α和β地貧、苯丙酮尿癥、遺傳性耳聾課件

1.α和β地中海貧血病

Mediterraneananemia1.1概述遺傳性溶血性貧血血紅蛋白的珠蛋白鏈（α、β、γ、δ鏈）的一種或幾種受到部分或完全抑制地貧分為α、β、δ、δβ等4種類型以α和β地中海貧血較為常見*血紅蛋白分子是由四分子的珠蛋白和四分子亞鐵血紅素組成，珠蛋白約占96%。現(xiàn)狀：廣泛分布于世界許多地區(qū)，東南亞即為高發(fā)區(qū)之一。我國(guó)廣東、廣西、四川多見，長(zhǎng)江以南各省區(qū)有散發(fā)病例，北方則少見。預(yù)防：開展人群普查和遺傳咨詢、做好婚前指導(dǎo)以避免地貧基因攜帶者之間聯(lián)姻；采用基因分析法進(jìn)行產(chǎn)前診斷，避免重型地貧患者出生。治療：輕型地貧無(wú)需特殊治療。中間型和重型地貧：一般治療、輸血和鐵治療、鐵螯合劑、脾切除、造血干細(xì)胞移植、基因活化治療。α地中海貧血人類α珠蛋白基因簇位于16pter-p13.3（16號(hào)染色體短臂末端到短臂13區(qū)3帶

）。α地貧大多是由于α珠蛋白基因的缺失所致，少數(shù)由基因點(diǎn)突變?cè)斐?。缺失型?地貧：占α-地貧的95%以上，由α–基因缺失引起；非缺失型α-地貧：占α-地貧的約5%，由α–基因點(diǎn)突變引起。缺失型α地中海貧血標(biāo)準(zhǔn)型-1或稱東南亞型（--SEA）標(biāo)準(zhǔn)型-2靜止型HbH病HbBart’s胎兒水腫綜合征點(diǎn)突變型α地中海貧血一般只發(fā)生于1個(gè)α基因上，占α地貧的5%，目前至少發(fā)現(xiàn)68種。在中國(guó)南方地區(qū)主要見兩種：HbConstantSpring(CS),HbQuongSze(QS)，點(diǎn)突變型地貧表型較缺失型地貧嚴(yán)重點(diǎn)突變大多位于功能較強(qiáng)的α2基因α2基因發(fā)生突變比缺失時(shí)α鏈產(chǎn)量明顯減少點(diǎn)突變產(chǎn)生的某些異常血紅蛋白可形成不溶物直接損傷紅細(xì)胞有些非缺失型α-地貧純合子（αQSα/αQSα、αCSα/αCSα、αQSα/αCSα）可以表現(xiàn)為HbH?。挥行┓侨笔虷bH?。?-SEA/αQSα、--SEA/αCSα）的臨床表現(xiàn)比缺失型HbH?。?-SEA/α3.7α、--SEA/α4.2α）更為嚴(yán)重。β地中海貧血人類β珠蛋白基因簇位于11p15.5。β地中海貧血（簡(jiǎn)稱β地貧）的發(fā)生主要是由于基因的點(diǎn)突變，少數(shù)因基因缺失。β地貧的發(fā)生的分子病理相當(dāng)復(fù)雜，目前在全世界已發(fā)現(xiàn)了近200多種突變類型。中國(guó)人群中共發(fā)現(xiàn)約48余種，其中常見的6種占90%以上。輕型β-地貧：2個(gè)基因中有1個(gè)基因突變基因型：βN/βT重型β-地貧：2個(gè)基因中有2個(gè)基因突變基因型：βT/βTα地貧產(chǎn)前診斷方法1、非侵入性產(chǎn)前診斷：為無(wú)創(chuàng)性產(chǎn)前診斷方法，最早于孕12周進(jìn)行。先用超聲檢查胎兒是否貧血。心胸比例（孕12-17周≥0.5；孕18-21周≥0.52）、大腦中動(dòng)脈血流（MCV-PSV＞1.5MOM提示胎兒重度貧血）、胸腔腹腔積液、胎盤厚度、羊水過(guò)多等若提示胎兒貧血,再進(jìn)行侵入性檢查；若無(wú)提示胎兒貧血，不需要侵入性檢查。2、侵入性產(chǎn)前診斷：同β地貧產(chǎn)前診斷方法β地貧產(chǎn)前診斷方法侵入性產(chǎn)前診斷：絨毛穿刺術(shù)：10-14周，5-7天出診斷報(bào)告羊膜腔穿刺術(shù)：16-23周，5-7天出診斷報(bào)告臍靜脈穿刺術(shù)：23周后，5-7天出診斷報(bào)告1.4基因分析α-地中海貧血基因檢測(cè)試劑盒在中國(guó)地區(qū)普遍發(fā)生的α-地貧分別由--SEA、-α3.7和-α4.2位點(diǎn)缺失引起的。PCR方法結(jié)合DNA芯片雜交技術(shù)根據(jù)這三種缺失型的缺失斷裂點(diǎn)，設(shè)計(jì)了三對(duì)引物分別檢測(cè)-α3.7、-α4.2和--SEA，只有當(dāng)樣品發(fā)生缺失時(shí)，相應(yīng)的上下游引物距離靠近，擴(kuò)增出相應(yīng)條帶。將正常內(nèi)對(duì)照（用αα表示）設(shè)計(jì)在三種共同缺失的位置，以使當(dāng)發(fā)生任一種缺失時(shí)正常對(duì)照都不擴(kuò)增。四對(duì)引物要在同一管擴(kuò)增并通過(guò)電泳來(lái)判斷結(jié)果，設(shè)計(jì)引物位置時(shí)各PCR產(chǎn)物的條帶大小要有區(qū)別，最終-α3.7、αα、-α4.2和--SEA的擴(kuò)增條帶分別約為：2.0kbp、1.8kbp、1.6kbp和1.3kbp。α-地中海貧血點(diǎn)突變基因檢測(cè)試劑盒在中國(guó)人群中還存在的α-珠蛋白基因點(diǎn)突變（αT）類型，這是導(dǎo)致臨床α地貧漏診的主要原因之一。作為α地貧3種缺失型檢測(cè)的補(bǔ)充，對(duì)懷疑α地貧有漏診的患者進(jìn)行αCS、αQS和αWS突變的診斷，確定具體的基因突變類型。缺失檢測(cè)結(jié)果αT檢測(cè)結(jié)果膜條圖片樣品基因型αα/αα三個(gè)位點(diǎn)N顯色，M不顯色αα/αααα/-ααα/-ααα/--SEAαα/--SEAαα/αα三個(gè)位點(diǎn)N顯色，CSM顯色αCSα/αααα/αα一個(gè)CSM顯色,QSN,WSN顯色αCSα/αCSααα/--SEAαCSα/--SEAαα/-ααCSα/-α

