氣相色譜法測定食用酒中乙醇含量

氣相色譜法測定食用酒中乙醇含量第1頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗原理

氣相色譜法是一種高效、快速而靈敏的分離分析技術(shù)。

當(dāng)液體樣品由進樣口注入后立即被汽化，并被載氣帶入色譜柱，經(jīng)過多次分配而得以分離的各個組分逐一流出色譜柱進入檢測器，隨時間變化而產(chǎn)生的電信號由記錄儀得到氣相色譜圖。對氣相色譜圖進行數(shù)學(xué)分析，即可對樣品進行定性定量分析。第2頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五三、儀器與試劑

1.儀器：氣相色譜儀、氫火焰檢測器（FID）、色譜柱、微量注射器、容量瓶（10cm3）、色譜工作站、吸量管（2、5cm3）。

2.試劑：無水乙醇(A.R)、無水n-C3H7OH(A.R)、丙酮、食用酒。第3頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

四、實驗步驟

1.色譜操作條件柱溫：90℃；汽化室溫度：150℃；檢測器溫度：130℃；N2（載氣）流速：40cm3/min；H2流速：35cm3/min；空氣流速：400cm3/min；

2.標準溶液的測定用吸量管準確吸取0.50cm3無水乙醇和0.50cm3無水n-C3H7OH于10cm3的容量瓶中，用丙酮定容至刻度，搖勻。用微量注射器吸取0.5μL標準溶液，注入色譜儀內(nèi)，記錄各色譜峰的保留時間tR和色譜峰面積，求出以無水n-C3H7OH為標準物的相對校正因子。第4頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五3.樣品溶液的測定用吸管吸取1.00cm3的食用酒樣品和0.50cm3的內(nèi)標物（無水n-C3H7OH）于10cm3容量瓶中，用丙酮定容至刻度，搖勻。用微量注射器吸取0.5μL樣品溶液，注入色譜儀內(nèi)，記錄各色譜峰的保留時間tR，對照比較標準溶液與樣品溶液的tR，以確定樣品中的醇，記錄C2H5OH和n-C3H7OH色譜峰面積，求出樣品中C2H5OH的含量。第5頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

實驗二

氣相色譜法測定生物柴油中脂肪酸甲酯一、實驗?zāi)康?.了解氣相色譜儀的基本構(gòu)造與一般使用方法2.掌握氣相色譜檢測器的原理和操作；3.了解程序升溫色譜法的操作特點；4.學(xué)會用氣相色譜儀進行歸一化法定量分析。第6頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗原理

程序升溫是指色譜柱的溫度按照適宜的程序連續(xù)地隨時間呈線性或非線性升高。在程序升溫中，采用較低的初始溫度，使低沸點的組分得到良好分離，然后隨著溫度不斷升高，沸點較高的組分逐一“推出”。由于高沸點組分較快地流出，因而峰形尖銳，與低沸點組分類似。

在一定的色譜操作條件下，每種物質(zhì)有一定的保留時間，而響應(yīng)值與進樣量成線性關(guān)系。當(dāng)樣品中所有組分都能流出色譜柱，并能給出可以測定的信號時，可以采用采用歸一化法進行定量分析。

歸一化法只適用于樣品中所有組分都從色譜柱流出并被檢測器檢出、且都在線性范圍內(nèi)、同時又能測定或查出所有組分相對校正因子的樣品。第7頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五三、儀器與試劑

1.儀器：6890型氣相色譜儀；色譜柱：HP-innowax毛細管色譜柱（30×0.25×0.25）；氫火焰離子化檢測器；微量注射器。2.試劑：生物柴油；正己烷。第8頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

四、實驗步驟

1.色譜操作條件：汽化室溫度280℃；檢測器溫度280℃；柱溫采用程序升溫：初始溫度170℃，保持0.5min，以5℃／min的升溫速率升至200℃，然后以15℃／min的升溫速率升至240℃，保持時間5min；載氣：N2，柱頭壓60kPa；氫氣：32mL／min；空氣：320mL／min；進樣量：1μL。

