要構(gòu)建基因？DNA不算基因工程。分子雜交技術(shù)是基因工程中使用頻率很高的一項(xiàng)技術(shù)，主要用于檢測(cè)和鑒定，可以分為核酸Southern雜交──DNA和DNA分子之間的雜交。目的基因是否整合到受體生物的染色體DNA穩(wěn)定存在和遺傳的關(guān)鍵。如何證明這一點(diǎn)，就需要通過(guò)Southern雜交技術(shù)?；咀龇ㄊ牵旱谝徊剑瑢⑹荏w生物DNA提取出來(lái)，經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)拿盖泻螅攮傊悄z電泳，將不同大小的片段分開(kāi)；第二步，將凝膠上的DNA片段轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上；第三步，用標(biāo)記了放射性同位素(或生物素)的目的DNA片段作為探針與硝酸纖維素膜上的DNA進(jìn)行雜交；第四步，將X光底片壓在硝酸纖維素膜上，在暗處使底片感光；第五步，將X光底片沖洗，如果在底片上出現(xiàn)黑色條帶，則表明受體植物染色體DNA上有目的基因。RNA方法，具體做法與Southern雜交相同，只是第一步從受體植物中提取的是mRNA而不是DNA，雜交帶的顯現(xiàn)也與Southern雜交相同。Western雜交──蛋白質(zhì)分子(抗原—抗體)之間的雜交。它是檢測(cè)目的基因是否表達(dá)出蛋達(dá)出的蛋白質(zhì)注射動(dòng)物進(jìn)行免疫，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，并提取出抗體(一抗)；第三步，從轉(zhuǎn)基因生物中提取蛋白質(zhì)，走凝膠電泳；第四步，將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上；第五步，將抗體(一抗)與硝酸纖維素膜上的蛋白雜交，這時(shí)抗體(一抗)與目的基因表達(dá)的蛋白(抗原)與一抗結(jié)合，二抗抗體上帶有特殊的標(biāo)記。如果目的基因表達(dá)出了蛋白質(zhì)，則結(jié)果為陽(yáng)性。腸桿菌可以生產(chǎn)出人的胰島素，聯(lián)系前面有關(guān)細(xì)胞器功能的知識(shí)，結(jié)合基因工程操作程序的基本思路，思考一下，若要生產(chǎn)人的糖蛋白，可以用大腸桿菌嗎？〖生思考討論回答，師提示〗：有些蛋白質(zhì)肽鏈上有共價(jià)結(jié)合的糖鏈，這些糖鏈?zhǔn)窃趦?nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體上加工完成的，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體存在于真核細(xì)胞中，大腸桿菌不存在這兩種細(xì)胞器，因此，在大腸桿菌中生產(chǎn)這種糖蛋白是不可能的?！妓伎寂c探究〗4.β-珠蛋白是動(dòng)物血紅蛋白的重要組成成分。當(dāng)它的成分異常時(shí)，動(dòng)物有： (1)從小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的編碼序列(cDNA)。 (2)將cDNA前接上在大腸桿菌中可以適用的啟動(dòng)子，另外加上抗四環(huán)素的基因，構(gòu)建成一個(gè)表達(dá)載體。 (3)將表達(dá)載體導(dǎo)入無(wú)四環(huán)素抗性的大腸桿菌中，然后在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌。如果表達(dá) 4)培養(yǎng)進(jìn)入了β-珠蛋白基因的大腸桿菌，收集菌體，破碎后從中提取β-珠蛋白。1.舉例說(shuō)出基因工程應(yīng)用及取得的豐碩成果?；蚬こ痰倪M(jìn)展。3.認(rèn)同基因工程的應(yīng)用促進(jìn)生產(chǎn)力的提高。二、教學(xué)重點(diǎn)和難點(diǎn)基因工程在農(nóng)業(yè)和醫(yī)療等方面的應(yīng)用。2.教學(xué)難點(diǎn)三、教學(xué)方法講授法、對(duì)話(huà)法2五、教學(xué)策略1.加強(qiáng)收集信息和處理信息環(huán)節(jié)的指導(dǎo)?；蚬こ痰膽?yīng)用是基因工程基本操作程序的一個(gè)必然結(jié)果。