微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)

課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用1.提供營養(yǎng)和條件2.防止污染現(xiàn)在是1頁\一共有33頁\編輯于星期三微生物的類群原生生物：原核生物:真菌:病毒:如酵母菌單細(xì)胞的動植物如草履蟲、單細(xì)胞藻類等無細(xì)胞結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞細(xì)菌、藍(lán)藻原核細(xì)胞現(xiàn)在是2頁\一共有33頁\編輯于星期三(1)根據(jù)你所掌握的知識，分析導(dǎo)致生產(chǎn)失敗的根源是什么?

(2)由此可見，研究和應(yīng)用微生物的前提是什么？根源在于發(fā)酵物中混入了雜菌防止雜菌入侵，獲得純凈的培養(yǎng)物現(xiàn)在是3頁\一共有33頁\編輯于星期三一、培養(yǎng)基微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽⑴碳源無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源無機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源現(xiàn)在是4頁\一共有33頁\編輯于星期三一、培養(yǎng)基微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質(zhì)1.基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽⑴碳源無機(jī)碳源：有機(jī)碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物⑵氮源無機(jī)氮源：有機(jī)氮源：NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含CHON的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源現(xiàn)在是5頁\一共有33頁\編輯于星期三1.基本成分：碳源、氮源、水、無機(jī)鹽2.特殊營養(yǎng)：維生素、堿基等（牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有）3.pH、氧氣的需求：4.種類：固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基有無凝固劑瓊脂分離鑒定工業(yè)生產(chǎn)化學(xué)成分：物理性質(zhì)：天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基現(xiàn)在是6頁\一共有33頁\編輯于星期三培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)微生物分離、鑒定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基現(xiàn)在是7頁\一共有33頁\編輯于星期三加入青霉素的培養(yǎng)基:不加氮源的無氮培養(yǎng)基:不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基:

幾種選擇培養(yǎng)基舉例：分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)型微生物唯一碳源為纖維素的培養(yǎng)基分解纖維素的細(xì)菌現(xiàn)在是8頁\一共有33頁\編輯于星期三牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細(xì)菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g分析營養(yǎng)構(gòu)成？現(xiàn)在是9頁\一共有33頁\編輯于星期三5.配制原則⑴目的明確：⑵營養(yǎng)全面、濃度適宜、比例恰當(dāng)⑶適宜的pH值：有機(jī)碳源異養(yǎng)型：根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的選擇原料自養(yǎng)型：不加碳源加入緩沖劑細(xì)菌偏堿，真菌偏酸（CO2碳源）生產(chǎn)科研現(xiàn)在是10頁\一共有33頁\編輯于星期三耐高溫需保持干燥的物品，160～170℃1～2小時接種環(huán)、接種針等金屬用具70~75℃、30min80℃、15min100℃、5~6min消毒滅菌定義方法較為溫和理化方法，殺死部分有害菌體（不包括芽孢、孢子）強(qiáng)烈的理化方法，殺死所有微生物（包括芽孢、孢子）煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥劑紫外線灼燒滅菌干熱滅菌酒精、氯氣、石炭酸等高壓蒸汽滅菌培養(yǎng)基，100KPa、121℃、15～30min防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：二、無菌技術(shù)現(xiàn)在是11頁\一共有33頁\編輯于星期三請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1）培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2）玻棒、試管、燒瓶和吸管（3）實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思考現(xiàn)在是12頁\一共有33頁\編輯于星期三2.無菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程二.無菌技術(shù)：防止外來雜菌的污染1.消毒與滅菌：酒精燈旁操作超凈工作臺現(xiàn)在是13頁\一共有33頁\編輯于星期三四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)分散成單個細(xì)胞,形成單個菌落3.功能：單個或少數(shù)菌體2.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、透明度等。鑒定菌種的重要依據(jù)固體培養(yǎng)基上大量繁殖子細(xì)胞群體1.定義：現(xiàn)在是14頁\一共有33頁\編輯于星期三1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O定容至1000mlNacl5g蛋白胨10g牛肉膏5g瓊脂20.0g㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基1.計算：培養(yǎng)基用量依配方計算各成分的用量2.稱量：3.溶化：牛肉膏黏稠，用稱量紙稱取牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙、少量水加熱溶解→取紙→蛋白胨、NaCl→瓊脂→補(bǔ)水定容4.調(diào)pH、分裝、封口：5.滅菌：6.倒平板：培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿現(xiàn)在是15頁\一共有33頁\編輯于星期三倒平板約50℃防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基現(xiàn)在是16頁\一共有33頁\編輯于星期三㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：⑴平板劃線法：菌種劃3個平板1個不劃線1.接種：接種環(huán)防止劃破培養(yǎng)基（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對照）四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)現(xiàn)在是17頁\一共有33頁\編輯于星期三現(xiàn)在是18頁\一共有33頁\編輯于星期三現(xiàn)在是19頁\一共有33頁\編輯于星期三平板劃線時不能劃破培養(yǎng)基，為什么？一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落?，F(xiàn)在是20頁\一共有33頁\編輯于星期三問題討論1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物殺死上次殘留的菌種，保證使下一次劃線時，菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者?，F(xiàn)在是21頁\一共有33頁\編輯于星期三問題討論2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落?，F(xiàn)在是22頁\一共有33頁\編輯于星期三6支試管，分別加入9ml無菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml106⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：菌液微量移液器現(xiàn)在是23頁\一共有33頁\編輯于星期三現(xiàn)在是24頁\一共有33頁\編輯于星期三⑵稀釋涂布平板法：a.梯度稀釋菌液：b.涂布平板：不超過0.1ml各梯度分別涂布3個平板1個不涂布作空白對照滴灼試涂稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍現(xiàn)在是25頁\一共有33頁\編輯于星期三⑴平板劃線法：㈠制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基㈡純化大腸桿菌：1.接種：⑵稀釋涂布平板法：2.培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)12h～24h后，觀察并記錄四、大腸桿菌的純化培養(yǎng)現(xiàn)在是26頁\一共有33頁\編輯于星期三五、課題成果評價

