實驗四靜脈采血、血涂片的制備與染色

實驗四靜脈采血、血涂片制備與染色現(xiàn)在是1頁\一共有43頁\編輯于星期三

一、普通靜脈采血法現(xiàn)在是2頁\一共有43頁\編輯于星期三

原理：將注射器針頭刺入靜脈后，利用后抽拉針?biāo)〞r所形成的負(fù)壓使血液被吸入針筒

實驗用品：

1、器材一次性注射器、壓脈帶、消毒棉簽、試管。

2、試劑30g/L碘酊、75%乙醇。

標(biāo)本靜脈血現(xiàn)在是3頁\一共有43頁\編輯于星期三操作準(zhǔn)備試管仔細(xì)閱讀受檢者申請單，決定采血量，準(zhǔn)備每個試驗所需的試管，并應(yīng)按一定順序排列，如患者僅作凝血試驗一項，最初1ml血液必須丟棄。如做血細(xì)胞沉降率測定，需取試管1支，加入適當(dāng)抗凝劑（109mmol/L枸櫞酸鈉0.4ml）。現(xiàn)在是4頁\一共有43頁\編輯于星期三標(biāo)記試管在試管上貼上標(biāo)簽，著名患者姓名、項目名稱、采集日期、門診或住院號。

消毒雙手采血前，操作人員應(yīng)用肥皂或消毒液和水洗手。

選擇靜脈采血前，要求受檢者坐在實驗臺前。將前臂放在實驗臺上，掌心向上，并在肘下放一枕墊。臥床受檢者要求前臂申展，暴露穿刺部位。常用采血位置是肘前靜脈，因其粗大、容易辨認(rèn)?，F(xiàn)在是5頁\一共有43頁\編輯于星期三檢查注射器打開一次性注射器包裝，左手持針頭下座，右手持針筒，將針頭和針筒緊密連接，并使針頭斜面對準(zhǔn)針筒刻度，抽拉針?biāo)z查有無阻塞和漏氣。最后排盡注射器中的空氣，備用。使用前，保持針頭無菌狀態(tài)。現(xiàn)在是6頁\一共有43頁\編輯于星期三操作前準(zhǔn)備現(xiàn)在是7頁\一共有43頁\編輯于星期三操作前準(zhǔn)備現(xiàn)在是8頁\一共有43頁\編輯于星期三操作前準(zhǔn)備現(xiàn)在是9頁\一共有43頁\編輯于星期三扎壓脈帶在采血部位上端約6cm處，將壓脈帶繞手臂一圈打一活結(jié)，壓脈帶末端向上。要求患者緊握和放松拳頭幾次，使靜脈隆起。壓脈帶應(yīng)能減緩遠(yuǎn)端靜脈血液回流，但又不能緊到壓迫動脈血流。選擇進(jìn)針部位采用左食指，觸摸進(jìn)針部位的靜脈?，F(xiàn)在是10頁\一共有43頁\編輯于星期三操作中現(xiàn)在是11頁\一共有43頁\編輯于星期三靜脈采血的常用部位貴要靜脈正中靜脈頭靜脈現(xiàn)在是12頁\一共有43頁\編輯于星期三

消毒皮膚

用30g/L碘酊棉簽自所選靜脈穿刺處從內(nèi)向外，順時針方向消毒皮膚，待碘酊揮發(fā)后，再用75%乙醇棉簽以同樣的方式拭去碘酊，待干?，F(xiàn)在是13頁\一共有43頁\編輯于星期三穿刺皮膚取下針頭無菌冒，以左手拇指固定靜脈穿刺部位下端，右手持注射器，食指固定針頭下座。保持針頭斜面和針筒刻度向上，沿靜脈走向使針頭與皮膚成30°角斜行快速刺入皮膚，然后成5°角向前穿破靜脈壁進(jìn)入靜脈腔。確認(rèn)穿刺入靜脈中心位置，并沿著靜脈走向?qū)⑨橆^推入10~15mm。現(xiàn)在是14頁\一共有43頁\編輯于星期三操作中現(xiàn)在是15頁\一共有43頁\編輯于星期三抽血用左手緩緩向后拉注射器針?biāo)?，見少量回血后，松開壓脈帶。然后，向后拉針?biāo)ǖ竭_(dá)采血量刻度。若使用一次性真空采血裝置，當(dāng)針頭進(jìn)入血管后會見少量回血，將真空采血管插入試管托內(nèi)采血針中，因試管內(nèi)負(fù)壓作用，血液自動流入試管，到達(dá)采血量刻度后拔出試管即可?，F(xiàn)在是16頁\一共有43頁\編輯于星期三止血囑受檢者松拳，用消毒棉簽壓住進(jìn)針部位，迅速向后拔出針頭。繼續(xù)緊按住消毒棉簽3min。放血從注射器上取下針頭。將血液沿試管壁緩緩注入，到達(dá)標(biāo)記處。含抗凝劑試管需迅速輕輕顛倒混勻幾次。現(xiàn)在是17頁\一共有43頁\編輯于星期三操作中現(xiàn)在是18頁\一共有43頁\編輯于星期三注意事項