2.取一定量的生物柴油樣品于1mL的容量瓶中，用正己烷定容后，在上述色譜條件下進行氣相色譜分析，記錄下各色譜峰的保留時間和峰面積。第9頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五根據(jù)公式（1）計算各脂肪酸甲酯的百分含量。

第10頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

實驗三

高效液相色譜法測定萘一、實驗?zāi)康恼J識高效液相色譜儀,掌握高效液相色譜儀的基本操作；2.掌握高效液相色譜法進行定性和定量分析的原理；

3.掌握外標法進行定量分析的方法。第11頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗原理

在一定的色譜操作條件下，每種物質(zhì)有一定的保留時間，而響應(yīng)值與進樣量成線性關(guān)系。外標法也叫標準曲線法。第12頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五三、儀器與試劑

儀器:ShimadzuLC-10ATvp高效液相色譜儀；紫外吸收檢測器（254mm）；C18柱，25cm×4.6mm；微量注射器；超聲波清洗器1臺；溶劑過濾器1套。2.試劑:甲醇：色譜純；二次蒸餾水；萘：AR級。第13頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

四、實驗步驟

1.色譜操作條件：色譜柱：C18柱；流動相：甲醇：水＝80：20流速：1mL/min檢測波長：254nm柱溫：40℃；進樣量：20μL。第14頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五2.標準溶液配制；3.樣品溶液的配制；4.進樣并記錄色譜圖

第15頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五五、數(shù)據(jù)處理與分析第16頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

實驗四

內(nèi)標法測定聯(lián)苯一、實驗?zāi)康倪M一步熟悉高效液相色譜儀的基本構(gòu)造與一般使用方法；2.理解內(nèi)標法的測定原理和優(yōu)點；3.初步學(xué)會設(shè)計色譜法進行樣品測定的實驗步驟，并以萘為內(nèi)標物測定樣品中聯(lián)苯的含量。第17頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗原理

在一定的色譜操作條件下，每種物質(zhì)有一定的保留時間，而響應(yīng)值與進樣量成線性關(guān)系。內(nèi)標法也叫內(nèi)標標準曲線法。第18頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五三、儀器與試劑

儀器:ShimadzuLC-10ATvp高效液相色譜儀；紫外吸收檢測器（254mm）；C18柱，25cm×4.6mm；微量注射器；超聲波清洗器1臺；溶劑過濾器1套。2.試劑:甲醇：色譜純；二次蒸餾水；萘、聯(lián)苯：AR級。第19頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

四、實驗步驟

1.色譜操作條件：色譜柱：C18柱；流動相：甲醇：水＝90：10流速：1mL/min檢測波長：254nm柱溫：40℃；進樣量：20μL。第20頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五2.標準溶液配制；3.樣品溶液的配制；4.進樣并記錄色譜圖

第21頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五五、數(shù)據(jù)處理與分析第22頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

實驗五

常見陰離子色譜分析一、實驗?zāi)康牧私怆x子色譜儀的基本構(gòu)造與一般使用方法；2.能用于測定樣品中常見陰離子的含量。第23頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗原理

離子色譜法是以為離子交換樹脂為固定相，電解質(zhì)溶液為流動相的液相色譜方法，常以電導(dǎo)檢測器作為通用的檢測器。常見陰離子經(jīng)過陰離子柱分離后，利用保留時間進行定性分析，利用峰面積進行定量分析。第24頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五三、儀器與試劑

儀器:ICS-90型離子色譜儀；電導(dǎo)檢測器；陰離子分析系統(tǒng)，微量注射器。2.試劑：Na2SO4、NaNO3、NaCl(均為分析純)；9mmol/LNa2CO3溶液。第25頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五四、實驗步驟

1.色譜操作條件的設(shè)置；2.標準溶液配制；

3.樣品溶液的配制；4.進樣并記錄色譜圖。第26頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五五、數(shù)據(jù)處理與分析第27頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