培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同（一）培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄現(xiàn)在是27頁\一共有33頁\編輯于星期三1.臨時保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上4℃2.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油＋1ml菌液－20℃六、課題延伸（菌種的保藏）現(xiàn)在是28頁\一共有33頁\編輯于星期三本課題知識小結(jié)微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)培養(yǎng)基無菌技術(shù)制備牛肉蛋白胨固體培養(yǎng)基純化大腸桿菌結(jié)果分析與評價培養(yǎng)基的類型培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)避免雜菌污染的方法實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法平板劃線法稀釋涂布法（步驟）現(xiàn)在是29頁\一共有33頁\編輯于星期三【典例解析】例1:關(guān)于微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是()A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的無機(jī)物只提供無機(jī)鹽D.無機(jī)氮源也能提供能量解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要針對微生物的具體情況分析。對于A、B選項，它的表達(dá)是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同時是能源，如葡萄糖；有的碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項，除水以外的無機(jī)物種類繁多，功能也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物的碳源和無機(jī)鹽；而NaCl則只能提供無機(jī)鹽。對于D選項，無機(jī)氮源提供能量的情況還是存在的，如NH3可為硝化細(xì)菌提供能量和氮源。D現(xiàn)在是30頁\一共有33頁\編輯于星期三例2：下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是()A.防止雜菌污染B.消滅雜菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌D.滅菌必須在接種前解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要環(huán)節(jié)。A說的是滅菌的目的，因?yàn)榘l(fā)酵所用的菌種大多是單一的純種，整個發(fā)酵過程不能混入其他微生物（雜菌），所以是正確的；B是錯誤的，因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物。C是正確的，因?yàn)榕c發(fā)酵有關(guān)的所有設(shè)備和物質(zhì)都要滅菌；發(fā)酵所用的微生物是滅菌后專門接種的，滅菌必須在接種前，如果接種后再滅菌就會把所接菌種也殺死。B現(xiàn)在是31頁\一共有33頁\編輯于星期三例3．右表是某微生物培養(yǎng)基成分，請據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物類型是

。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費(fèi)此培養(yǎng)基，可再加入

。自養(yǎng)型微生物

含碳有機(jī)物

現(xiàn)在是32頁\一共有33頁\編輯于星期三（3）若除去成分②