白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)

白細(xì)胞抗原系統(tǒng)檢測(cè)第1頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一目錄第一節(jié)HLA血清學(xué)檢測(cè)HLA抗原檢測(cè)HLA抗體檢測(cè)第二節(jié)HLA細(xì)胞學(xué)檢測(cè)第三節(jié)HLA分子生物學(xué)檢測(cè)HLA的分子生物學(xué)檢測(cè)方法HLA常見(jiàn)基因分型方法比較HLA分型模棱兩可結(jié)果的原因及其對(duì)策第四節(jié)粒細(xì)胞抗原抗體檢測(cè)第2頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一第一節(jié)HLA血清學(xué)檢測(cè)第3頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一重點(diǎn)提示HLA抗原檢測(cè)掌握微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)的原理及其影響因素HLA抗體檢測(cè)方法淋巴細(xì)胞毒方法流式細(xì)胞儀方法ELISA方法Luminex檢測(cè)技術(shù)掌握不同方法的原理及其優(yōu)缺點(diǎn)第4頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)HLA抗原的血清學(xué)分型方法用一系列已知的抗HLA標(biāo)準(zhǔn)分型血清來(lái)檢測(cè)未知淋巴細(xì)胞表面的HLA抗原型別微量淋巴細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)原理基于抗原抗體反應(yīng)抗原抗體免疫復(fù)合物在補(bǔ)體的作用破壞細(xì)胞膜利用染料或其它方法鑒定和區(qū)分死活細(xì)胞計(jì)分法：NIH計(jì)分法第5頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一HLA抗血清的來(lái)源

HLA抗體血清來(lái)源同種免疫刺激產(chǎn)生HLA同種抗體HLA抗原免疫刺激動(dòng)物雜交瘤技術(shù)人群存在的天然抗體第6頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)的影響因素

HLA抗血清抗血清來(lái)源和抗體種類、抗血清效價(jià)、抗血清特性、抗血清質(zhì)量淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞活性、淋巴細(xì)胞純度、淋巴細(xì)胞數(shù)量、淋巴細(xì)胞上抗原表達(dá)異常孵育時(shí)間和溫度補(bǔ)體活性染色和固定時(shí)間第7頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一血清學(xué)抗原分型方法評(píng)價(jià)

血清學(xué)方法抗原分型檢測(cè)HLA-Ⅰ類和Ⅱ類抗原檢測(cè)HLA-Ⅰ類抗原相對(duì)容易檢測(cè)HLA-Ⅱ類抗原需要分離和純化Ｂ淋巴細(xì)胞易受多種因素影響其錯(cuò)誤率相對(duì)較高HLA血清學(xué)某一座位上只能檢測(cè)到一個(gè)抗原，而基因分型存在兩個(gè)不同等位基因，應(yīng)考慮到無(wú)效等位基因第8頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一HLA抗體檢測(cè)補(bǔ)體依賴的淋巴細(xì)胞毒方法（CDC）采用淋巴細(xì)胞作為靶細(xì)胞抗原易受多種因素影響，檢測(cè)敏感性最低ELISA方法ELISA方法能檢測(cè)HLA-I和HLA-II抗體流式細(xì)胞術(shù)采用淋巴細(xì)胞作為靶細(xì)胞抗原結(jié)合熒光檢測(cè)技術(shù)特點(diǎn)Luminex檢測(cè)技術(shù)結(jié)合熒光流式細(xì)胞儀和免疫標(biāo)記技術(shù)可區(qū)分HLA-I和HLA-II抗體可鑒定抗體的屬性和強(qiáng)度第9頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一HLA抗體檢測(cè)Luminex檢測(cè)技術(shù)