如果本節(jié)只作為成果的學(xué)習(xí)，那么就顯得思維力度不足了。為此，建議加強(qiáng)指導(dǎo)學(xué)生收集和處理信息這一環(huán)節(jié)。具體做法如下：無(wú)論是學(xué)習(xí)轉(zhuǎn)基因植物方面的應(yīng)用，還是學(xué)習(xí)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物方面的應(yīng)用，乃至轉(zhuǎn)基因工程菌生產(chǎn)藥物方面的應(yīng)用，首先必須尋找目的基因。教師可利用表1-1，指導(dǎo)學(xué)生整理課本中提供的信息，填寫(xiě)此表。這樣做既可以調(diào)動(dòng)學(xué)生學(xué)習(xí)的積極性，也增強(qiáng)了他們分析和處理信息的能力。-1轉(zhuǎn)基因生物與目的基因的關(guān)系菌調(diào)節(jié)細(xì)胞滲透壓的基因蛋白基因草劑基因乳糖酶基因基因草抗鹽堿和干旱作物草劑大豆強(qiáng)甜味的水果生產(chǎn)胰島素的工程菌魚(yú)人指導(dǎo)學(xué)生提高處理信息的能力，還可以體現(xiàn)在對(duì)教材內(nèi)容的重組上。例如，我們可以解決當(dāng)前世界上存在的重大問(wèn)題作為主題，如以解決“糧食”、“環(huán)境污染”、“能源危機(jī)”、“攻克不治之癥”等問(wèn)題作為主題，讓學(xué)生將課文中的知識(shí)或?qū)W生知道的課外的基因工程應(yīng)用方面的知識(shí)進(jìn)行重組。這樣的活動(dòng)不僅培養(yǎng)了學(xué)生處理信息的能力，還會(huì)使學(xué)生感悟到肩負(fù)的社會(huì)責(zé)任，從而激發(fā)用科學(xué)技術(shù)報(bào)效祖國(guó)的志向。2.課文中的一些難點(diǎn)，建議采用小組討論，師生共同歸納的方法學(xué)習(xí)。知識(shí)，但文字說(shuō)明不多，學(xué)生學(xué)習(xí)有一定難度。例如“什讓學(xué)生討論，加深用已有知識(shí)認(rèn)識(shí)新事物的能力。學(xué)生想不到的地方，可由師生共同歸納。例如，學(xué)習(xí)乳腺生物反應(yīng)器時(shí)，學(xué)生提出“給我們講講乳腺生物反應(yīng)器究竟是怎么回事”。這時(shí)教師可(1)用動(dòng)物乳腺作為反應(yīng)器，生產(chǎn)高價(jià)值的蛋白質(zhì)(如教材中列舉的血清白蛋白、抗凝血酶等)比工廠(chǎng)化生產(chǎn)的優(yōu)越之處有哪些？(2)用基因工程技術(shù)實(shí)現(xiàn)動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器的操作過(guò)程是怎樣的？應(yīng)器這一創(chuàng)新成果產(chǎn)生的動(dòng)力。學(xué)生在充分討論和發(fā)表觀點(diǎn)的基礎(chǔ)上，師生共同歸納出乳腺生物反應(yīng)器的優(yōu)點(diǎn)：①產(chǎn)量高；②質(zhì)量好；③成本低；④易提取。技術(shù)實(shí)現(xiàn)動(dòng)物乳腺生物反應(yīng)器的操作過(guò)程與轉(zhuǎn)基因動(dòng)物操作過(guò)程相動(dòng)子，要在編碼目的蛋白質(zhì)的基因序列前加上乳腺組織中特異表達(dá)的啟動(dòng)子構(gòu)建成表達(dá)載體。操作過(guò)程大致歸納為：獲取目的基因(例如血清白蛋白基因)→構(gòu)建基因表達(dá)載體(在血清白蛋白基因前加特異表達(dá)的啟動(dòng)子)→顯微注射導(dǎo)入哺乳動(dòng)物受精卵中→形成胚胎→將胚胎送入母體動(dòng)物→發(fā)育成轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(只有在產(chǎn)下的雌性個(gè)體中，轉(zhuǎn)入的基因才能表達(dá))。關(guān)于工程菌的學(xué)習(xí)，也可結(jié)合基因工程操作程序，予以說(shuō)明，并結(jié)合微生物生長(zhǎng)和代謝的特點(diǎn)，說(shuō)明工程菌生產(chǎn)藥物的優(yōu)越性?？筛鶕?jù)課堂時(shí)間而定。如果時(shí)間緊，也可采用教師引導(dǎo)學(xué)習(xí)的方法。第14頁(yè)2022-3-23思考與探究大豆等也可以是基因工程產(chǎn)品。