流式細(xì)胞儀在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用

流式細(xì)胞儀在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用第1頁(yè)/共53頁(yè)1342流式細(xì)胞術(shù)的基本原理流式的臨床應(yīng)用邁瑞流式介紹專家對(duì)邁瑞流式的評(píng)價(jià)目錄2第2頁(yè)/共53頁(yè)1342流式細(xì)胞術(shù)的基本原理流式的臨床應(yīng)用邁瑞流式介紹專家對(duì)邁瑞流式的評(píng)價(jià)目錄3第3頁(yè)/共53頁(yè)流式細(xì)胞術(shù)的定義流式細(xì)胞術(shù)是以高能量激光照射高速流動(dòng)狀態(tài)下經(jīng)熒光標(biāo)記的單細(xì)胞（生物顆粒），通過(guò)檢測(cè)產(chǎn)生的散射光和熒光素發(fā)射熒光的強(qiáng)度，從而對(duì)細(xì)胞進(jìn)行定性或者定量檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)對(duì)目的細(xì)胞分析或分選的技術(shù)。4第4頁(yè)/共53頁(yè)傳統(tǒng)流式檢測(cè)流程圖NatRevImmunol.;12(3):191–200.第5頁(yè)/共53頁(yè)FL4FL6FL5(PE-cy7)FL3(PerCP)FL2(PE)FL1(FITC)SS488/10530/30FS488/10585/40670LP785/60491/LP550LP645LP660/20785/60740LP488/10反光鏡tvFL6(APC-cy7)FL4(APC)反光鏡tvtvtvtvtvtvtvFSCSSCFL1FL2FL3FL5流式細(xì)胞儀工作原理模擬圖第6頁(yè)/共53頁(yè)流式細(xì)胞儀與常用檢驗(yàn)儀器的比較項(xiàng)目流式細(xì)胞儀血球儀生化分析儀免疫分析儀測(cè)試對(duì)象細(xì)胞，血清細(xì)胞(測(cè)量設(shè)置全部固定化）血清血清測(cè)試目標(biāo)物理或化學(xué)性質(zhì)（如細(xì)胞大小、內(nèi)部復(fù)雜程度、DNA含量）；小分子物質(zhì)（如抗原，抗體）物理或化學(xué)性質(zhì)（如細(xì)胞大小、內(nèi)部復(fù)雜程度、DNA含量）化學(xué)成分和一些小分子物質(zhì)（如鉀、鈉、鈣、酶）小分子物質(zhì)（如抗原、抗體、激素）測(cè)試原理流式細(xì)胞術(shù)+抗原抗體反應(yīng)流式細(xì)胞術(shù)化學(xué)比色法抗原抗體反應(yīng)計(jì)量百分比或絕對(duì)計(jì)數(shù)（如

%、**個(gè)/uL）；物質(zhì)的量或定性判定（L、UI/L、

陰性、陽(yáng)pmol/m性）百分比和絕對(duì)計(jì)數(shù)（如

%、**個(gè)/L）物質(zhì)的量（mol/L）物質(zhì)的量或定性判定（L、UI/L、

陰性、陽(yáng)pmol/m性）宏觀和微觀測(cè)量宏觀對(duì)象（細(xì)胞）上的微觀物質(zhì)（抗原、看不見(jiàn)、摸不到）測(cè)定宏觀對(duì)象（細(xì)胞）上的宏觀物質(zhì)（物理、復(fù)雜度、含量，看得見(jiàn)、摸得到）測(cè)量微觀物質(zhì)（可溶性成分和一些小分子物質(zhì)，看不見(jiàn)、摸不到）測(cè)量微觀物質(zhì)（小分子物質(zhì)，看不見(jiàn)、摸不到）輸出第7頁(yè)/共53頁(yè)生命科學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用制藥工業(yè)藥物篩選，疫苗研究…生物學(xué)研究遺傳，生殖，微生物，細(xì)胞生物，毒理，分子生物…環(huán)境研究湖泊、海洋生態(tài)研究…臨床診斷、研究血液，腫瘤，藥理，免疫…農(nóng)業(yè)畜牧業(yè)選種，育種…食品工業(yè)第8頁(yè)/共53頁(yè)9flowcytometry+tumorflowcytometry+Transplantflowcytometry+Autoimmunediseasesflowcytometry+leukemiaflowcytometry總結(jié)可以預(yù)計(jì)未來(lái)流式細(xì)胞儀在臨床上的應(yīng)用一定會(huì)有更大的發(fā)展！第9頁(yè)/共53頁(yè)1342流式細(xì)胞術(shù)的基本原理流式的臨床應(yīng)用邁瑞流式介紹專家對(duì)邁瑞流式的評(píng)價(jià)目錄第10頁(yè)/共53頁(yè)流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用11淋巴細(xì)胞亞群分析HLA-B27檢測(cè)白血病免疫分型和MRD急性白血病、

