細(xì)胞衰老與凋亡的概述

成年小鼠各類細(xì)胞的壽命接近或等于自身壽命的細(xì)胞神經(jīng)元、腎髓質(zhì)、肌細(xì)胞脂肪、胃酶原細(xì)胞骨、腎上腺髓質(zhì)細(xì)胞緩慢更新的細(xì)胞(長于30天)呼吸道上皮、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞腎皮質(zhì)、皮膚結(jié)締組織、肝細(xì)胞胰臟腺泡及胰島、唾液腺細(xì)胞快速更新的細(xì)胞(少于30天)皮膚表皮、角膜上皮細(xì)胞口腔和胃腸道上皮細(xì)胞紅細(xì)胞、白細(xì)胞細(xì)胞總體的衰老可以反映機體的衰老，而機體的衰老是以總體細(xì)胞的衰老為基礎(chǔ)的。根據(jù)細(xì)胞衰老速度不同將其分為三類：現(xiàn)在是1頁\一共有29頁\編輯于星期三體外培養(yǎng)細(xì)胞壽命與機體壽命成正比。細(xì)胞的增值能力與供體年齡有關(guān)?，F(xiàn)在是2頁\一共有29頁\編輯于星期三二、細(xì)胞衰老的表現(xiàn)：主要表現(xiàn)為對環(huán)境變化適應(yīng)能力的降低和維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境能力的降低。（一）形態(tài)結(jié)構(gòu)變化1.細(xì)胞內(nèi)水分減少：失去正常形態(tài)，代謝速率減慢。2.細(xì)胞內(nèi)色素沉積：脂褐質(zhì)小體隨年齡增加而增多。3.細(xì)胞膜的衰老變化：磷脂含量下降，膜變厚、流動性下降、物質(zhì)轉(zhuǎn)運障礙?，F(xiàn)在是3頁\一共有29頁\編輯于星期三4.內(nèi)膜系統(tǒng)的變化：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)逐漸減少，高而基體囊泡腫脹、扁平囊泡斷裂崩解，溶酶體功能減退、酶漏出細(xì)胞自溶。5.細(xì)胞中的線粒體隨年齡增大數(shù)目減少、體積增大。6.細(xì)胞核的衰老變化：核固縮，常染色質(zhì)減少，染色加深，核質(zhì)比減小。（二）功能變化1.染色質(zhì)轉(zhuǎn)錄活性下降。2、蛋白質(zhì)合成下降，酶活性改變。現(xiàn)在是4頁\一共有29頁\編輯于星期三細(xì)胞在體內(nèi)條件下衰老原代小鼠F1代小鼠F2代小鼠移植的皮膚細(xì)胞可存活7～8年。小鼠的皮膚細(xì)胞在體內(nèi)衰老的主要是體內(nèi)環(huán)境。現(xiàn)在是5頁\一共有29頁\編輯于星期三三、細(xì)胞衰老的特征：1、普遍性2、內(nèi)生性3、漸進性4、累積性5、危害性現(xiàn)在是6頁\一共有29頁\編輯于星期三三.細(xì)胞衰老的學(xué)說1、細(xì)胞磨損學(xué)說1）錯誤成災(zāi)學(xué)說差誤成災(zāi)學(xué)說是由Orgel明確提出的，認(rèn)為在DNA復(fù)制，轉(zhuǎn)錄和翻譯中發(fā)生誤差，這種誤差可以不斷擴大，造成細(xì)胞衰老、死亡。如DNA轉(zhuǎn)錄mRNA的過程發(fā)生微小的差異，帶有該微小差異的mRNA會翻譯出進一步偏離的蛋白質(zhì)，該蛋白質(zhì)如果屬于DNA聚合酶會合成差異程度更大的DNA，這樣的差錯經(jīng)過每一次信息傳遞都擴大一些，形成惡性循環(huán)，使細(xì)胞內(nèi)積累許多差錯分子造成災(zāi)難，細(xì)胞正常功能不能發(fā)揮，致使細(xì)胞衰老、死亡。