以包被抗原的微球磁珠作為靶細(xì)胞每種磁珠上包被一種抗原多種磁珠可以在同一體系內(nèi)反應(yīng)待測(cè)血清與磁珠孵育存在HLA抗體時(shí)，形成抗原-抗體復(fù)合物加入熒光標(biāo)記的抗人IgG抗體形成抗原-抗體-熒光標(biāo)記抗體復(fù)合物L(fēng)uminex儀測(cè)定微球磁珠上的熒光值判定HLA抗體的強(qiáng)度和特異性微球磁珠熒光值大小每種磁珠的反應(yīng)特性第10頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一第二節(jié)HLA細(xì)胞學(xué)檢測(cè)第11頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一重點(diǎn)提示掌握下列方法的基本原理及其應(yīng)用混合細(xì)胞培養(yǎng)方法（mixedlymphocyteculture，MLC）純合分型細(xì)胞（homozygotetypingcell,HTC）預(yù)致敏淋巴細(xì)胞試驗(yàn)（primedlymphocytetest,PLT）第12頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（MLC）二個(gè)無(wú)關(guān)個(gè)體的淋巴細(xì)胞在體外混合一起培養(yǎng)二者組織相容性抗原不同，互相刺激對(duì)方的T細(xì)胞發(fā)生增殖增殖反應(yīng)強(qiáng)度與組織相容性抗原的差異程度成正比轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞體積增大、核內(nèi)DNA和RNA合成增加MLC用于HLA-D抗原分型實(shí)體器官移植前的快速相容性檢測(cè)分為雙向MLC和單向MLC第13頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)雙向MLC雙方的淋巴細(xì)胞互相刺激而增生、轉(zhuǎn)化，即雙方的淋巴細(xì)胞既是刺激細(xì)胞，又是反應(yīng)細(xì)胞抗原相同或相容，則刺激作用很小，細(xì)胞無(wú)變化抗原不相容，則刺激作用大，細(xì)胞被活化并產(chǎn)生增殖單向MLC一方的淋巴細(xì)胞用X線照射或用絲裂霉素C處理喪失增殖反應(yīng)能力而仍保留其抗原刺激效應(yīng)MLC只有一方淋巴細(xì)胞發(fā)生增殖反應(yīng)，故可了解單一個(gè)體淋巴細(xì)胞的刺激強(qiáng)度和應(yīng)答程度第14頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一純合細(xì)胞分型方法純合細(xì)胞分型方法（也稱為陰性分型）已知HLA-Dw型別的經(jīng)滅活的純合子細(xì)胞作為刺激細(xì)胞待檢細(xì)胞作為反應(yīng)細(xì)胞兩種細(xì)胞進(jìn)行單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)若不發(fā)生或僅發(fā)生弱的增殖反應(yīng)表明受檢細(xì)胞具有與純合子分型細(xì)胞相同的HLA-Dw型別，它可能為特定HLA-Dw型的純合子或雜合子發(fā)生增殖反應(yīng)表明受檢細(xì)胞不具有純合子細(xì)胞擁有的HLA-Dw型別第15頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一預(yù)致敏淋巴細(xì)胞（PL）預(yù)致敏淋巴細(xì)胞（PL）僅對(duì)一種單體型具有識(shí)別增殖能力，而處于靜止?fàn)顟B(tài)的小淋巴細(xì)胞作為應(yīng)答細(xì)胞參與了初次MLC反應(yīng)，經(jīng)過(guò)增殖后又回到小淋巴細(xì)胞遇到相應(yīng)抗原刺激后，迅速發(fā)生淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化和增殖第16頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一預(yù)致敏淋巴細(xì)胞試驗(yàn)預(yù)致敏淋巴細(xì)胞試驗(yàn)（又稱為陽(yáng)性分型法)PL細(xì)胞作為已知的分型細(xì)胞待檢淋巴細(xì)胞作為刺激細(xì)胞待檢淋巴細(xì)胞分別與一系列的預(yù)致敏淋巴細(xì)胞進(jìn)行單向MLC待檢細(xì)胞與預(yù)致敏淋巴細(xì)胞預(yù)先識(shí)別的抗原相同，預(yù)致敏淋巴細(xì)胞會(huì)迅速增殖預(yù)致敏淋巴細(xì)胞分型試驗(yàn)是用陽(yáng)性反應(yīng)作為判定標(biāo)準(zhǔn)第17頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一第三節(jié)HLA分子生物學(xué)檢測(cè)