慢性淋巴增生性疾?。–LD)

淋巴瘤造血干細(xì)胞分析造血干細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)；陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）CD55/CD59/FLAER檢測(cè)血小板相關(guān)分析血小板計(jì)數(shù)、血小板免疫表型分析細(xì)胞周期與DNA倍體分析。。。2010年全國(guó)三級(jí)醫(yī)院檢驗(yàn)科流式項(xiàng)目分布第11頁(yè)/共53頁(yè)流式細(xì)胞術(shù)分析淋巴細(xì)胞亞群的原理12第12頁(yè)/共53頁(yè)TBNK淋巴細(xì)胞的檢測(cè)及臨床指導(dǎo)意義診斷與鑒別診斷疾病臨床分期治療效果評(píng)估指導(dǎo)臨床用藥。。。13淋巴細(xì)胞分類百分比和絕對(duì)計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞種類特異性分子標(biāo)記T淋巴細(xì)胞CD3+T輔助/誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞CD3+CD4+T抑制/細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞CD3+CD8+B淋巴細(xì)胞CD3-CD19+NK淋巴細(xì)胞CD3-CD16+CD56+第13頁(yè)/共53頁(yè)TBNK淋巴細(xì)胞檢測(cè)在臨床科室中的應(yīng)用14流式在風(fēng)濕免疫科的應(yīng)用流式在腫瘤的應(yīng)用流式在移植中心的應(yīng)用流式在血液科的應(yīng)用流式在感染科的應(yīng)用流式在心血管內(nèi)科的應(yīng)用流式在其他科室的應(yīng)用流式在健康體檢的應(yīng)用第14頁(yè)/共53頁(yè)15胃癌及其不同臨床分期淋巴細(xì)胞亞群的變化第15頁(yè)/共53頁(yè)16腫瘤術(shù)后淋巴細(xì)胞亞群的變化第16頁(yè)/共53頁(yè)17乙型肝炎患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞亞群變化傳染病信息.2011.24.206-210第17頁(yè)/共53頁(yè)18（WorldJGastroenterol.2008,14:3710-8.）乙型肝炎患者體內(nèi)淋巴細(xì)胞亞群變化第18頁(yè)/共53頁(yè)HIV/AIDS病人的診斷與分期19成人及15歲以上青少年HIV/AIDS的臨床分期及其分期標(biāo)準(zhǔn)臨床分期CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)（個(gè)數(shù)/mm3）HIV抗體檢測(cè)HIV核酸檢測(cè)主要臨床表現(xiàn)一般持續(xù)時(shí)間Ⅰ期6個(gè)月~12個(gè)月ⅠA期＞500或一過(guò)性降低﹣或±＋急性HIV感染綜合征或無(wú)癥狀1周~3周ⅠB期≥500血清陽(yáng)轉(zhuǎn)或＋＋無(wú)癥狀或PGL6個(gè)月~12個(gè)月Ⅱ期6年~7.5年ⅡA期≥350＋＋無(wú)癥狀或A組臨床表現(xiàn)ⅡB期200~349＋＋B組臨床表現(xiàn)Ⅲ期﹤200＋＋C組臨床表現(xiàn)2~3年（WS293-2008艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)）第19頁(yè)/共53頁(yè)肺部疾病的鑒別診斷疾病類型例數(shù)BALF淋巴細(xì)胞亞群（%）CD3+CD4+CD8+CD4/CD8結(jié)節(jié)病1491.8±5.6270.6±11.214.5±8.46.9±3.12IPF1694.5±3.9114.7±3.1278.4±7.920.2±0.04肺結(jié)核674.3±5.6142.3±1.9232.1±1.211.3±0.05肺部腫瘤767.5±10.424.3±5.2435.1±9.620.7±0.1320（中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志.2000,23:214-216）

