生物化學(xué)實(shí)驗基本操作

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3.粘附有血漿的刻度吸量管等，有三種洗滌方法：（1）先用45%尿素溶液浸泡，使血漿蛋白溶解，然后用自來水沖洗；（2）也可用1%氨水浸泡，使血漿溶解，然后再依次用1%稀鹽酸溶液、自來水沖洗；（3）以上二法如達(dá)不到清潔要求，可浸泡于重鉻酸鉀洗液4~6小時，再用大量自來水沖洗，最后用蒸餾水沖洗2~3次。

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4.新購置的玻璃儀器，應(yīng)先置于1~2%稀鹽酸溶液中浸泡2~6小時，除去附著的游離堿，再用自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗2~3次。5.凡用過的玻璃儀器，均應(yīng)立即洗滌，久置干涸后洗滌十分困難。如不能及時洗滌，先用流水初步?jīng)_洗后浸泡在清水中，待后按常規(guī)處理。

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㈡使用重鉻酸鉀洗液（以下簡稱洗液）時應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：1.需用洗液浸泡的容器，在浸泡前應(yīng)盡量瀝干。否則會因洗液被稀釋而降低洗液的氧化力。2.Hg2+、Ba2+、Pb2+等離子可與洗液發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成不溶性化合物沉積在容器壁上。因此，凡接觸過上述離子的容器，應(yīng)先除去上述離子（可用稀硝酸或5~10%EDTA鈉清除）。3.油類、有機(jī)溶劑等有機(jī)化合物可使洗液還原失效。因此，容器壁上附有大量油類、有機(jī)物時，應(yīng)先除去。

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4.洗液的酸性和氧化性很強(qiáng)，使用時應(yīng)格外注意，千萬不要滴落在皮膚或衣物上，以免灼傷或燒壞。5.洗液顏色由深棕色變?yōu)榫G色時，說明洗液已經(jīng)失效，應(yīng)停止使用，更換新液。因重鉻酸變成硫酸鉻后不再具有氧化性。

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重鉻酸鉀洗液的配制:

取重鉻酸鉀20g溶于20ml蒸餾水中，加熱至沸。冷卻后再將200ml濃硫酸慢慢加入，邊加邊攪拌。注意：此時可產(chǎn)生高熱。為防止容器破裂，應(yīng)選用耐酸搪瓷缸或耐高溫的玻璃器皿，切忌用量筒及試劑瓶等配制。為防止洗液吸收空氣中的水分而被稀釋變質(zhì)，洗液應(yīng)貯存于帶蓋的容器中。當(dāng)清潔效力降低時，再加入少量重鉻酸鉀及濃硫酸就可繼續(xù)使用。

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二.吸量管的使用吸量管和定量吸(移)液器(微量加樣器)均為用來轉(zhuǎn)移一定體積溶液的量器。㈠吸量管：生化實(shí)驗中常用的有三種，最常用的是刻度吸量管。1.刻度吸量管：⑴刻度吸量管的種類：第7頁/共26頁

①按容量規(guī)格來分，有0.1、0.2、0.25、0.5、1、2、5、10ml等數(shù)種。其精密度按不同的容積可達(dá)移取量的0.1~1%。通常將管身標(biāo)明的總?cè)萘糠挚虨?00等分。因此，10ml的吸量管一格代表0.1ml；1ml的吸量管一格代表0.01ml,其余類推。第8頁/共26頁

②按“零”點(diǎn)位置來分，有“O”點(diǎn)在吸量管上端的（即讀數(shù)從上而下逐漸增大），也有“O”點(diǎn)在吸量管下端的（讀數(shù)從下而上逐漸增大)。兩種標(biāo)示方法，在使用時各有方便之處。③按刻度方法來分，刻度吸量管也有兩種，一種是刻度刻到尖端的，將液體放出時，應(yīng)吹出殘留在吸量管尖端的少量液體(我實(shí)驗室的刻度吸量管全部是這一種)，另一種是刻度不刻到尖端的。

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⑵刻度吸量管的正確使用方法：用右手拇指和中指夾住管身，將吸量管的尖端伸入試液深處，左手持洗耳球把試液吸入管內(nèi)至高過刻度以上時，迅速用右手食指按住吸量管的上口，以控制試液的泄放。吸液后應(yīng)盡量使吸量管保持垂直，使右眼與刻度等高，稍微輕抬食指或輕輕轉(zhuǎn)動吸量管，使試液面緩慢降落，至管內(nèi)試液彎月面的最低點(diǎn)與吸量管的刻度線相齊為止。然后將吸量管插到需加試劑的容器中，讓尖端與容器內(nèi)壁靠緊，松開食指讓液體流出。液體流完后再等15秒鐘，捻動一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，則吹出尖端的液體后再捻轉(zhuǎn)一下吸量管移去）。第10頁/共26頁

⑶使用刻度吸量管的注意事項：①選擇適當(dāng)規(guī)格的吸量管：吸量管的最大容積應(yīng)等于或略大于所需容積（ml數(shù)）。②仔細(xì)看清吸量管的刻度情況：刻度是否包括吸量管尖端的液體？讀數(shù)方向是從上而下，還是從下而上？③拿吸量管時，刻度一定要面向自己，以便讀數(shù)。