現(xiàn)在是7頁\一共有29頁\編輯于星期三2）自由基學(xué)說：正常代謝反應(yīng)的中間產(chǎn)物每含自由基，對細(xì)胞會造成不可逆的損傷，如脂類的過氧化與大分子的交聯(lián)，其后果是使胞內(nèi)酶失活，以及象脂褐質(zhì)一類的惰性物質(zhì)在胞內(nèi)沉積。此說雖然無直接證據(jù)，但以抗氧化劑或自由基凈化劑飼喂小鼠可延長壽命，或抑制脂褐質(zhì)的形成。此外，抗氧化劑還有加強機體免疫反應(yīng)，抑制腫瘤及自體免疫疾病等作用，都從側(cè)面為此說提供了間接的證據(jù)，然而也有一些反面的實驗結(jié)果?，F(xiàn)在是8頁\一共有29頁\編輯于星期三3）大分子交聯(lián)學(xué)說該學(xué)說由Bjorksten于1963年提出的，后經(jīng)Verzar加以發(fā)展。其主要論點是：機體中蛋白質(zhì)，核酸等大分子可以通過共價交叉結(jié)合，形成巨大分子。這些巨大分子難以酶解，堆積在細(xì)胞內(nèi)，干擾細(xì)胞的正常功能。這種交聯(lián)反應(yīng)可發(fā)生于細(xì)胞核DNA上，也可以發(fā)生在細(xì)胞外的蛋白膠原纖維中。目前有一些證據(jù)支持交聯(lián)學(xué)說。皮膚膠原的可提取性以及膠原酶對其消化作用隨增齡降低，而其熱穩(wěn)定性和抗張強度則隨年齡的增高而增強了；大鼠尾腱上的條紋數(shù)目及所具備的熱收縮力隨年齡的增高而增加，溶解度卻隨年齡增高而降低。這些結(jié)果表明，在年老時膠原的多肽鏈發(fā)生了交聯(lián)，并日益增多。該學(xué)說與自由基學(xué)說有類似之處，亦不能說明衰老發(fā)生的根本機制。

現(xiàn)在是9頁\一共有29頁\編輯于星期三2、遺傳程序假說：1)衰老基因?qū)W說首先報道誘導(dǎo)永生細(xì)胞衰老實驗的是Sugawara等人，用正常細(xì)胞和永生倉鼠細(xì)胞融合后，出現(xiàn)衰老表現(xiàn)。將人1號染色體導(dǎo)入永生倉鼠細(xì)胞則細(xì)胞出現(xiàn)衰老跡象。Sugawara等認(rèn)為1號染色體上攜有倉鼠永生細(xì)胞系的衰老基因。有人說細(xì)胞衰老是被激活的或在細(xì)胞增殖后期作用顯著的基因控制的結(jié)果，由此認(rèn)同了衰老基因的存在，缺失這些基因使細(xì)胞發(fā)生永生化。正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞雜交后，雜交細(xì)胞表現(xiàn)衰老，說明了正常細(xì)胞能夠彌補腫瘤細(xì)胞在衰老程序中的缺陷。人們發(fā)現(xiàn)使細(xì)胞衰老的染色體似乎也有特異性，如對于同一種細(xì)胞導(dǎo)入2號染色體，細(xì)胞出現(xiàn)衰老表現(xiàn)，導(dǎo)入3、6、7、9、11或12號染色體細(xì)胞仍能繼續(xù)生長，也沒有形態(tài)的改變。

導(dǎo)入染色體可以使細(xì)胞從永生向衰老轉(zhuǎn)變，不能就認(rèn)為其上一定攜有衰老基因，任何引起細(xì)胞功能下降的因素都可以導(dǎo)致衰老。從進化上講，多細(xì)胞生物也沒有必要強制性存在衰老基因。

