生物a淀粉酶的固定化與淀粉溶液的檢測(cè)浙科選修

生物a淀粉酶的固定化與淀粉溶液的檢測(cè)浙科選修第1頁(yè)/共15頁(yè)知識(shí)結(jié)構(gòu)二、a-淀粉酶的固定化與淀粉水解作用的檢測(cè)一、固定化技術(shù)基礎(chǔ)知識(shí)第2頁(yè)/共15頁(yè)一、固定化技術(shù)基礎(chǔ)知識(shí)

固定化技術(shù)：利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，包括吸附法、包埋法、化學(xué)結(jié)合法（將酶分子或細(xì)胞相互結(jié)合，或?qū)⑵浣Y(jié)合到載體上）。包埋法化學(xué)結(jié)合法物理吸附法第3頁(yè)/共15頁(yè)細(xì)胞多采用包埋法固定酶更適合采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定化第4頁(yè)/共15頁(yè)反應(yīng)方式

不管是固相柱還是固相懸浮體，回收后，在一定條件下貯存，還可以利用。1.使底物溶液通過(guò)裝有固相酶的柱，柱留出液即為酶催化的產(chǎn)物。2.有時(shí)也可將固相酶或固定化細(xì)胞懸浮于底物溶液中，一定時(shí)間后溶液即成酶催化的產(chǎn)物。第5頁(yè)/共15頁(yè)實(shí)驗(yàn)原理α-淀粉酶β-淀粉酶

糖化淀粉酶

淀粉糊精麥芽糖葡萄糖二、α-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測(cè)

運(yùn)用吸附法將α-淀粉酶的固定在石英砂上。一定濃度的淀粉溶液經(jīng)過(guò)固定化的α-淀粉酶催化后，生成糊精，使流出液加入KI-I2指示液后呈紅色，表明水解產(chǎn)物糊精生產(chǎn)。第6頁(yè)/共15頁(yè)固定化裝置—層析柱第7頁(yè)/共15頁(yè)實(shí)驗(yàn)材料制備

5mmol/LKI-I2溶液稱取0.127g碘和0.83g碘化鉀。加蒸餾水100ml。a-淀粉酶的固定化在燒杯中將5mga-淀粉酶溶于4ml蒸餾水中。再加入5g石英砂，不時(shí)攪拌，30分鐘后裝入層析柱中。用10倍體積的蒸餾水洗滌此層析柱以除去未吸附的游離淀粉酶，流速控制為1ml/min?？扇苄缘矸廴芤喝?0mg可溶性淀粉溶于100ml熱水中，攪拌均勻。第8頁(yè)/共15頁(yè)實(shí)驗(yàn)步驟2.試驗(yàn)后，用10倍體積的蒸餾水洗滌此層析柱，放置在4℃冰箱里，幾天后再重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，看是否有相同結(jié)果。1.將灌注了固定化酶的層析柱放在鐵架臺(tái)上，用滴管滴加淀粉溶液，使淀粉溶液已0.3mL/min的流速過(guò)柱。在流出5mL后接收0.5mL流出液，加入1-2滴KI-I2

溶液，觀察顏色。用水稀釋1倍后再觀察顏色。第9頁(yè)/共15頁(yè)吸附有α-淀粉酶的石英砂淀粉溶液HST層析住第10頁(yè)/共15頁(yè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果12341、2mL水+1~2滴KI-I2溶液、2mL淀粉液+1~2滴KI-I2溶液、2mL淀粉濾液+1~2滴KI-I2溶液、2mL淀粉濾液+1~2滴KI-I2溶液+稀釋1倍第11頁(yè)/共15頁(yè)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)a.控制滴灌流速。0.3mL/min的流速，我們就可以控制每分鐘滴管流出量為每分鐘6滴（6=0.3mL/50uL）。這樣做的目的是控制流速讓淀粉和淀粉酶充分接觸，反應(yīng)。b.顯色。在流出5mL后接取0.5mL過(guò)濾液，然后向試管中加入1-2滴KI-I2溶液。切記，KI-I2溶液不要加入太多，以免碘液顏色覆蓋糊精淀粉反應(yīng)后的顏色。第12頁(yè)/共15頁(yè)謝謝！第13頁(yè)/共15頁(yè)螺螄粉