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的抗蟲(chóng)棉、抗病毒煙草、抗除草劑大豆等都已進(jìn)入商品化生產(chǎn)，上述產(chǎn)品有些是常規(guī)方法難以生產(chǎn)的或者生產(chǎn)成本過(guò)高。1.利用微生物生產(chǎn)藥物的優(yōu)越性何在?所謂利用微生物生產(chǎn)蛋白質(zhì)類(lèi)藥物，是指將人們需要的某種蛋白質(zhì)的編碼基因，構(gòu)建成表達(dá)(1)利用活細(xì)胞作為表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)效率高，無(wú)需大型裝置和大面積廠(chǎng)房就可以生產(chǎn)出大(2)可以解決傳統(tǒng)制藥中原料來(lái)源的不足。例如，胰島素是治療糖尿病患者的藥物，一名利用基因工程菌發(fā)酵生產(chǎn)就不需要從動(dòng)物或人體上獲取原料。(3)降低生產(chǎn)成本，減少生產(chǎn)人員和管理人員。毒轉(zhuǎn)基因植物中，為什么使用病毒外殼蛋白基因可以抗病毒侵染？關(guān)于病毒外殼蛋白(coatprotein，CP)基因?qū)胫参锖蟮目共《緳C(jī)理，目前有幾種假說(shuō)。即被這些外殼蛋白重新包裹，從而阻止病毒核酸分子的復(fù)制和翻譯。另一種假說(shuō)認(rèn)為：植物細(xì)胞內(nèi)積累的病毒外殼蛋白會(huì)抑制病毒脫除外殼，使病毒核酸分子不能釋放出來(lái)。然而最近的研究表明，如果將病毒的外殼蛋白的AUG起始密碼缺失，使之不能被翻譯，或者將外殼蛋白基因變成反1.舉例說(shuō)出蛋白質(zhì)工程崛起的緣由。.簡(jiǎn)述蛋白質(zhì)工程的原理。3.嘗試運(yùn)用逆向思維分析和解決問(wèn)題。(1)為什么要開(kāi)展蛋白質(zhì)工程的研究？(2)蛋白質(zhì)工程的原理。2.教學(xué)難點(diǎn)三、教學(xué)方法講授法、對(duì)話(huà)法教學(xué)課時(shí)21.建議采用“問(wèn)題—探究—新問(wèn)題—再探究”的教學(xué)模式。本節(jié)內(nèi)容是基因工程的延伸和發(fā)展。由于蛋白質(zhì)工程剛剛起步，學(xué)習(xí)內(nèi)容較少。如何學(xué)得充實(shí)，又讓學(xué)生悟出些終身學(xué)習(xí)的道理，建議采用“問(wèn)題—探究—新問(wèn)題—再探究”的教學(xué)模式。新課一開(kāi)始，可以帶領(lǐng)學(xué)生回憶原有知識(shí)：要想讓一種生物的性狀在另一種生物中表達(dá)，在種內(nèi)可以用常規(guī)雜交育種的辦法實(shí)現(xiàn)，但要使有生殖隔離的種間生物實(shí)現(xiàn)基因交流，就顯得力不從心了?；蚬こ痰恼Q生，為克服這一遠(yuǎn)緣雜交的障礙問(wèn)題，帶來(lái)了新的希望。于是取得了豐碩成果：大腸桿菌為人類(lèi)生產(chǎn)出了胰島素，牛的乳腺生物反應(yīng)器為人類(lèi)制造出了蛋白質(zhì)類(lèi)藥物，煙草植物體內(nèi)含有了某種藥物蛋白……至此，人們也只是實(shí)現(xiàn)了世界上現(xiàn)有基因在轉(zhuǎn)基因生物中的表達(dá)。但一個(gè)新問(wèn)題出現(xiàn)了，生物產(chǎn)生的天然蛋白質(zhì)是在長(zhǎng)期進(jìn)化過(guò)程中形成的，它的結(jié)構(gòu)、性能不能完全滿(mǎn)足人類(lèi)生產(chǎn)和生活的需要。為了加深這一點(diǎn)的認(rèn)識(shí)，可調(diào)動(dòng)學(xué)生從書(shū)中找實(shí)例(干擾素例子、工業(yè)用酶的例子)加以佐證。于是要對(duì)現(xiàn)有蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，制造出目前從天然蛋白質(zhì)中找不到的蛋白質(zhì)。這樣人們又開(kāi)始了新一輪的探索，蛋白質(zhì)工程應(yīng)運(yùn)而生了。2.建議加強(qiáng)與已有知識(shí)的聯(lián)系，用逆向思維的方法解決新問(wèn)題。具有復(fù)雜的空間結(jié)構(gòu)等知識(shí)。中心法則告訴我們功能是由DNA決定的，那么要制造出新的蛋白質(zhì)，就要改造DNA。