第18頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一重點(diǎn)提示HLA的分子生物學(xué)檢測(cè)方法掌握PCR-SSP、PCR-SSO、Luminex檢測(cè)技術(shù)、基因芯片、PCR-SBT的基本原理掌握HLA常見(jiàn)基因分型方法的特點(diǎn)及其適用范圍HLA高分辨分型中模棱兩可結(jié)果的原因及其對(duì)策明確其形成原因掌握4種常見(jiàn)方法的原理及其應(yīng)用第19頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一HLA分子生物學(xué)檢測(cè)HLA基因分型技術(shù)主要方法PCR序列特異性引物（PCRsequencespecificprimer,PCR-SSP）PCR序列特異性寡核苷酸探針技術(shù)（PCRsequencespecificoligonucleotideprobe,PCR-SSO）Luminex檢測(cè)技術(shù)基因芯片核苷酸序列測(cè)定法（PCRsequencebased-typing，PCR-SBT）第20頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一PCR序列特異性引物PCR序列特異性引物（PCR-SSP）根據(jù)HLA等位基因核苷酸堿基序列的差異性，設(shè)計(jì)出一系列特異性引物引物3′端最后一個(gè)堿基是否與其等位基因DNA模板配對(duì)起決定作用根據(jù)多對(duì)引物擴(kuò)增的結(jié)果可以指定HLA基因型方法操作簡(jiǎn)單，快速耗時(shí)較短，結(jié)果判斷簡(jiǎn)便有低分辨和高分辨分型試劑，為實(shí)驗(yàn)室常用的方法之一可能出現(xiàn)假陽(yáng)性帶或漏帶現(xiàn)象某些罕見(jiàn)的HLA等位基因存在錯(cuò)誤結(jié)果第21頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一PCR序列特異性寡核苷酸探針PCR序列特異性寡核苷酸探針(PCR-SSO)利用核酸互補(bǔ)的雜交技術(shù)特異性引物擴(kuò)增目的DNA片段PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與特異性探針進(jìn)行雜交酶促反應(yīng)體系或顯色（影）溶液進(jìn)行顯色無(wú)顏色顯示基因片段與探針不互補(bǔ)顯示顏色基因片段與探針互補(bǔ)根據(jù)多個(gè)探針雜交信號(hào)結(jié)果進(jìn)行HLA分型指定第22頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一Luminex檢測(cè)技術(shù)Luminex檢測(cè)技術(shù)原理是利用核酸互補(bǔ)的雜交技術(shù)每一種微球上只固定一種已知序列的特異性探針利用特異性引物擴(kuò)增目的DNA片段PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與多種微球在同一孔內(nèi)進(jìn)行特異性雜交雜交后加入熒光顯色劑Luminex檢測(cè)儀綠色激光束檢測(cè)雜交信號(hào)Luminex檢測(cè)儀紅色激光束區(qū)分探針的種類擴(kuò)增基因片段與探針不互補(bǔ)，在微球上無(wú)熒光顯示擴(kuò)增基因片段與探針互補(bǔ)，在微球上有熒光顯示根據(jù)熒光值強(qiáng)度大小可以判定待測(cè)片段是否與探針互補(bǔ)第23頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一基因芯片技術(shù)基因芯片技術(shù)技術(shù)原理是根據(jù)核酸互補(bǔ)的雜交技術(shù)，并結(jié)合激光共聚焦熒光檢測(cè)系統(tǒng)特性在特定載體（玻璃、硅等）上高密度有序地排列特定寡核苷酸片段作為探針對(duì)待檢標(biāo)本HLA基因片段進(jìn)行擴(kuò)增并熒光標(biāo)記將待測(cè)標(biāo)記的HLA基因片段與特定探針進(jìn)行雜交基因片段與探針不互補(bǔ)，該探針位置無(wú)熒光顯示基因片段與探針互補(bǔ)，該探針位置可顯示熒光通過(guò)激光共聚焦熒光檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)芯片進(jìn)行掃描，根據(jù)熒光值強(qiáng)度大小可以判定待測(cè)片段是否與探針互補(bǔ)第24頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一核苷酸序列測(cè)定法核苷酸序列測(cè)定法（PCR-SBT