螺螄粉vzg79wcv無(wú)存恐怕已經(jīng)是確信無(wú)疑的事情了。而回家探親的張老鄉(xiāng)還全然不知道這里已經(jīng)遭受到如此大的災(zāi)難，還在興致勃勃地準(zhǔn)備攜家眷前來(lái)呢。即使聽(tīng)到這里已經(jīng)遭難的消息時(shí)，大概也已經(jīng)是在南下的途中了。如果他一定要來(lái)看個(gè)究竟，到時(shí)候全家人可如何在這個(gè)遭受了如此大劫難的漢口鎮(zhèn)上落腳啊！想到這些，耿老爹不禁潸然淚下。大水退去之后，耿家父子們首先是清理開(kāi)樓梯，然后下得樓來(lái)將門里的淤泥鏟開(kāi)一個(gè)空間。打開(kāi)門后，再將一樓內(nèi)地板上和窗臺(tái)上的淤泥全部清理到門外面的路邊兒上。最后，耿英拿鑰匙好不容易打開(kāi)抽屜上的小鎖子，用力拉開(kāi)抽屜將零用的散碎銀子和銅板全部取出來(lái)，用一小塊布包了拿到樓上清理干凈。只可惜了多半店鋪的糧油米面，全部都給毀掉了。再繼續(xù)清理到小院兒里，發(fā)現(xiàn)驢和平車，以及簡(jiǎn)易車棚早已沒(méi)了蹤影，而且水井已經(jīng)被渾水倒灌，恐怕在短期內(nèi)不能再用了。說(shuō)起來(lái)，耿家父子四人應(yīng)該是很幸運(yùn)的了。無(wú)情的洪水雖然沖走了立下汗馬功勞的毛驢和平車，損失了一樓店鋪內(nèi)所有的糧油米面，但四個(gè)人全都安然無(wú)恙，而且手里還尚有一些銀兩，不至于兩手空空的。此外，二樓上還存有一些糧油米面和一大水缸的飲用水，勉強(qiáng)維持幾日問(wèn)題還不算太大。接下來(lái)的幾天，幸存下來(lái)的一些人開(kāi)始清理街道，而更多的人則已經(jīng)在準(zhǔn)備或開(kāi)始紛紛外逃了。原來(lái)，這次長(zhǎng)江決堤只發(fā)生在北岸，南岸一點(diǎn)兒沒(méi)有受到損害，這些人是準(zhǔn)備渡江南下謀生的。前思后想一番之后，耿老爹和三個(gè)孩子商量：“這場(chǎng)大水，已經(jīng)使周圍數(shù)百里今年不可能再有多少收成了，而且鎮(zhèn)上的人口也損失了一大半?？磥?lái)，咱們的糧油零售店已經(jīng)不可能在這里繼續(xù)維持下去了。我想啊，現(xiàn)在唯一的辦法只能是過(guò)江去再做打算了?！惫⒄置萌嗣婷嫦嘤U。聽(tīng)爹爹說(shuō)得在理，都點(diǎn)頭稱是。于是，耿老爹當(dāng)即拍板：“事不宜遲，那我們及早準(zhǔn)備動(dòng)身?！睕](méi)有了毛驢和平車，耿老爹和耿正只能四處尋找扁擔(dān)和籮筐。但是，在這場(chǎng)罕見(jiàn)的大洪災(zāi)之后，偌大的漢口鎮(zhèn)已經(jīng)被洗劫一空，像扁擔(dān)和籮筐這一類的家伙什兒，大多已經(jīng)隨著洪水漂走了。父子倆人轉(zhuǎn)了大半天，好不容易才尋得一副，耿老爹不惜重金買了下來(lái)。由于小二樓的房主已經(jīng)在這場(chǎng)大洪災(zāi)中遇難了，所以，耿老爹不需要交涉退房事宜，收拾好自己的東西抬腿走人即可。想到張老鄉(xiāng)在臨別時(shí)曾經(jīng)說(shuō)，待十一月里返回來(lái)之后要親自到店鋪送書信來(lái)，耿老爹的心里一陣陣作痛。他找出紙墨和筆，為張老鄉(xiāng)寫了一紙留言貼在門上。盡管明