第20頁(yè)/共53頁(yè)利妥昔單抗治療效果監(jiān)測(cè)21(ArthritisResearch&Therapy2009,11；R131)利妥昔單抗(美羅華)：針對(duì)B細(xì)胞特異性抗原CD20的人-鼠嵌合單克隆抗體用于復(fù)發(fā)或耐藥的CD20陽(yáng)性濾泡性淋巴瘤是首個(gè)以B細(xì)胞為靶標(biāo)治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的藥物外周血B細(xì)胞百分比顯著下降而骨髓B細(xì)胞略下降第21頁(yè)/共53頁(yè)移植病人免疫抑制劑治療指導(dǎo)22A移植前1-2天；B移植后1-2天；C移植后4-5天；D移植后6-8天；E移植后12-16天69例（50例沒(méi)有排斥，19例發(fā)生排斥）CD4在移植后有一個(gè)緩慢的下降過(guò)程CD4如果升高，預(yù)示發(fā)生排斥反應(yīng)，需要調(diào)整免疫抑制藥的治療方案第22頁(yè)/共53頁(yè)（

Neuroimmunomodulation.2014,214:206-12.）

老年人身體狀況評(píng)估23第23頁(yè)/共53頁(yè)（

ClinicalandAppliedImmunologyReviews.2002,2:129–139.）慢性疲勞綜合征與淋巴亞群分析24第24頁(yè)/共53頁(yè)（

MechanismsofAgeingandDe6elopment.1998,100:121–132.）

體育鍛煉對(duì)淋巴亞群的影響25第25頁(yè)/共53頁(yè)臨床需要監(jiān)測(cè)免疫功能的常見(jiàn)疾病26疾病類別內(nèi)容原發(fā)性免疫缺陷B細(xì)胞免疫缺陷、T細(xì)胞免疫缺陷、聯(lián)合免疫缺陷…繼發(fā)性免疫缺陷感染（HIV、CMV…）免疫抑制劑的使用腫瘤代謝性疾病、營(yíng)養(yǎng)不良、衰老自身免疫病SLE、RA…血液腫瘤白血病/淋巴瘤其他手術(shù)（KubyImmunology,7th,2013）第26頁(yè)/共53頁(yè)TBNK淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)27CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APCCD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC第27頁(yè)/共53頁(yè)HLA-B27檢測(cè)與脊柱關(guān)節(jié)病28脊柱關(guān)節(jié)?。⊿pondyloarthritis,SpA）疾病HLA-B27陽(yáng)性率(%)強(qiáng)直性脊椎炎>90Reiter’s綜合癥70~90銀屑病性關(guān)節(jié)炎

50~60急性前葡萄膜炎40~50潰瘍性結(jié)腸炎伴關(guān)節(jié)病5~10正常人群

2~7第28頁(yè)/共53頁(yè)29強(qiáng)直性脊柱炎強(qiáng)直性脊柱炎（AS）定義：

一種慢性、進(jìn)行性和炎性疾病，也是血清陰性脊柱關(guān)節(jié)病（SpA）中最具代表性的疾病。主要累計(jì)骶髂關(guān)節(jié)、脊柱、脊柱軟組織及四肢關(guān)節(jié)，表現(xiàn)為椎間盤纖維環(huán)和纖維環(huán)結(jié)締組織的骨化，椎間動(dòng)關(guān)節(jié)和四肢關(guān)節(jié)滑膜的炎癥和增生，嚴(yán)重者可失去勞動(dòng)能力。實(shí)驗(yàn)室檢查：

CRP升高

血沉加快

HLA-B27陽(yáng)性

類風(fēng)濕因子陰性

第29頁(yè)/共53頁(yè)HLA-B27檢測(cè)與AS輔助診斷301984年修訂的紐約標(biāo)準(zhǔn)；1991年歐洲脊柱關(guān)節(jié)病研究組（ESSG）標(biāo)準(zhǔn)；2009年國(guó)際脊柱關(guān)節(jié)病評(píng)估工作組（ASAS）SpA診斷標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)—增加HLA-B27作為重要的診斷指標(biāo)

RudwaleitM.CurrOpinRheumatol.