）擴(kuò)增目的DNA片段對(duì)擴(kuò)增片段進(jìn)行測(cè)序分析指定HLA等位基因型別根據(jù)測(cè)序序列中核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)堿基情況，與已知可能的等位基因的序列進(jìn)行比較直接檢測(cè)基因的核苷酸序列屬于高分辨方法，結(jié)果準(zhǔn)確性最高直接雙鏈測(cè)序過(guò)程中存在模棱兩可基因型結(jié)果第25頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一新一代測(cè)序技術(shù)新一代測(cè)序（NGS）技術(shù)市場(chǎng)上有多種技術(shù)平臺(tái)，其測(cè)序原理上存在差異NGS已應(yīng)用于HLA分型其關(guān)鍵在于如何系統(tǒng)建立好HLA位點(diǎn)的DNA文庫(kù)片段擴(kuò)增和測(cè)序步驟則取決于所用的技術(shù)平臺(tái)應(yīng)用于HLA-I和HLA-II位點(diǎn)分型單鏈測(cè)序結(jié)果NGS進(jìn)行HLA分型存在一定的偏差第26頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一HLA常見(jiàn)基因分型方法比較第27頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一模棱兩可結(jié)果產(chǎn)生的原因PCR-SSP的模棱兩可結(jié)果PCR-SSP方法針對(duì)同一座位上不同等位基因堿基多態(tài)性位點(diǎn)設(shè)計(jì)引物引物可特異性針對(duì)單一或多個(gè)等位基因只擴(kuò)增某特定的單一等位基因可直接指定特定單一等位基因引物對(duì)常擴(kuò)增HLA某一座位數(shù)個(gè)等位基因存在多種可能性PCR-SSP方法可產(chǎn)生一定的模棱兩可分型結(jié)果采用不同引物對(duì)的組合方式來(lái)指定或排除某個(gè)等位基因等位基因數(shù)量較多而且引物大多針對(duì)多個(gè)等位基因第28頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一模棱兩可結(jié)果產(chǎn)生的原因PCR-SSO的模棱兩可結(jié)果探針的序列決定其特異性部分探針只與某一等位基因序列互補(bǔ)雜交標(biāo)本與該探針雜交可明確無(wú)誤地指定相應(yīng)特定等位基因絕大多數(shù)探針能夠與多種等位基因序列互補(bǔ)雜交無(wú)法單純依靠這種探針進(jìn)行等位基因指定探針?lè)磻?yīng)格局表通過(guò)數(shù)理邏輯關(guān)系指定HLA基因型大量探針往往針對(duì)多個(gè)等位基因，錯(cuò)綜復(fù)雜的雜交格局，導(dǎo)致產(chǎn)生模棱兩可的分型結(jié)果第29頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一模棱兩可結(jié)果產(chǎn)生的原因PCR-SBT的模棱兩可結(jié)果雙鏈測(cè)序反應(yīng)得到的序列是兩個(gè)等位基因序列的組合測(cè)序獲得的序列與多種等位基因的組合序列完全匹配有三種情況可能引起模棱兩可的結(jié)果測(cè)序區(qū)域未包括這些等位基因核苷酸的區(qū)分點(diǎn)A*74:01和A*74:02僅在第1號(hào)外顯子存在差別(第67位)大多數(shù)等位基因未測(cè)定全部外顯子序列HLA-A*02:08、HLA-A*03:06缺乏第4外顯子序列多種等位基因組合在測(cè)序區(qū)域內(nèi)具有相同的雜合序列DRB1*03:01:01G+DRB1*13:32、DRB1*03:06+DRB1*13:93和DRB1*03:12+DRB1*13:40的組合在2號(hào)外顯子表現(xiàn)為完全相同的雜合序列第30頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一模棱兩可結(jié)果區(qū)分的策略模棱兩可結(jié)果區(qū)分的方法常見(jiàn)及確認(rèn)等位基因原則（Commonallelesandwelldocumentedalleles，CWD）結(jié)合多種方法結(jié)果進(jìn)行綜合判斷改用其它廠家的試劑增加測(cè)序的范圍或雜交的探針數(shù)采用單鏈DNA抽提技術(shù)采用單鏈擴(kuò)增技術(shù)采用組特異性測(cè)序引物技術(shù)克隆轉(zhuǎn)染后形成單鏈后檢測(cè)第31頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一CWD原則