實驗六

分子熒光光譜分析法測定維生素B2一、實驗?zāi)康牧私鉄晒夤庾V分析基本原理；2.掌握熒光法的定量分析方法；3.了解日立F-2500型熒光分光光度計的構(gòu)造及其使用方法。第28頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗原理

維生素B2（核黃素）在一定波長的激發(fā)光照射下會發(fā)射出綠色熒光，根據(jù)熒光強度在一定濃度范圍內(nèi)與熒光物質(zhì)濃度成正比，用標準曲線法對樣品進行定量分析。第29頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五三、儀器與試劑

儀器：日立F-2500型熒光分光光度計，液體樣品架，50mL容量瓶8個，100mL燒杯2個，洗瓶一個，玻璃棒二根，蒸餾水。2.試劑：1%的醋酸溶液；維生素B2標準溶液：稱出10.0mg維生素B2先溶于少量的1%的醋酸溶液，然后轉(zhuǎn)移到1000mL容量瓶中，用1%的醋酸溶液定容至刻度，搖勻，至陰暗處保存。此液含維生素B210.0μg/mL。第30頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五四、實驗步驟

1.按照日立F-2500型熒光分光光度計的使用方法開好儀器。2.配制系列標準溶液：取5個50mL容量瓶，分別加入1.00，2.00，3.00，4.00，5.00mL濃度為10.0μg/mL的標準溶液，用水稀釋至刻度，搖勻。第31頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五3.標準曲線的繪制把各標準樣品置于試樣架內(nèi)，設(shè)置好儀器的工作條件，用蒸餾水做空白，分別掃描空白和標樣的熒光光譜，根據(jù)峰高和濃度繪制標準曲線。4.未知試樣的測定準確稱出一定量的未知試樣于小燒杯中，用水溶解并定容至100mL容量瓶內(nèi)，搖勻，用測定標準曲線相同的條件，測其熒光強度。第32頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五五、數(shù)據(jù)處理與分析根據(jù)試液的熒光強度，從標準曲線上查出試液中維生素B2的濃度，按下列公式計算維生素B2的含量。維生素B2的含量=C×100/G（μg/g）C—試液中維生素B2的濃度（從標準曲線上查出，單位是μg/mL）C—未知試樣的重量，單位是克（g）100—試樣被稀釋的體積。第33頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

實驗七

紫外吸收光譜法測定苯甲酸一、實驗?zāi)康牧私庾贤馕展庾V儀的基本構(gòu)造與一般使用方法；2.能用于測定樣品中苯甲酸的含量。第34頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗原理

苯甲酸在225nm處有最大吸收峰，其吸光度與濃度的關(guān)系服從朗伯－比爾定律。第35頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五三、儀器與試劑

儀器：UV1600紫外分光光度計；10mL容量瓶7個；20mL、5mL吸量管各1支。2.試劑:0.1mol?L-1NaOH溶液;苯甲酸鈉(AR);蒸餾水。第36頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五四、實驗步驟

1.苯甲酸鈉貯備液的配制：稱量經(jīng)過干燥的苯甲酸鈉適量于1000mL容量瓶中，用水溶解，并定容。2.苯甲酸鈉工作溶液的配制：取20.00mL貯備液稀釋定容至1000mL。3.苯甲酸鈉系列標準溶液的配制：分別取苯甲酸鈉工作溶液0-5.00mL按下表配制。第37頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五容量瓶編號12345678工作液（mL）01.002.003.004.005.004.004.00加入NaOH（mL）1.001.001.001.001.001.001.001.00定容（mL)10.010.010.010.010.010.010.010.0C（ppm）02.04.06.08.010.0X1X2第38頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五五、數(shù)據(jù)處理與分析1.標準曲線的繪制：以苯甲酸鈉系列標準溶液的吸光度為縱坐標，相應(yīng)的濃度為橫坐標，繪制作A-C標準曲線。2.樣品溶液中苯甲酸鈉含量計算：從A-C標準曲線上查出X值，從而求出樣品中苯甲酸的含量。第39頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