常見基因檢測(cè)結(jié)果的判定(以CS突變?yōu)槔?定性、確定具體基因突變型（41-42M、654M、－28M、71-72M、17M、βEM、31M、IVS1-1M、27/28M、43M、－32M、－29M、－30M、14-15M、CAP、IntM、IVS1-5M）*紅色為少見突變類型2.苯丙酮尿癥

phenylketonuria,PKU2.1概述一種常見的遺傳氨基酸代謝病，常染色體隱性遺傳。發(fā)病率約為1/10000，臨床表現(xiàn)不均一，主要臨床特征為智力低下、精神神經(jīng)癥狀、濕疹、皮膚抓痕征及色素脫失和鼠氣味等，最終成為癡呆。是數(shù)千種遺傳病中，少數(shù)幾種可以通過(guò)新生兒篩查，早期診斷治療，并可完全避免智殘的疾病。因此,對(duì)新生兒早期進(jìn)行篩查,檢測(cè)血清(漿)中Phe和Tyr的濃度兩個(gè)主要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對(duì)診斷PKU具有重要意義。2.2病因苯丙氨酸（phenylalanine,Phe）代謝途徑中的酶缺陷，苯丙氨酸不能轉(zhuǎn)變成為酪氨酸，導(dǎo)致苯丙氨酸及其酮酸蓄積，并從尿中大量排出。苯丙氨酸羥化酶(phenylalaninehydroxylase,PAH)先天性缺陷或突變四氫生物蝶呤(tetrahydrobiopterin,BH4)輔因子的合成和BH4的再循環(huán)障礙由PAH缺乏導(dǎo)致者占97%-99%，與四氫生物蝶呤(BH4)合成缺陷有關(guān)者占1%-3%，并被稱為非經(jīng)典型PKU。其特征是人體苯丙氨酸代謝異常，導(dǎo)致高苯丙氨酸血癥。GTP-CH：GTPcyclohydrolase，三磷酸鳥苷酸環(huán)化水解酶6-PTS：PTPS,6-Pyruvoyl-tetrahydropterinsynthase，6-丙酮酰四氫蝶呤合成酶DHPR：dihydropteridinereductase，二氫生物蝶呤還原酶苯丙氨酸是人體必需的氨基酸之一。正常人每日需要的攝入量約為200-500mg，其中1/3供合成蛋白，2/3則通過(guò)肝細(xì)胞中苯丙氨酸羥化酶（PAH）的轉(zhuǎn)化為酪氨酸，以合成甲狀腺素、腎上腺素和黑色素等。生物蝶呤(B)2.3診斷方法1．新生兒期的診斷：依靠新生兒疾病篩查，陽(yáng)性兒進(jìn)行復(fù)查，并用定量法（氨基酸分析、高效液相法、熒光法）精確測(cè)定。2．新生兒以后的診斷：根據(jù)臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室檢查。3．實(shí)驗(yàn)室檢查：尿液檢查、熒光免疫法測(cè)定血中的Phe和Tyr、苯丙氨酸負(fù)荷實(shí)驗(yàn)、頭顱影像檢查：核磁共振（MRI）、尿喋呤分析。新生兒篩查試劑盒：（檢測(cè)苯丙氨酸）