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④吸取試劑時應(yīng)注意三點(diǎn)：一是先吹去吸量管內(nèi)可能存在的殘留液體，二是將吸量管插入試劑液面深部(以免吸液過程中因液面降低而吸入空氣產(chǎn)生氣泡或管內(nèi)試劑進(jìn)入洗耳球)，三是使用洗耳球(不可直接用口吸)。⑤按吸量管上口時應(yīng)該用食指，不能用拇指。

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⑥吸取粘滯性大的液體(如血液、血漿、血清等)時，除選用合適的吸管(奧氏管)外，應(yīng)注意拭凈管尖附著的液體，盡量減慢放液速度(用食指壓力控制)，待液體流盡后吹出管尖殘留的最后一滴液體。⑦使用的吸量管應(yīng)干凈、干燥無水。如急用而又有水時，可用少量欲取試劑沖洗3次，以免試劑被稀釋。

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2.移液吸量管：也有兩種，常見的一種是吸量管的上端只有一個刻度，另一種是除了在吸量管上端有刻度外，在吸量管下端狹窄處也有一刻度線。無論哪一種，在使用時將量取的液體放出后，只需將吸量管的尖端觸及受器壁約半分鐘即可，不得吹出尖端的液體。3.奧氏吸量管：準(zhǔn)確度最高，使用時必需吹出留在尖端的液體。

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㈡定量吸(移)液器(微量加樣器)：定量吸液器是吸量管的革新產(chǎn)品。由塑料制成。目前，因產(chǎn)地廠家不同其質(zhì)量、價格差異十分懸殊。1.定量吸液器的優(yōu)點(diǎn)：使用方便，取、加樣迅速，計量準(zhǔn)確，不易破損，能吸取多種樣品（只換吸嘴即可）。

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2.定量吸液器的類型：有兩種類型。⑴固定式：只能取加一定容量的試劑，不能隨意調(diào)節(jié)取加樣量。其規(guī)格有10μl、20μl、25μl、30μl、50μl、100μl、200μl、250μl、300μl、400μl、500μl、1000μl等。第16頁/共26頁

⑵可調(diào)式：在一定容量范圍內(nèi)可根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)節(jié)取加樣量。例如規(guī)格為50～200μl的可調(diào)式定量吸液器，可以在50到200μl的范圍內(nèi)根據(jù)需要調(diào)節(jié)成設(shè)計容許的各種取加樣容量（60μl、85μl、110μl、170μl、200μl等）。一般來講，固定式吸液器比較準(zhǔn)確，可調(diào)式吸液器使用較為方便。第17頁/共26頁

3.定量吸液器的使用方法：⑴選擇適當(dāng)?shù)奈浩?。吸液前先把吸嘴套在吸引管上，套上后要輕輕旋緊一下，以保證結(jié)合嚴(yán)密。⑵持法：右手四指（除大拇指外）并攏握住吸液器外殼（使外殼突起部分搭在食指近端），大拇指輕輕放在吸液器的按鈕上。⑶取樣(吸液)：用大拇指按下按鈕到第一停止點(diǎn)，以排出一定容量的空氣，隨后把吸嘴尖浸入取樣液內(nèi)，徐徐松開大拇指，讓按鈕慢慢自行復(fù)原，取樣即告完成。

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⑷排液：將吸液器的吸嘴尖置于加樣容器壁上，用大拇指慢慢地將按鈕按下到第一停止點(diǎn)，停留1秒鐘（粘性較高的溶液停留時間應(yīng)適當(dāng)延長）。然后再把按鈕按到第二停止點(diǎn)上，讓吸嘴沿管壁向上滑動。當(dāng)吸嘴尖與容器壁或溶液離開時，方可釋放按鈕，使其恢復(fù)到初始位置。⑸吸液器用后應(yīng)及時取下吸嘴。將吸嘴用自來水沖洗后浸入盛水的容器內(nèi)（以防干涸），待實(shí)驗結(jié)束后集中仔細(xì)清洗。

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三.溶液的混勻

㈠混勻的目的：⒈使反應(yīng)體系內(nèi)的各種物質(zhì)分子很好地互相接觸，充分進(jìn)行反應(yīng)；⒉使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液。

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㈡混勻的方法通常有以下幾種：⒈使盛器作離心運(yùn)動。⒉左手持試管上端，用右手指輕擊試管下半部，使管內(nèi)溶液作旋轉(zhuǎn)運(yùn)動。⒊利用旋渦混合（振蕩）器混勻。⒋不得已時可用干燥清潔的玻璃棒攪勻。

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㈢混勻的注意事項：⒈防止盛器內(nèi)的液體濺出或被污染。⒉嚴(yán)禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻。第22頁/共26頁

四.離心機(jī)的使用

離心法是分離沉淀的一種方法。它是利用離心機(jī)轉(zhuǎn)動產(chǎn)生的離心力，使比重較大的物質(zhì)沉積在管底，以達(dá)到與液體分離的目的。因液體在沉淀的上部，故稱清亮的液體部分為上清液。

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電動離心機(jī)的使用方法：1.將欲離心的液體，置于離心管或小試管內(nèi)。并檢查離心管或小試管的大小是否與離心機(jī)的套管相匹配。2.取出離心機(jī)的全部套管，并檢查套管底部是否鋪有軟墊，有無玻璃碎片或漏孔（有玻璃碎片必須取出，漏孔應(yīng)該用蠟封住）。檢查合格后，將盛有離心液的兩個試管分別放入套管中，然后連套管一起分置于粗天平的兩側(cè)，通過往離心管與套管之間