現(xiàn)在是10頁\一共有29頁\編輯于星期三2）基因阻遏平衡論于1992年由呂占軍教授提出，以后又作了部分補充。嚴(yán)格說該學(xué)說屬于一種生命學(xué)說，因其不僅解釋衰老也解釋腫瘤和分化。該學(xué)說同時考慮到衰老、分化和腫瘤現(xiàn)象，考慮到基因結(jié)構(gòu)及組成，生物進化等多方面的問題，但其中的許多論點和直接實驗依據(jù)尚在進一步地驗證和提供過程中。現(xiàn)在是11頁\一共有29頁\編輯于星期三3、端粒學(xué)說端粒學(xué)說由Olovnikov提出，認(rèn)為細(xì)胞在每次分裂過程中都會由于DNA聚合酶功能障礙而不能完全復(fù)制它們的染色體，因此最后復(fù)制DNA序列可能會丟失，最終造成細(xì)胞衰老死亡。

端粒是真核生物染色體末端由許多簡單重復(fù)序列和相關(guān)蛋白組成的復(fù)合結(jié)構(gòu)，具有維持染色體結(jié)構(gòu)完整性和解決其末端復(fù)制難題的作用。端粒酶是一種逆轉(zhuǎn)錄酶，由RNA和蛋白質(zhì)組成，是以自身RNA為模板，合成端粒重復(fù)序列，加到新合成DNA鏈末端。在人體內(nèi)端粒酶出現(xiàn)在大多數(shù)的胚胎組織、生殖細(xì)胞、炎性細(xì)胞、更新組織的增生細(xì)胞以及腫瘤細(xì)胞中。正因如此，細(xì)胞每有絲分裂一次，就有一段端粒序列丟失，當(dāng)端粒長度縮短到一定程度，會使細(xì)胞停止分裂，導(dǎo)致衰老與死亡。

現(xiàn)在是12頁\一共有29頁\編輯于星期三大量實驗說明端粒、端粒酶活性與細(xì)胞衰老及永生有著一定的聯(lián)系。第一個提供衰老細(xì)胞中端?？s短的直接證據(jù)是來自對體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的觀察，通過對不同年齡供體成纖維細(xì)胞端粒長度與年齡及有絲分裂能力的關(guān)系觀察到隨著增齡，端粒的長度逐漸變短，有絲分裂的能力明顯漸漸變?nèi)?；Hastie發(fā)現(xiàn)結(jié)腸端粒限制性片段的長度隨供體年齡增加逐漸縮短，平均每年丟失33bp的重復(fù)序列；植物中不完整的染色體在受精作用中得以修復(fù)，而不能在已經(jīng)分化的組織中修復(fù)，這在較為高等的真核生物中也證實了體細(xì)胞中端粒酶的活性受抑制；精子的端粒要比體細(xì)胞長，體細(xì)胞缺失端粒酶活性就會逐漸衰老，而生殖細(xì)胞系的端粒卻可以維持其長度；轉(zhuǎn)化細(xì)胞能夠通過端粒酶的活性完全復(fù)制端粒以得永生。

現(xiàn)在是13頁\一共有29頁\編輯于星期三但是許多問題用端粒學(xué)說還不能解釋。體細(xì)胞端粒長度與有絲分裂能力呈正比，這一點實驗已經(jīng)證實了，而不同的體細(xì)胞其有絲分裂能力是不盡相同的，胃腸黏膜細(xì)胞的分裂增殖速度就比較快，神經(jīng)細(xì)胞分裂的速度就比較慢。曾有人就不同年齡供體角膜內(nèi)皮細(xì)胞的端粒長度進行研究發(fā)現(xiàn)角膜內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)端粒長度長期維持在一個較高的水平，而端粒酶卻不表達(dá)。另外，Kippling發(fā)現(xiàn)，鼠的端粒比人類長近5-10倍，壽命卻比人類短的多。這些都提示體細(xì)胞端粒長度與個體的壽命及不同組織器官的預(yù)期壽命并非一致。生殖細(xì)胞的端粒酶活性長期維持較高的水平卻不會象腫瘤那樣無限制分裂繁殖；端粒長度由端粒酶控制，那何種因素控制端粒酶呢？生殖細(xì)胞內(nèi)端粒酶活性較高，為什么體細(xì)胞中沒有較高的端粒酶活性?？磥矶肆５拈L度縮短是衰老的原因還是結(jié)果尚需進一步研究。