1、采血前準(zhǔn)備采血前應(yīng)向患者耐心解釋，以消除不必要的凝慮和恐懼心理。如遇個別患者進(jìn)針時或采血后發(fā)生眩暈，應(yīng)立即拔出針頭讓其平臥休息片刻，即可恢復(fù)。必要時可給患者嗅吸芳香酊、針刺（或拇指按掐）人中和合谷等穴位。若因低血糖誘發(fā)眩暈，可立即靜注葡萄糖或囑患者服糖水即可。如有其它情況，應(yīng)立即找醫(yī)師共同處理?，F(xiàn)在是19頁\一共有43頁\編輯于星期三2、準(zhǔn)備試管不同檢查項目可根據(jù)試驗需要選擇不同的抗凝劑及與血液的稀釋比例，如血細(xì)胞計數(shù)及MCV、MPV等參數(shù)測定時應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)目鼓齽?，不要用肝素抗凝劑，因為肝素抗凝會影響RBC和PLT的計數(shù)結(jié)果。現(xiàn)在是20頁\一共有43頁\編輯于星期三選擇靜脈如果肥胖患者的靜脈暴露不明顯，可以左手示指經(jīng)碘酊、乙醇消毒后，在采血部位觸摸，發(fā)現(xiàn)靜脈走向后憑手感方向與深度試探性穿刺。檢查注射器靜脈采血前要仔細(xì)檢查針頭是否安裝牢固，針筒內(nèi)是否有空氣和水分。所用針頭應(yīng)銳利、光滑、通氣，針筒不漏氣。抽血時針?biāo)ㄖ荒芟蛲獬?，不能向靜脈內(nèi)推，以免形成空氣栓塞，造成嚴(yán)重后果?，F(xiàn)在是21頁\一共有43頁\編輯于星期三扎壓脈帶采靜脈血時止血帶壓迫時間不能過長、綁扎不能過緊，以避免淤血和血液濃縮，最好不超過1min，否則會影響某些試驗結(jié)果，如造成血紅蛋白和血細(xì)胞比容增高。穿刺皮膚不能從靜脈側(cè)面進(jìn)針。針頭進(jìn)入靜脈的感覺是：皮膚有一定阻力，而靜脈壁阻力較小，更富有彈性?，F(xiàn)在是22頁\一共有43頁\編輯于星期三抽血血液加入抗凝試管中應(yīng)與抗凝劑充分混勻達(dá)到抗凝目的；無需抗凝時則將血液直接注入試管中。要防止血液標(biāo)本溶血，因為溶血后標(biāo)本不僅紅細(xì)胞和血細(xì)胞比容減低，還會使血清（漿）化學(xué)成分發(fā)生變化。造成溶血的原因有：注射器和容器不干燥、不清潔；壓脈帶捆扎時間太久，淤血時間長；穿刺過程中損傷組織過多；抽血速度太快；血液注入容器時未取下針頭或用力推出時產(chǎn)生大量氣泡；抗凝血用力振蕩；離心時速度過快等?，F(xiàn)在是23頁\一共有43頁\編輯于星期三止血

