凝膠成像及QuantityOne中文操作說明

凝膠成像及QuantityOne中文操作一章簡(jiǎn)介生物學(xué)的研究者天天都要打交道的基本技術(shù)。電泳之后的信息處理與電泳本分析軟件中功能最強(qiáng)大，自動(dòng)化程度最高的軟件。這個(gè)軟件的最新版本可以在Bio-Rad的網(wǎng)()免費(fèi)下Analysis)，差顯分析(DifferentialDisplayAnalysis)，克隆計(jì)數(shù)(ColonyCountingAnalysis)等，此antityOnewindows印等操作tch分析VoView圖像縮放、三維視圖、看光An密度值等操作alysisImag圖像旋轉(zhuǎn)、翻轉(zhuǎn)、裁切等操Ree作portsLane泳道分析WiwBand條帶分析HeQuickGuideBandAnalysis)，差顯分析(DifferentialDisplayAnalysis)，克隆計(jì)數(shù)部分。圖像獲取就是通過軟件控制掃描儀(GS-800、PharosFX等)或凝膠成像系統(tǒng)(GelDoc、ChemiDoc、VersaDoc等)，圖像預(yù)處理就是將掃描或拍照獲得的原始圖像進(jìn)行初步處理，以便更好地進(jìn)以分為定量分析、條帶分析、克隆計(jì)數(shù)、差異(聚類)分析等等。不管如何分析，最終我們都必須通過軟件的輸出功能，得到我們想要的結(jié)第二章圖像獲取y外透射平臺(tái)(UVTransilluminator)的中間，關(guān)上暗箱門，然后按下面板上的“TransUV”按鈕，并置于位置“I”處。按下面板上的“TransWhite”按鈕，并將濾光片選擇桿置于位置“I”處。：IRIS(光圈)，ZOOM(縮放)，F(xiàn)OCUS(聚焦)，您可在軟件上直接c調(diào)節(jié)IRIS至合適大小(一般情況下盡量選擇小光圈，因?yàn)樾」馊吧畲螅瑘D像更清晰)④按“AutoExpose”；如是，單擊AutoExpose,系統(tǒng)將自動(dòng)選擇曝光時(shí)間成像，如不滿意，單擊ManualExpose，并輸入曝光時(shí)間(秒)，圖像滿意后保存,在自動(dòng)曝光期間，圖象會(huì)持續(xù)的輸入到CCDAnalyze的窗口來顯示捕獲的圖象，該圖象具有默認(rèn)名稱，具有日期、時(shí)間及用戶名(如果已知的話)等信息。三章圖像分析的用戶手冊(cè)。一．定量分析(VolumnAnalysis)點(diǎn)、大型芯片等圖像的定量。這種定量的方法可以扣除背的濃度，但它不能計(jì)算分子量，也不能進(jìn)行條帶匹配和相Volume內(nèi)所有像素信號(hào)強(qiáng)度的總和×像素面積果，常用的結(jié)果是相對(duì)濃度和絕對(duì)濃度(須提供標(biāo)準(zhǔn)品)。具體的操作方法如下：iff行分析處理)ZoomBox放大觀察UStdStd度標(biāo)準(zhǔn)樣品，即定量標(biāo)準(zhǔn)，需在濃度concentration一欄輸入該樣品的濃度)。除背景后的定量值，如有濃度標(biāo)準(zhǔn)樣品(Std)，軟件可報(bào)告Concentration絕對(duì)濃度。參數(shù)選好后，按二．條帶分析(BandAnalysis)平均光密度和條帶寬度對(duì)每個(gè)條帶進(jìn)行模式化定量。這種分析方式雖然不如定量分析來得方便，但這樣可以實(shí)現(xiàn)非常復(fù)雜的電泳分析，滿足各種不同的結(jié)果需要。這種方式的最大優(yōu)點(diǎn)在于它可以完全拋棄人為主用條帶分析的方法進(jìn)行定量的結(jié)果叫TraceQuantity(TraceQty)，計(jì)算方法是：首先軟件自動(dòng)分布曲線，然后每個(gè)具體條帶的定量值是平均光密度uantity下面介紹用此功能對(duì)泳道內(nèi)的所有條帶進(jìn)行分子量確定，相對(duì)濃度分析ff4．確定泳道(lane),并對(duì)泳道進(jìn)行各種調(diào)整(實(shí)際實(shí)驗(yàn)中泳道往往不是垂直的而出現(xiàn)各種變形)。AllLaneOn”，在“RollingDiskSize”中填入適當(dāng)?shù)臄?shù)值。編輯工具(如上圖)入NewStandard建立新的分子量標(biāo)準(zhǔn)，軟件可以選擇標(biāo)準(zhǔn)單位是MW(蛋白質(zhì))還是BP(核酸)等(左下圖)。在Protein-Standard對(duì)話框中輸入分子量數(shù)值，完成后單擊賦值圖標(biāo)(右下圖)，回到圖象文件子量(紅顏色標(biāo)記)，標(biāo)準(zhǔn)分子量為藍(lán)色標(biāo)記。下圖)，軟件將報(bào)告結(jié)果(右下圖)，在報(bào)告的右下腳有一報(bào)告輸出工具，