HLA等位基因定義為三大類常見(jiàn)等位基因（Commonalleles）指那些在參考群體中頻率大于0.001的等位基因確認(rèn)等位基因（Well-documentedalleles）至少在五個(gè)獨(dú)立非親緣個(gè)體中或者三個(gè)獨(dú)立非親緣個(gè)體中并伴有特定的單體型被檢測(cè)到的等位基因罕見(jiàn)等位基因（Rarealleles)除常見(jiàn)等位基因和確認(rèn)等位基因以外的所有等位基因它們的頻率很低第32頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一CWD原則

CWD原則CWD原則分型中將常見(jiàn)等位基因和確認(rèn)等位基因合并為CWD,當(dāng)模棱兩可的等位基因組合中出現(xiàn)CWD等位基因可能需要進(jìn)一步區(qū)分，而出現(xiàn)罕見(jiàn)等位基因組合，其臨床分型中實(shí)際意義有限，可予以排除第33頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一單鏈DNA抽提技術(shù)單鏈DNA抽提技術(shù)將個(gè)體兩個(gè)等位基因進(jìn)行分離根據(jù)等位基因序列設(shè)計(jì)生物素標(biāo)記的特異性探針（僅與某一等位基因互補(bǔ)）探針與標(biāo)本基因組DNA進(jìn)行雜交反應(yīng)雜交后將形成單一等位基因DNA/特異性探針復(fù)合物加入鏈親和素標(biāo)記磁珠，將形成單一等位基因DNA/特異性探針/磁珠復(fù)合物洗滌后溶液中只含有單一等位基因DNA/特異性探針/磁珠復(fù)合物第34頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一單鏈DNA抽提技術(shù)單鏈分離技術(shù)探針結(jié)合雜交互補(bǔ)選擇性獲取單體型商業(yè)產(chǎn)品HLA-C*01:02Biotin-CTCCATgAAgTATTTCTTCA圖為單鏈抽提C*01:02后測(cè)序的一段序列第35頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一單鏈擴(kuò)增技術(shù)該技術(shù)原理類似于PCR-SSP選擇合適的引物只擴(kuò)增個(gè)體兩個(gè)等位基因的特定等位基因比對(duì)序列設(shè)計(jì)特異性引物重點(diǎn)在于引物序列TGGCGCCCCGAACCCTCG

圖為單鏈擴(kuò)增A*24:02后測(cè)序的一段序列第36頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一組特異性測(cè)序引物技術(shù)

該技術(shù)原理利用特異性引物進(jìn)行測(cè)序反應(yīng)在測(cè)序過(guò)程中設(shè)計(jì)特異性的測(cè)序引物該引物只能與某一個(gè)等位基因的序列互補(bǔ)該引物測(cè)序?qū)⒌玫脚c引物序列互補(bǔ)的某個(gè)特定等位基因的序列A-98TCACTCCATGAGGTATTTCTT