實驗八

雙波長法同時測定維生素C和E一、實驗?zāi)康倪M一步熟悉紫外吸收光譜儀的基本構(gòu)造，掌握其一般使用方法；2.能用雙波長法同時測定雙組分的含量。第40頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗原理

吸光度具有加合性，根據(jù)兩組分吸收曲線的性質(zhì)，選擇兩個合適的測定波長，通過解聯(lián)立方程的可以同時測出樣品中雙組分的含量。第41頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五三、儀器與試劑

儀器:UV1600紫外分光光度計；50mL容量瓶10個；20mL、5mL吸量管各2支。2.試劑:維生素C;維生素E;無水乙醇。第42頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五四、實驗步驟

1.維生素C和維生素E標準溶液的配制；2.維生素C和維生素E紫外吸收曲線的繪制，確定測定波長；3.維生素C和維生素E標準曲線的繪制；4.未知試樣的測定。第43頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五五、數(shù)據(jù)處理與分析1.維生素C吸收曲線的繪制；2.維生素E吸收曲線的繪制；3.根據(jù)吸收曲線測定波長的選定；4.維生素C標準曲線的繪制：5.維生素E標準曲線的繪制：6.樣品溶液中維生素C和E含量計算。第44頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五實驗九

原子吸收光譜法測定

井水、河水中鎂一、實驗?zāi)康模?學(xué)會原子吸收光譜法測定金屬元素的原理與方法；２.了解原子吸收分光光度計的基本構(gòu)造，初步熟悉其操作方法；３.掌握火焰法測鎂的條件選擇。第45頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五二、實驗原理

將樣品試液吸入空氣–乙炔火焰中，在火焰的高溫下，鎂化合物離解為鎂基態(tài)原子，基態(tài)原子蒸氣對鎂空心陰極燈發(fā)射的特征譜線產(chǎn)生吸收。將測得的試樣溶液的吸光度扣除試劑空白的吸光度，利用標準曲線法，確定試液中的鎂含量。

三、儀器與試劑

１、儀器：TAS-986型/GGX-Ⅱ型原子吸收分光光度計

２、試劑：10μg/mlMg標準液

第46頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五四、實驗步驟

１.配制Mg標準系列

取10μg/mlMg標準液0.50、1.00、0.50、2.00、2.50ml，分別置于5個50ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度搖勻，得Mg標準系列。

２.樣品：

井水直接取4.00ml稀釋至100ml；河水過濾后取10ml，稀釋至100ml。第47頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五元素光源燈電流波長通帶火焰燃燒器高度MgMg燈1.０mA285.2nm2A乙炔／空氣５～６mm３.儀器檢測條件第48頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五按照上述條件，根據(jù)儀器操作步驟依次從低到高濃度測定標液和樣液。五、數(shù)據(jù)處理采用標準曲線法處理，樣品稀釋倍數(shù)。第49頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五附一TAS-986原子吸收分光光度計火焰法操作規(guī)程１.正確連接儀器及計算機各連線和插頭，確認儀器電源開關(guān)處于“關(guān)”位，再開啟穩(wěn)壓器電源。２.順序打開打印機、顯示器、計算機電源開關(guān)，等待計算機處于“Windows”界面。３.裝上待測元素空心陰極燈，并記下燈位。打開TAS-986主機電源開關(guān)，雙擊“AAwin”軟件圖標→聯(lián)機“確定”，儀器自動進入自檢。第50頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五４.自檢完成后，設(shè)定和選擇工作燈和預(yù)熱燈→“下一步”→修改或輸入正確的燈電流、分光帶寬、燃氣流量、燃燒器高度和位置→“下一步“尋峰”→“下一步”→“完成”。

５.在任務(wù)欄擊“儀器”，選擇“燃燒器參數(shù)”，

調(diào)節(jié)火焰原子化器的前后、上下及角度位置，其對準光路。

第51頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五６.擊“儀器”→選擇“扣背景方式”→選擇“氘燈”