所以蛋白質(zhì)工程的原理應(yīng)該是中心法則的逆推。結(jié)合課本中插圖，可以較明確地說(shuō)明這一點(diǎn)。明。第一，蛋白質(zhì)工程的誕生是有其理論與技術(shù)條件支撐的，正如因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物信息學(xué)的發(fā)展等因素有關(guān)(本書(shū)“前沿動(dòng)態(tài)”中有簡(jiǎn)要介紹)。第二，說(shuō)明蛋白質(zhì)工程目前的現(xiàn)狀：成功的例子不多，主要是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)發(fā)揮其功能需要依賴(lài)于正確的空間結(jié)構(gòu)，而科學(xué)家目前對(duì)大多數(shù)蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)了解很少。這樣學(xué)習(xí)，可以使學(xué)生認(rèn)識(shí)到科學(xué)探索之路的漫長(zhǎng)、艱辛和永無(wú)止境。(一)思考與探究提示(供教師在教學(xué)中參考)：蛋白質(zhì)工程的崛起主要是工業(yè)生產(chǎn)和基礎(chǔ)理論研究的需要。而結(jié)構(gòu)生物學(xué)對(duì)大量蛋白質(zhì)分子的精確立體結(jié)構(gòu)及其復(fù)雜的生物功能的分析結(jié)果，為設(shè)計(jì)改造天然蛋白質(zhì)提供了藍(lán)圖。分子遺傳學(xué)的以定點(diǎn)突變?yōu)橹行牡幕虿僮骷夹g(shù)為蛋白質(zhì)工程提供了手段。在已研究過(guò)的幾千種酶中，只有極少數(shù)可以應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)，絕大多數(shù)酶都不能應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)，這些酶雖然在自然狀態(tài)下有活性，但在工業(yè)生產(chǎn)中沒(méi)有活性或活性很低。這是因?yàn)楣I(yè)生產(chǎn)中每一步的反應(yīng)體系中常常會(huì)有酸、堿或有機(jī)溶劑存在，反應(yīng)溫度較高，在這種條件下，大多數(shù)酶會(huì)很快變性失活。提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性是工業(yè)生產(chǎn)中一個(gè)非常重要的課題。一般來(lái)說(shuō)，提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性包括：延長(zhǎng)酶的半衰期，提高酶的熱穩(wěn)定性，延長(zhǎng)藥用蛋白的保存期，抵御由于重要氨基酸氧化引起的活性喪失等。下面舉一個(gè)如何通過(guò)蛋白質(zhì)工程來(lái)提高重組β-干擾素專(zhuān)一活性和穩(wěn)定性的例子。干擾素是一種抗病毒、抗腫瘤的藥物。將人的干擾素的cDNA在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，產(chǎn)生的干擾素的抗病毒活性為106U/mg，只相當(dāng)于天然產(chǎn)品的十分之一，雖然在大腸桿菌中合成的β-干擾素量很多，但多數(shù)是以無(wú)活性的二聚體形式存在。為什么會(huì)這樣？如何改變這種狀況？研究發(fā)現(xiàn)，β-干擾素蛋白質(zhì)中有3個(gè)半胱氨酸(第17位、31位和141位)，推測(cè)可能是有一個(gè)或幾個(gè)半胱氨酸形成了不正確的二硫鍵。研究人員將第17位的半胱氨酸，通過(guò)基因定點(diǎn)突變改變成絲氨酸，結(jié)果使大腸桿菌中生產(chǎn)的β-干擾素的抗病性活性提高到108U/mg，并且比天然β-干擾素的貯在基礎(chǔ)理論研究方面，蛋白質(zhì)工程是研究多種蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能、蛋白質(zhì)折疊、蛋白質(zhì)分子設(shè)計(jì)等一系列分子生物學(xué)基本問(wèn)題的一種新型的、強(qiáng)有力的手段。通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)工程的研究，可以深入地揭示生命現(xiàn)象的本質(zhì)和生命活動(dòng)的規(guī)律。