酶的特異性及影響酶活性的因素

生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)主講：劉連芬

聊城生命科學(xué)學(xué)院

E-Mail：liulianfen@酶的特異性及影響酶活性的因素生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)原理二、主要實(shí)驗(yàn)儀器三、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)小結(jié)酶的特異性及影響酶活性的因素生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit1、酶的專一性：酶是一種具有催化功能的特殊蛋白質(zhì)(傳統(tǒng)酶的概念),也常稱為生物催化劑.它與一般催化劑的最主要區(qū)別就是具有高度的特異性,即專一性.所謂的特異性是指一種酶只能對(duì)一種化合物或一類化合物(其結(jié)構(gòu)中具有相同的化學(xué)鍵)起一定的催化作用,而不能對(duì)別的物質(zhì)起催化作用。根據(jù)酶對(duì)底物的選擇程度不同,可分為絕對(duì)專一性、相對(duì)專一性、立體異構(gòu)專一性.唾液淀粉酶屬于相對(duì)專一性酶，它只能隨機(jī)作用于淀粉內(nèi)部的α—1,4---糖苷鍵,使其分子迅速斷裂成較短的鏈—糊精,糊精分子量遞減(淀粉→大分子糊精→中分子糊精→小分子糊精→簡(jiǎn)單分子糊精→麥芽糖和α—糊精(含α—1,6—糖苷鍵的短鏈聚糖,平均分子量為8個(gè)殘基),唾液淀粉酶能催化淀粉水解生成有還原性的糖，但不能催化蔗糖的水解.可用Benedict試劑檢查還原性糖。

酶的特異性及影響酶活性的因素實(shí)驗(yàn)原理生命科學(xué)學(xué)院二、酶的專一性生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素管號(hào)

12341%淀粉溶液4滴4滴2%蔗糖溶液4滴4滴稀釋唾液(ml)1ml1ml蒸餾水

(ml)1ml1ml37℃恒溫水浴15min

Benedict試劑(ml)1ml1ml1ml1ml沸水浴2-5min

現(xiàn)象

生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)原理生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素

2、溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響：酶的催化作用受溫度影響很大,與一般化學(xué)反應(yīng)一樣,提高溫度可增加反應(yīng)速度,通常溫度每升高10℃,反應(yīng)速度加快一倍左右.但酶是蛋白質(zhì),溫度過(guò)高可引起變性,使酶失活.因此反應(yīng)速度達(dá)到最大值以后,隨溫度的升高,反應(yīng)速度反而逐漸下降,以至完全停止反應(yīng).反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溫度稱該酶作用的最適溫度.大多數(shù)動(dòng)物酶的最適溫度為37-40℃,植物酶的最適溫度為50-60℃.但一種酶的最適溫度不是完全固定的,它與作用的時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān),反應(yīng)時(shí)間增長(zhǎng)時(shí),最適溫度向數(shù)值較低的方向移動(dòng)。最適溫度不是酶的特征性物理常數(shù).酶對(duì)溫度的穩(wěn)定性與其存在形式有關(guān).大多數(shù)酶在干燥的固體狀態(tài)比較穩(wěn)定,能在室溫下保存數(shù)月至一年,溶液中的酶,易被微生物污染,常難長(zhǎng)期保存,在高溫的情況下,如100℃即可失活.低溫降低或抑制酶的活性,但不能使酶失活。生命科學(xué)學(xué)院溫度對(duì)酶活力的影響生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素溫度管號(hào)

1234稀釋唾液(ml)

1ml37℃(10min)1ml0℃(10min)1ml0℃(10min)1ml100℃(10min)0.2%淀粉溶液(ml)1ml1ml1ml1ml37℃3-5min0℃3-5min0℃3-5min37℃3-5minKI-I（滴）3-5滴3-5滴37℃復(fù)溫5min后3-5滴3-5滴現(xiàn)象

依次為“0℃后復(fù)溫37℃、37℃

生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素依次為：0℃后復(fù)溫37℃、37℃、0℃、100℃后復(fù)溫37℃（沸水時(shí)間短）生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)酶的特異性及影響酶活性的因素溫度環(huán)境后在室溫下加酶加酶和淀粉后入環(huán)境生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)酶的特異性及影響酶活性的因素酶液的提取與稀釋：漱口后將唾液吐入量筒內(nèi)收集約10ml加水至100ml，取0.2%的淀粉1滴，唾液1滴混勻，加KI-I檢測(cè)，控制酶的濃度使反應(yīng)約在4-5分鐘內(nèi)完成。