或“自吸”扣背景，并輸入適當(dāng)?shù)碾疅綦娏骰蛘}沖電流，在能量窗口再進行調(diào)節(jié)和能量自動平衡。若不進行背景校正，本步可省去。７.擊“參數(shù)”按鈕→在常規(guī)界面輸入“測量重復(fù)次數(shù)”、“采樣間隔”、及“采樣延時參數(shù)”；在顯示界面輸入“吸光度顯示范圍”及“頁面更新時間”在數(shù)據(jù)處理界面選擇“計算方式”，輸入

“積分時間”、“濾波系數(shù)”→“確定”。第52頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五

８.擊“樣品”按鈕→選擇“校正方法”、“曲線方程”、“濃度單位”→“下一步”→選擇

“標準系列樣品個數(shù)”，輸入“標準系列樣品濃度值”→“下一步”→選擇“未知樣品個數(shù)”

→“完成”。

９.順序打開空壓機“風(fēng)機開關(guān)”→“工作開關(guān)”，待壓力穩(wěn)定后，檢查并調(diào)節(jié)出口壓力為0.25~0.3Mpa之間（推薦壓力0.25Mpa）。第53頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五10.打開乙炔鋼瓶總閥，檢查并調(diào)節(jié)出口壓力為0.05~0.09Mpa之間（推薦壓力0.06Mpa）。

11.擊“點火”按鈕點火→吸噴蒸餾水1~2分鐘→吸噴標準系列空白溶液擊“校零”按鈕自動調(diào)零。

12.擊“測量”按鈕→順序吸噴標準系列溶液并在測量窗口擊“開始”按鈕測量標準溶液，作校準曲線。第54頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五13.吸噴未知樣品溶液，擊“開始”按鈕測量未知樣品。全部未知樣品測量完畢后擊“終止”按鈕退出測量→吸噴蒸餾水1~2分鐘清洗燃燒器。14.擊“應(yīng)用”按鈕→選擇“實驗記錄”→輸入“測量元素”、“樣品名稱”、“分析員”、“記錄”→“確定”。

第55頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五15.在測量表格上擊右鍵→選擇“表格設(shè)置”→選擇所需顯示和打印的項目→在任務(wù)欄擊“打印”按鈕→選擇所需打印的內(nèi)容→擊“確定”打印相應(yīng)內(nèi)容。

16.關(guān)閉乙炔鋼瓶總閥，燒去管路中余氣，待火焰熄滅后按空壓機“放水閥”放水→關(guān)閉空壓機“工作開關(guān)”→1~2分鐘后關(guān)閉“風(fēng)機開關(guān)”。第56頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五17.退出AAWin操作軟件→關(guān)閉TAS-986主機電源→關(guān)閉打印機、計算機、穩(wěn)壓器電源。

18.整理實驗室衛(wèi)生、檢查實驗室水、氣、電安全。第57頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五附二GGX-Ⅱ型原子吸收分光光度計操作規(guī)程1.開機前準備⑴將主機各操作鈕置于適當(dāng)位置；⑵安裝空心陰極燈。2.開機⑴依次開穩(wěn)壓器、總電源、調(diào)燈電流后預(yù)熱15～20分鐘；⑵選擇分析線及狹縫寬度后，調(diào)燈及燃燒器的位置，調(diào)負高壓，用“狀態(tài)檢查（工作選擇）”檢查負高壓與±15V電源是否正常。第58頁，共65頁，2023年，2月20日，星期五3.點火⑴關(guān)緊主機上各氣體調(diào)節(jié)針閥，將“空氣-笑氣”鈕旋至“空氣”，開排廢氣裝置；

⑵開空壓機，調(diào)空氣輸入壓為2～3kg·cm-2；⑶打開助燃氣針閥，開大至限壓開關(guān)被啟動后，調(diào)助燃氣流量；

⑷依次打開乙炔鋼瓶總閥、分閥，調(diào)節(jié)乙炔輸出壓力0.8kg·cm-2，調(diào)燃氣流量后點火。

4.測定

依次從低到高濃度測定標液和樣液（最佳條件選擇方法見說明