1.菌環(huán)直徑：提供苯丙氨酸可使在含抑制劑培養(yǎng)基上的枯草桿菌恢復(fù)生長(zhǎng)，且生長(zhǎng)環(huán)的直徑與苯丙氨酸的含量呈正比。與標(biāo)準(zhǔn)品比較菌環(huán)直徑，可得出樣品中苯丙氨酸的含量。

2.OD：苯丙氨酸在外加苯丙氨酸脫氫酶的作用下轉(zhuǎn)化成苯丙酮酸鹽，此反應(yīng)使存在于反應(yīng)混合物中的輔酶NAD+再生。產(chǎn)生的NADH使加入的黃色Tetrazalium鹽發(fā)生氧化還原反應(yīng)生成紫色物質(zhì)Formazane，OD570nm值與病人樣本中的苯丙氨酸濃度成正比。3.熒光：濾紙片上干燥血標(biāo)本的苯丙氨酸的一種化學(xué)方法定量檢測(cè)。從濾紙片上干燥血標(biāo)本中洗脫出苯丙氨酸同印三酮形成一種熒光化合物。用熒光讀數(shù)儀讀數(shù)。2.4基因分析PAH基因定位于12號(hào)染色體的長(zhǎng)臂上，即12q22-q24.1。PAH基因除了缺失突變外，大多是點(diǎn)突變。迄今已發(fā)現(xiàn)430多種突變(在中國(guó)人中也已確定44種突變)，突變大多在外顯子區(qū)，60%是錯(cuò)義突變。間接診斷：由于尚有30％的PKU患者的基因突變類型還不清楚，因此間接診斷成為對(duì)這部分病例進(jìn)行基因診斷和產(chǎn)前診斷的主要手段。PCR-RFLP、PCR-STR、PCR-SSCP、PCR-DGGE、PCR-PASA3.遺傳性耳聾

HereditaryHearingImpairment3.1概述基因和染色體異常所致的耳聾在每1000個(gè)新生兒中就有一位患有先天性耳聾，其中60%以上是由遺傳因素引起的，遺傳性聾的群體發(fā)病率已超過(guò)27/1000，在所有耳聾病人中，遺傳性聾約占50%。遺傳性聾分為綜合征性遺傳性聾及非綜合征性遺傳性聾兩大類。前者指除了耳聾以外，同時(shí)存在眼、骨、腎、皮膚等部位的病變，這類耳聾占遺傳性聾的30%；后者只出現(xiàn)耳聾的癥狀，在遺傳性聾中占70%。3.3診斷方法想要明確耳聾是不是遺傳性耳聾，就要進(jìn)行基因檢測(cè)。傳統(tǒng)的酶切，測(cè)序等方法不僅耗時(shí)長(zhǎng)，而且一次只能檢測(cè)一個(gè)基因，也就是說(shuō)除非能夠確定到底是由哪個(gè)基因?qū)е露@，否則檢測(cè)的費(fèi)用是十分昂貴且費(fèi)時(shí)的。但隨著基因技術(shù)的不斷發(fā)展，基因檢測(cè)的技術(shù)也出現(xiàn)了突飛猛進(jìn)，基因芯片技術(shù)就是針對(duì)快速檢測(cè)而出現(xiàn)的技術(shù)。3.4基因分析針