不能彎曲手臂，以免形成血腫。放血

顛倒混勻時，需防止溶血和泡沫產(chǎn)生。切忌振蕩試管。標(biāo)本檢測與保存血液標(biāo)本采集后應(yīng)立即送檢，實驗室接到標(biāo)本后應(yīng)盡快地檢查?？鼓o脈血可穩(wěn)定8～12h，如不能及時測定，應(yīng)將其置于較穩(wěn)定的環(huán)境中，如4℃冰箱，減少和降低條件的變化。測定前，將其從冰箱內(nèi)取出，恢復(fù)至室溫狀態(tài)，混勻后再測定。用于生物化學(xué)檢查的標(biāo)本若不能及時檢查，應(yīng)將血清或血漿與細(xì)胞分離，進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼，F(xiàn)在是24頁\一共有43頁\編輯于星期三一次性器材只能使用一次，不能反復(fù)使用?，F(xiàn)在是25頁\一共有43頁\編輯于星期三二、血涂片制備目的：掌握普通手工制備血涂片的方法。實驗用品：1、器材：一次性采血針、消毒棉簽、推波片、載玻片等。2、試劑：75%乙醇、30g/L碘酊。標(biāo)本：EDTA-K2抗凝靜脈血或末梢血。現(xiàn)在是26頁\一共有43頁\編輯于星期三操作方法步驟：可分5個步驟進(jìn)行

消毒→取血→推片→染色→觀察消毒與取血

消毒

先按摩取血部位，使血流通暢；再用酒精消毒取血部位（如指尖）。

現(xiàn)在是27頁\一共有43頁\編輯于星期三取血

待酒精干后，刺破皮膚，使血自然流出，勿擠。取干凈載片，讓血滴在離載片一端中4～5毫米處，注意手指持握載片的邊緣，勿觸及其表面。不能使載片接觸取血部位的皮膚?，F(xiàn)在是28頁\一共有43頁\編輯于星期三推片

取一塊邊緣光滑的載片做推片。將其一端置于血滴前方，向后移動到接觸血滴，使血液均勻分散在推片與載片的接觸處。然后使推片與載片呈30°～40°角，向另一端平穩(wěn)地推出。涂片推好后，迅速在空氣中揮干，使之自然干燥?，F(xiàn)在是29頁\一共有43頁\編輯于星期三現(xiàn)在是30頁\一共有43頁\編輯于星期三血涂片制備推片載玻片血液一張滿意的血涂片應(yīng)厚薄均勻頭體尾鮮明涂片干燥后用鉛筆在血涂片的頭部寫上姓名和編號李四B123現(xiàn)在是31頁\一共有43頁\編輯于星期三取另一張邊緣光滑的雙凹片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀。現(xiàn)在是32頁\一共有43頁\編輯于星期三現(xiàn)在是33頁\一共有43頁\編輯于星期三現(xiàn)在是34頁\一共有43頁\編輯于星期三不良血涂片現(xiàn)在是35頁\一共有43頁\編輯于星期三標(biāo)準(zhǔn)血涂片：標(biāo)準(zhǔn)的血涂片為舌形，邊緣整齊，厚薄適宜，頭體尾分明的血膜片，長約4cm,兩端和兩側(cè)留有空隙（1.5cm和0.3cm)現(xiàn)在是36頁\一共有43頁\編輯于星期三三、血涂片的染色染色原理：(1)瑞氏染料是由酸性染料伊紅和堿性染料亞甲藍(lán)組成的復(fù)合染料。(2)細(xì)胞的染色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用，各種細(xì)胞成分化學(xué)性質(zhì)不同，對各種染料的親和力也不一樣。因此，用本染料液染后，在同一血片上，可以看到各種不同的色彩，例如血紅蛋白，嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì);細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì);中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)?，F(xiàn)在是37頁\一共有43頁\編輯于星期三(3)PH對細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均為蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中正電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅;在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色偏藍(lán)?，F(xiàn)在是38頁\一共有43頁\編輯于星期三染色方法：1、取病料涂片、自然干燥

2、滴加瑞氏染液染0.5-1分鐘,使標(biāo)本被其中甲醇所固定;

3、加等量PH6.4的磷酸鹽緩沖液(或等量超純水)輕輕晃動玻片,均勻靜置5-10分鐘;

4、水洗、吸干、鏡檢?，F(xiàn)在是39頁\一共有43頁\編輯于星期三血涂片染色勿沖洗再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴后將Ⅰ液和Ⅱ液充分混勻靜置10分鐘直接流水沖洗3-5分鐘（切勿先倒掉染液）涂片經(jīng)水洗干燥后用油鏡分類計數(shù)100個白細(xì)胞李四123涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆蓋整個血膜1分鐘現(xiàn)在是40頁\一共有43頁\編輯于星期三血涂片的觀察低倍鏡觀察