2010,22:375-380）第30頁(yè)/共53頁(yè)31HLA-B27檢測(cè)在AS中的診斷價(jià)值臨床意義：

1.輔助疾病早期確診,早期治療; 2.鑒別診斷癥狀相似的疾病; 3.對(duì)高危人群進(jìn)行預(yù)測(cè);HLA-B27+HLA-B27+

的ASHLA-B27-

的AS約5-10%的AS患者為HLA-B27-

HLA-B27陽(yáng)性率在我國(guó)為2~7%，AS的患病率為0.1%，因此大部分HLA-B27+并不患ASAS患者中HLA-B27+達(dá)90~95%第31頁(yè)/共53頁(yè)不同HLA-B27檢測(cè)方法比較32方法檢測(cè)手段優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)MLCT顯微鏡人工觀察經(jīng)濟(jì)，無(wú)需昂貴的設(shè)備操作步驟繁瑣、費(fèi)時(shí)，且易受血清、補(bǔ)體、單抗的品質(zhì)以及操作者主觀因素的影響，常出現(xiàn)誤判漏判。靈敏度、特異性和重復(fù)性均較差。目前，僅少數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用。ELISA酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度敏感性較高，設(shè)備簡(jiǎn)單，可進(jìn)行高通量檢測(cè)操作步驟較多，洗滌步驟復(fù)雜、要求嚴(yán)格，易污染導(dǎo)致假陽(yáng)性，重復(fù)性一般。PCRDNA擴(kuò)增后，電泳紫外分析敏感性、特異性高實(shí)驗(yàn)室常用方法，耗時(shí)長(zhǎng)，需要提取DNA、PCR擴(kuò)增后還需要電泳分析；容易污染，假陽(yáng)性率高：空氣中DNA氣溶膠極易污染擴(kuò)增產(chǎn)物，對(duì)環(huán)境要求高。FCM計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)分析操作步驟簡(jiǎn)單、快捷，敏感性和特異性高

實(shí)驗(yàn)室常用方法，需配備流式細(xì)胞儀；注意抗原/抗體交叉反應(yīng)。第32頁(yè)/共53頁(yè)HLA-B27檢測(cè)的敏感性和特異性33（RudwaleitM,

SieperJ.NatRevRheumatol.

2012,8:262-268）與其他指標(biāo)相比，HLA-B27在SpA鑒別和診斷上具更高的敏感性、特異性ParameterSensitivity%SpecificityInflammatorybackpain38-9576-100Heelpain(enthesitis)16-5289-96Peripheralarthritis26-6291-100Dactylitis12-2796-99Anterioruveitis10-2297-100Psoriasis1-1796IBD2-799PositivefamilyhistoryforAS,reactivearthritis,IBD,psoriasis,anterioruveitis7-3693-100ResponsetoNSAIDs64-7775-85Elevatedacutephasereactants(CRP)38-6967-100HLA-B2783-9691-96MRIofsacroiliacjoints54-9383-100第33頁(yè)/共53頁(yè)HLA-B27檢測(cè)配套試劑34健康人（左）和強(qiáng)直性脊柱炎患者（右）的HLA-B27的檢測(cè)結(jié)果（上：同型對(duì)照，下：測(cè)試樣本）FITC-HLA-B27/PE-HLA-B7雙色第34頁(yè)/共53頁(yè)1342流式細(xì)胞術(shù)的基本原理流式的臨床應(yīng)用邁瑞流式介紹專家對(duì)邁瑞流式的評(píng)價(jià)目錄35第35頁(yè)/共53頁(yè)邁瑞流式細(xì)胞儀及配套試劑36BriCyteE6流式細(xì)胞儀及配套試劑第36頁(yè)/共53頁(yè)人性化設(shè)計(jì)—降低臨床操作難度臨床常規(guī)項(xiàng)目全自動(dòng)軟件雙向LIS連接全中文操作界面37第37頁(yè)/共53頁(yè)1.選擇檢測(cè)項(xiàng)目2.自動(dòng)進(jìn)樣3.報(bào)告智能化自動(dòng)設(shè)計(jì)—自動(dòng)分析軟件第38頁(yè)/共53頁(yè)智能化自動(dòng)檢測(cè)設(shè)計(jì)39自動(dòng)調(diào)節(jié)-準(zhǔn)確、可靠臨床軟件TBNK淋巴細(xì)胞分析HLA-B27檢測(cè)電壓補(bǔ)償質(zhì)控第39頁(yè)/共53頁(yè)自動(dòng)電壓調(diào)節(jié)40第40頁(yè)/共53頁(yè)自動(dòng)補(bǔ)償調(diào)節(jié)418.00第41頁(yè)/共53頁(yè)單平臺(tái)絕對(duì)計(jì)數(shù)無(wú)需內(nèi)標(biāo)微球內(nèi)置高精度流量傳感器，精確測(cè)定樣本流體積，直接計(jì)算絕對(duì)計(jì)數(shù)；采用陶瓷泵負(fù)壓吸樣形成有效“雙閉環(huán)”，穩(wěn)定控制樣本流；42第42頁(yè)/共53頁(yè)智能溫度控制