淀粉→大分子糊精-→中分子→小分子→簡(jiǎn)單分子→麥芽糖和α-糊精KI-I藍(lán)藍(lán)紫褐紅不呈色不呈色

生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)原理3、

激活劑和抑制劑對(duì)酶活力的影響：酶的活性常受某些物質(zhì)的影響，有些物質(zhì)能增加酶的活性，稱為酶的激活劑；另一些物質(zhì)則會(huì)降低酶的活性，稱為酶的抑制劑。例如CI-為唾液淀粉酶的特異性激活劑，Cu2+則為該酶的特異性抑制劑。通常情況下，很少量的激活劑或抑制劑就會(huì)影響酶的活性，但是激活劑和抑制劑不是絕對(duì)的，有些物質(zhì)對(duì)不同的酶所起的作用不同，如Mg2+是脫羧酶烯醇化酶的激活劑，但是肌球蛋白ATP酶的抑制劑，同一種酶也可因激活劑的濃度不同而作用不同，如CI-在低濃度時(shí)是激活劑，達(dá)三分之一飽和度時(shí)則變?yōu)橐种苿?。生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素生命科學(xué)學(xué)院酶的激活與抑制生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素管號(hào)

12341％NaCI(ml)1ml1%CuSO4(ml)1ml1%Na2SO4(ml)1mlH2O(ml)1ml稀釋唾液(ml)1ml1ml1ml1ml0.1%淀粉(ml)1ml1ml1ml1ml37℃恒溫水浴XminKI-I（滴）3-5滴3-5滴3-5滴3-5滴現(xiàn)象

生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)酶的特異性及影響酶活性的因素依次為：加水、Na2SO4、CuSO4、NaCI生命科學(xué)學(xué)院主要實(shí)驗(yàn)儀器生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)滴瓶移液管細(xì)口瓶恒溫水浴沸水浴酶的特異性及影響酶活性的因素生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit移液管的使用方法⑴看。查看移液管的標(biāo)示的要求。

⑵選。根據(jù)不同需要選用大小合適的移液管。（一次取樣，就近選擇）酶的特異性及影響酶活性的因素生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit⑶潤(rùn)。吸取溶液時(shí)要把吸管用所吸溶液潤(rùn)洗2-3次。⑷移液。：一般用右手的大拇指和中指拿住管頸刻度線上方，把管插入溶液中，左手拿吸耳球，把球內(nèi)空氣排出，把吸耳球的尖端接在管口，慢慢松開左手，使溶液吸入管內(nèi)，當(dāng)液面升到刻度線上方時(shí)，移開吸耳球，立即用右手的食指按住管口，大拇指和中指拿住管刻度線上方，再使管離開液面，管末端仍靠在盛溶液器皿的內(nèi)壁上。略松食指，使液面平穩(wěn)下降，直到溶液的彎月面與刻度標(biāo)線相切。酶的特異性及影響酶活性的因素移液管的使用方法生命科學(xué)學(xué)院生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit移液管的使用方法⑸放液。將管插入接受器中，管尖仍靠在接受器內(nèi)壁，管垂直，并與接收器約呈15度夾角，松開食指，使管內(nèi)液體自然沿壁流下，遺留在管內(nèi)的溶液若標(biāo)有吹的則吹入接收器內(nèi)，若未標(biāo)吹的，停留等待3秒鐘，同時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)移液管。

⑹洗滌、放置。將管洗凈，放在管架上。酶的特異性及影響酶活性的因素生命科學(xué)學(xué)院滴瓶、滴管與細(xì)口瓶生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素1、提出滴頭，排出空氣。2、伸入液面下，吸取液體。3、按量排出液體。4、將剩余液體排出，放松手指，將滴頭自然放入滴瓶?jī)?nèi)生命科學(xué)學(xué)院恒溫水浴生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素1、打開電源2、設(shè)定溫度3、加熱測(cè)溫生命科學(xué)學(xué)院沸水浴生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素生命科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)步驟酶的特異性及影響酶活性的因素一、酶液的提取及稀釋二、酶的特異性三、溫度對(duì)酶促反應(yīng)的影響四、pH對(duì)酶促反應(yīng)的影響五、激活劑及抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)的影響生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)生命科學(xué)學(xué)院四、pH值對(duì)酶活力的影響生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)Exit酶的特異性及影響酶活性的因素pH管號(hào)

5.0稀釋唾液(ml)1