A-98ACACTCCATGAGGTATTTCTA

圖為A*02:01,11:01用特異性引物測(cè)序后的比較第37頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一第四節(jié)粒細(xì)胞抗原抗體檢測(cè)第38頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一重點(diǎn)提示掌握粒細(xì)胞抗原、抗體檢測(cè)血清學(xué)診斷方法的原理粒細(xì)胞凝集試驗(yàn)粒細(xì)胞免疫熒光試驗(yàn)流式細(xì)胞技術(shù)單克隆抗體粒細(xì)胞抗原捕獲試驗(yàn)ELISA方法掌握HNA系統(tǒng)基因分型技術(shù)原理及其適應(yīng)范圍PCR限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性PCR序列特異性引物PCR直接測(cè)序法多重SNaPshot技術(shù)第39頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一粒細(xì)胞抗原、抗體檢測(cè)診斷方法粒細(xì)胞凝集試驗(yàn)（GAT方法）分離新鮮的粒細(xì)胞在Terasaki微量板上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)待測(cè)粒細(xì)胞與標(biāo)準(zhǔn)抗血清反應(yīng)后或標(biāo)準(zhǔn)粒細(xì)胞與待檢血清反應(yīng)后在顯微鏡下觀察粒細(xì)胞凝集情況依據(jù)細(xì)胞凝集情況來(lái)判定抗原或抗體的特性早期建立的方法，操作簡(jiǎn)單方法靈敏度、特異性都不高HLA抗體和某些高滴度的免疫復(fù)合物會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果第40頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一粒細(xì)胞抗原、抗體檢測(cè)診斷方法粒細(xì)胞免疫熒光試驗(yàn)（GIFT）直接法用于檢測(cè)粒細(xì)胞抗原熒光標(biāo)記的粒細(xì)胞抗體與待檢粒細(xì)胞反應(yīng)有相應(yīng)的抗原存在時(shí)可形成抗原抗體反應(yīng)通過(guò)熒光顯微鏡檢測(cè)熒光的情況間接法用于檢測(cè)粒細(xì)胞抗體或抗原分離出新鮮的粒細(xì)胞與待檢血清反應(yīng)存在相應(yīng)抗體時(shí)可形成抗原抗體結(jié)合物洗滌后加入熒光標(biāo)記的抗人IgG反應(yīng)，繼續(xù)形成抗原-抗體-熒光標(biāo)記抗人IgG結(jié)合物，洗滌后通過(guò)熒光顯微鏡檢測(cè)熒光的情況敏感性、特異性均優(yōu)于GAT法需要熒光顯微鏡，實(shí)驗(yàn)干擾因素較多第41頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一粒細(xì)胞抗原、抗體檢測(cè)診斷方法流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)粒細(xì)胞抗原或抗體以抗體檢測(cè)為例闡述其原理將粒細(xì)胞與待檢血清進(jìn)行反應(yīng)存在相應(yīng)抗體時(shí)可形成抗原抗體結(jié)合物洗滌后加入熒光標(biāo)記的抗人IgG-Fc、IgM-Fc繼續(xù)形成抗原-待檢抗體-熒光標(biāo)記抗人Ig結(jié)合物通過(guò)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)熒光的情況該方法敏感性、特異性較好第42頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，2月20日，星期一粒細(xì)胞抗原、抗體檢測(cè)診斷方法單克隆抗體粒細(xì)胞抗原捕獲試驗(yàn)(

MAIGA方法)粒細(xì)胞與待檢血清反應(yīng)，存在相應(yīng)抗體可形成抗原抗體復(fù)合物加入特定的單克隆抗體，形成單克隆抗體-抗原-抗體三聯(lián)復(fù)合物細(xì)胞裂解離心獲取上清液（含三聯(lián)復(fù)合物），將其加入到包被特定抗體的ELISA板微孔內(nèi)反應(yīng)，可形成包被抗體-單克隆抗體-粒細(xì)胞抗原-待測(cè)抗體復(fù)合物洗滌后加入酶標(biāo)記的抗人IgG抗體形成包被抗體-單克隆抗體-粒細(xì)胞抗原-待測(cè)抗體-酶標(biāo)抗體復(fù)合物顯色劑比色分析，根據(jù)顯色程度判定抗體情況第43頁(yè)，共46頁(yè)，2023年，