15℃到32℃無(wú)需調(diào)整光路全封閉防塵設(shè)計(jì)簡(jiǎn)潔穩(wěn)定-光學(xué)系統(tǒng)第43頁(yè)/共53頁(yè)12×75mm試管12×75mm試管1.5mL、2mL微量離心管方便快捷-多種進(jìn)樣方式手動(dòng)上樣系統(tǒng)自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng)44第44頁(yè)/共53頁(yè)機(jī)型BriCyteE6FC500CantoII外形尺寸*(mm，寬×高×深)500×500×550610×978×889910×630×610重量*(Kg)≤55≤85≤146自動(dòng)進(jìn)樣器重量(Kg)≤15--≤22氣源不需要需要需要穩(wěn)壓電源不需要需要需要簡(jiǎn)潔穩(wěn)定第45頁(yè)/共53頁(yè)儀器性能：高分辨率46BriCyteE6檢測(cè)305A八峰粒子PE<50MESFBDFACSCantoII檢測(cè)305A八峰粒子PE<50MESF第46頁(yè)/共53頁(yè)淋巴細(xì)胞亞群分析臨床評(píng)估47北京協(xié)和醫(yī)院北醫(yī)三院四川省人民醫(yī)院臨床評(píng)估病人；42例對(duì)照儀器：BCIFC500臨床評(píng)估病人；30例對(duì)照儀器：BDFACSCantoII臨床評(píng)估病人；34例對(duì)照儀器：BCIFC500第47頁(yè)/共53頁(yè)48HLA-B27檢測(cè)臨床評(píng)估試驗(yàn)儀器對(duì)照儀器合計(jì)陰性陽(yáng)性陰性23023陽(yáng)性077小計(jì)23730結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)結(jié)論陽(yáng)性符合率100.00%≥95%Pass陰性符合率100.00%≥95%Pass總體符合率100.00%≥95%PassKappa1＞0.8Pass試驗(yàn)儀器對(duì)照儀器合計(jì)陰性陽(yáng)性陰性16016陽(yáng)性01717小計(jì)161733結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)結(jié)論陽(yáng)性符合率100.00%≥95%Pass陰性符合率100.00%≥95%Pass總體符合率100.00%≥95%PassKappa1＞0.8Pass北醫(yī)三院四川省人民醫(yī)院臨床評(píng)估病人：30例對(duì)照儀器：BDFACSCantoII臨床評(píng)估病人；33例對(duì)照儀器：BCIFC500第48頁(yè)/共53頁(yè)49項(xiàng)目BriCyteE6傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀軟件界面全中文操作軟件，模塊化設(shè)計(jì)，可見(jiàn)即所得，兩小時(shí)掌握儀器操作英文界面，菜單式設(shè)計(jì)，需要長(zhǎng)時(shí)間熟悉菜單功能位置儀器開(kāi)關(guān)機(jī)1.開(kāi)機(jī)（10分鐘以內(nèi)）；2.關(guān)機(jī)（7分鐘以內(nèi)）1.開(kāi)機(jī)（15分鐘）；2