出自然界已有的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)工程是按照以下思路進(jìn)行的：確定蛋白質(zhì)的功能→蛋白質(zhì)應(yīng)有的程學(xué)的手段，應(yīng)用于生產(chǎn)、生活、醫(yī)療診斷和環(huán)境保護(hù)等方面的一門(mén)科學(xué)技術(shù)。概括地說(shuō)，酶工程是由酶制劑的生產(chǎn)和應(yīng)用兩方面和葡萄糖異構(gòu)酶這三個(gè)酶連續(xù)作用于淀粉，就可以代替蔗糖生產(chǎn)出高果糖漿；蛋白酶用于皮革脫毛膠以及洗滌劑工業(yè)；固定化酶還可以治療先天性缺酶病或是器官缺損引起的某些功能的衰竭等。至于我們?nèi)粘Ｉ钪兴?jiàn)到的加酶洗衣粉、嫩肉粉等，就更是酶工程最直接的體現(xiàn)了。通常所說(shuō)的酶工程是用工程菌生產(chǎn)酶制劑，而沒(méi)有經(jīng)過(guò)由酶的功能來(lái)設(shè)計(jì)酶的分子結(jié)構(gòu)，然后由酶的分子也會(huì)應(yīng)用到酶工程中，使酶工程成為蛋白質(zhì)工程的一部分。(二)正文中討論題怎樣得出決定這一段肽鏈的脫氧核苷酸序列？請(qǐng)把相應(yīng)的堿基序列寫(xiě)出來(lái)。確定目的基因的堿基序列后，怎樣才能合成或改造目的基因(DNA)？答：(1)每種氨基酸都有對(duì)應(yīng)的三聯(lián)密碼子，只要查一下遺傳密碼子表，就可以將上述氨基酸序列的編碼序列查出來(lái)。但是由于上述氨基酸序列中有幾個(gè)氨基酸是由多個(gè)三聯(lián)密碼子編碼，因此其堿基排列組合起來(lái)就比較復(fù)雜，至少可以排列出16種，可以讓學(xué)生根據(jù)學(xué)過(guò)的排列組合 (或G)AUGUUU(或C)，再根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)規(guī)律推出脫氧核苷酸序列：CGA(或G或T或C)ACCTTT(或C)TACAAA(或G)。 (2)確定目的基因的堿基序列后，就可以根據(jù)人類(lèi)的需要改造它，通過(guò)人工合成的方法或(三)異想天開(kāi)能不能根據(jù)人類(lèi)需要的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)，設(shè)計(jì)相應(yīng)的基因，導(dǎo)入合適的細(xì)菌中，讓細(xì)菌生產(chǎn)人還沒(méi)有真正成功的例子。一些報(bào)道利用細(xì)菌生產(chǎn)人類(lèi)需要的蛋白質(zhì)往往都是自然界已經(jīng)存在的蛋白質(zhì)，并非完全是人工設(shè)計(jì)出來(lái)而自然不存在的蛋白質(zhì)。主要原因是蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，人類(lèi)對(duì)蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)和在生物體內(nèi)如何行使功能知之甚少，很難設(shè)計(jì)出一個(gè)嶄新而又具有生命功能作用的蛋白質(zhì)，而且一個(gè)嶄新的蛋白質(zhì)會(huì)帶來(lái)什么危害也是人們所擔(dān)心的。(四)旁欄思考題1.你知道人類(lèi)蛋白質(zhì)組計(jì)劃嗎？它與蛋白質(zhì)工程有什么關(guān)系？我國(guó)科學(xué)家承擔(dān)了什么任人類(lèi)基因組計(jì)劃之后，生命科學(xué)乃至自然科學(xué)領(lǐng)域一項(xiàng)重大的科學(xué)命題。2001年，國(guó)際人類(lèi)蛋白質(zhì)組組織宣告成立。之后，該組織正式提出啟動(dòng)了兩項(xiàng)重大國(guó)質(zhì)組計(jì)劃”；另一項(xiàng)是以美國(guó)科學(xué)家牽頭執(zhí)行的“人類(lèi)血漿蛋白質(zhì)組計(jì)劃”，由此拉開(kāi)了人類(lèi)蛋白質(zhì)組計(jì)劃的帷幕。“人類(lèi)肝臟蛋白質(zhì)組計(jì)劃”是國(guó)際上第一個(gè)人類(lèi)組織／器官的蛋白質(zhì)組計(jì)劃，由我國(guó)賀福初院士牽頭，這是中國(guó)科學(xué)家第一次領(lǐng)銜的重大國(guó)際科研協(xié)作計(jì)劃，總部設(shè)在北京，目前有16個(gè)國(guó)家和地區(qū)的80多個(gè)實(shí)驗(yàn)室報(bào)名參加。