現(xiàn)在是14頁\一共有29頁\編輯于星期三活性氧基團導(dǎo)致細(xì)胞損傷和衰老（氧化損傷學(xué)說，自由基理論）自由基(freeradical):不成對電子或原子基團構(gòu)成的高度活化分子O2超氧自由基；OH羥自由基；自由基與其他分子反應(yīng)時產(chǎn)生的活性氧基團（ROS）導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生氧化性損傷。

現(xiàn)在是15頁\一共有29頁\編輯于星期三自由基現(xiàn)在是16頁\一共有29頁\編輯于星期三衰老基因?qū)W說衰老基因與抗衰老基因衰老基因人類：載脂蛋白Eε4基因、β淀粉樣蛋白基因p16,p53p21RB基因2.抗衰老基因WRNbcl-2現(xiàn)在是17頁\一共有29頁\編輯于星期三現(xiàn)在是18頁\一共有29頁\編輯于星期三染色體端?？s短與細(xì)胞衰老

端?！肆ｇ妼W(xué)說（telomereclocktheory)端粒（telomere)是染色體末端特殊結(jié)構(gòu)。人類端粒（TTAGGG)nn=250-1500端粒長度取決于端粒酶的活性?，F(xiàn)在是19頁\一共有29頁\編輯于星期三stop端粒長度現(xiàn)在是20頁\一共有29頁\編輯于星期三端粒酶RNA（核蛋白酶）蛋白質(zhì)端粒酶維持細(xì)胞分裂時染色體端粒長度端粒酶活性（+）：胚胎細(xì)胞、生殖細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞端粒酶活性（-）：正常組織

Dolly-20%端粒長度與衰老相關(guān)模板序列CUAACCCUAAC

GGGATT現(xiàn)在是21頁\一共有29頁\編輯于星期三第二節(jié)細(xì)胞死亡細(xì)胞死亡的形式：細(xì)胞壞死(necrosis)和細(xì)胞凋亡(apoptosis)。一.細(xì)胞死亡：生命現(xiàn)象不可逆的終止。二.細(xì)胞凋亡細(xì)胞壞死：由于多種致病因子、物理、化學(xué)、和生物因子的作用，而產(chǎn)生的急性損傷致。亦稱病理性死亡。細(xì)胞凋亡：由基因控制的細(xì)胞自主的有序性的死亡。因受相關(guān)基因的調(diào)控，亦稱編程性細(xì)胞死亡(progremmedcelldeath,PCD)?，F(xiàn)在是22頁\一共有29頁\編輯于星期三胸腺細(xì)胞正常凋亡現(xiàn)在是23頁\一共有29頁\編輯于星期三細(xì)胞壞死與細(xì)胞凋亡的比較現(xiàn)在是24頁\一共有29頁\編輯于星期三細(xì)胞凋亡過程中的小鼠趾一天以后中的小鼠趾細(xì)胞凋亡現(xiàn)在是25頁\一共有29頁\編輯于星期三三.細(xì)胞凋亡的特點凋亡小體(apoptoticbody)：胞膜內(nèi)陷包圍凝集斷裂的染色質(zhì)和細(xì)胞器形成的囊狀小泡。

左側(cè)示哺乳類乳腺細(xì)胞的凋亡，染色質(zhì)凝集，核膜崩解。

右側(cè)示哺乳類正常的乳腺細(xì)胞?，F(xiàn)在是26頁\一共有29頁\編輯于星期三透射電鏡掃描電鏡現(xiàn)在是27頁\一共有29頁\編輯于星期三正常細(xì)胞細(xì)胞凋亡