它的科學(xué)目標(biāo)是揭示并確認(rèn)肝臟的蛋白質(zhì)，為重大肝病預(yù)防、診斷、治療和新藥研發(fā)的突破提供重要的科學(xué)基礎(chǔ)。人類(lèi)蛋白質(zhì)組計(jì)劃的深入研究將是對(duì)蛋白質(zhì)工程的有力推動(dòng)和理論支持。2.對(duì)天然蛋白質(zhì)進(jìn)行改造，你認(rèn)為應(yīng)該直接對(duì)蛋白質(zhì)分子進(jìn)行操作，還是通過(guò)對(duì)基因的操作答：毫無(wú)疑問(wèn)應(yīng)該從對(duì)基因的操作來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)天然蛋白質(zhì)改造，主要原因如下： (1)任何一種天然蛋白質(zhì)都是由基因編碼的，改造了基因即對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行了改造，而且改造過(guò)的蛋白質(zhì)可以遺傳下去。如果對(duì)蛋白質(zhì)直接改造，即使改造成功，被改造過(guò)的蛋白質(zhì)分子還1.有關(guān)基因工程的敘述正確的是()A.限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用B.重組質(zhì)粒的形成是在細(xì)胞內(nèi)完成的C.質(zhì)粒都可作為載體D.蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)成分為合成目的基因提供資料2.基因工程常用的受體有()①大腸桿菌②枯草桿菌③支原體④動(dòng)植物細(xì)胞A.①②③④B.①②③C.②③④D.①②④3.下列哪項(xiàng)不是基因工程中經(jīng)常使用的用來(lái)運(yùn)載目的基因的載體()A.細(xì)菌質(zhì)粒B.噬菌體C.動(dòng)植物病毒D.細(xì)菌核區(qū)的DNA4.基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的。在基因操作的基本步驟中，不進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì)的是()A合成目的基因B.目的基因與運(yùn)載體結(jié)合CD.目的基因的檢測(cè)表達(dá)5.不是基因工程方法生產(chǎn)的藥物是()A.干擾素B.白細(xì)胞介素C.青霉素D.乙肝疫苗AA.同種限制酶B.兩種限制酶C.同種連接酶D.兩種連接酶7.在基因工程中用來(lái)修飾改造基因的工具是()A.限制酶和連接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和運(yùn)載酶D.連接酶和運(yùn)載酶8.下列哪項(xiàng)敘述不是運(yùn)載體必須具備的條件()A.具有某些標(biāo)記基因B.決定宿主細(xì)胞的生存C.能夠在宿主細(xì)胞中復(fù)制D.有多個(gè)限制酶切點(diǎn)9.水母發(fā)光蛋白由236個(gè)氨基酸構(gòu)成，其中有三種氨基酸構(gòu)成發(fā)光環(huán)，現(xiàn)已將這種蛋白質(zhì)的基因作為生物轉(zhuǎn)基因的標(biāo)記。在轉(zhuǎn)基因技術(shù)中，這種蛋白質(zhì)的作用()A.促使目的基因?qū)胨拗骷?xì)胞中B.促使目的基因在宿主細(xì)胞中復(fù)制C.使目的基因容易被檢測(cè)出來(lái)D.使目的基因容易成功表達(dá)10.應(yīng)用基因工程技術(shù)診斷疾病的過(guò)程中必須使用基因探針才能達(dá)到檢測(cè)疾病的目的。這里的基因探針是指()A.用于檢測(cè)疾病的醫(yī)療器械B.用放射性同位素或熒光分子等標(biāo)記的DNA分子C.合成β—球蛋白的DNAD.合成苯丙氨酸羥化酶的DNA片段11.基因工程第一步的一種方法是把所需的基因從供體細(xì)胞內(nèi)分離出來(lái)，這要利用限制性?xún)?nèi)切酶。一種限制性?xún)?nèi)切酶能識(shí)別DNA子中的GAATTC順序，切點(diǎn)在G和A之間，這是應(yīng)用了酶的 ()A．高效性B.專(zhuān)一性C．多樣性D.催化活性受外界條件影響12.上海醫(yī)學(xué)遺傳研究所成功培育出第一頭攜帶白蛋白的轉(zhuǎn)基因牛，還研究出一種可大大提高基因表達(dá)水平的新方法，使轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳汁中的藥物蛋白含量提高30多倍，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物是指A.提供基因的動(dòng)物B.基因組中增加外源基因的動(dòng)物C.能產(chǎn)生白蛋白的動(dòng)物D.能表達(dá)基因信息的動(dòng)物13.作為基因的運(yùn)輸工具——運(yùn)載體，必須具備的條件之一及理由是()A.能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定地保存下來(lái)并大量復(fù)制，以便提供大量的目的基因D.它的參與才能夠使目的基因在宿主細(xì)胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存14.下列黏性末端屬于同一種限制酶切割而成的是：()B．①③CB．①③C①④15.下列平末端屬于同一種限制酶切割而成的是A.①③B.①④C.②③D.②④該限制酶能識(shí)別的堿基序列及切點(diǎn)是D．②③GAATCTTAGAATTCTTAG17.下列有關(guān)基因工程的敘述中，不正確的是()A.DNA連接酶將黏性末端的堿基對(duì)連接起來(lái)B熒光分子等標(biāo)記的DNA分子C.基因治療主要是對(duì)有基因缺陷的細(xì)胞進(jìn)行替換D.蛋白質(zhì)中氨基酸序列可為合成目的基因提供資料①單鏈的脫氧核苷酸序列引物②目的基因所在的DNA片段③脫氧核苷酸④核糖核苷酸⑤DNA連接酶⑥D(zhuǎn)NA聚合酶⑦DNA限制性?xún)?nèi)切酶A.①②③⑤B.①②③⑥C.①②③⑤⑦D.①②④⑤⑦ADNA當(dāng)中B.作為引物的脫氧核苷酸序列必須不斷的加進(jìn)每一次的擴(kuò)增當(dāng)中NAA.氨基酸結(jié)構(gòu)B.蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)C.肽鏈結(jié)構(gòu)D.基因結(jié)構(gòu)21.以下不屬于周測(cè)內(nèi)容：22.有關(guān)基因與酶關(guān)系的敘述正確的是()A.每個(gè)基因都控制合成一種酶B.酶的遺傳信息編碼在內(nèi)含子的堿基序列中C.基因的轉(zhuǎn)錄、翻譯都需要酶D.同一生物體不同細(xì)胞的基因和酶是相同的23.某科學(xué)家從細(xì)菌中分離出耐高溫淀粉酶(Amy)基因a,通過(guò)基因工程的方法，將a轉(zhuǎn)到馬鈴A.目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞后，可隨著馬鈴薯的DNA分子的復(fù)制而復(fù)制，傳給子代細(xì)胞B.基因a導(dǎo)入成功后，將抑制細(xì)胞原有的新陳代謝，開(kāi)辟新的代謝途徑CDNA需要整合到馬鈴薯的DNA分子中D.目的基因來(lái)自細(xì)菌，可以不需要運(yùn)載體直接導(dǎo)入受體細(xì)胞24.下列關(guān)于質(zhì)粒的敘述，正確的是()A.質(zhì)粒是廣泛存在于細(xì)菌細(xì)胞中的一種顆粒狀細(xì)胞器BDNA分子C.質(zhì)粒只有在侵入宿主細(xì)胞后在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制D.細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制過(guò)程一定是在宿主細(xì)胞外獨(dú)立進(jìn)行25.關(guān)于基因工程的敘述，正確的是()A.基因工程經(jīng)常以抗菌素抗性基因?yàn)槟康幕駼.細(xì)菌質(zhì)粒是基因工程常用的運(yùn)載體C.通常用一種限制性?xún)?nèi)切酶處理含目的基因的DNA，用另一種處理運(yùn)載體DNAD.為育成抗除草劑的農(nóng)作物新品種導(dǎo)入的抗除草劑的基因只能以受精卵為受體26.采用基因工程的方法培養(yǎng)抗蟲(chóng)棉，下列導(dǎo)入目的基因的作法正確的是()①將毒素蛋白注射到棉受精卵中②將編碼毒素蛋白的DNA