直抗陽性和免疫溶貧課件

直接抗人球蛋白實驗陽性和免疫溶血性貧血抗球蛋白試驗-檢測

IgG通過抗人球蛋白抗體的特異性橋連作用，促進紅細胞的凝集。可分為直接和間接抗球蛋白試驗。直接抗球蛋白試驗檢查受檢者紅細胞在機體內(nèi)是否被抗體致敏產(chǎn)生直抗陽性的條件自身免疫溶血性貧血溶血性輸血反應(yīng)新生兒溶血病間接抗球蛋白試驗步驟1：致敏步驟2：洗滌步驟3：加入抗人球蛋白試劑（AHG）

增強介質(zhì)可以增強反應(yīng)性和減少孵育時間LISS

電解質(zhì)增加溶液的介電常數(shù)，減弱了抗原抗體的靜電作用。降低離子強度可以顯著增加抗原抗體結(jié)合率Polybrene

堿性高分子物質(zhì)，有效中和紅細胞表面負電荷，降低zeta電位，縮短紅細胞之間的距離PeG

極強的親水性，減少紅細胞與抗體周圍的水分22％BovinealbuminEnzymes增強介質(zhì)柱凝集（Columnagglutination）固相技術(shù)（Solid-phasetechnology）復(fù)合方法RedbloodcellspanelPlasmaorserumScreenDiluentNanoLysAnti-HumanGlobulin(AHG)MAGNET抗體篩選方法MAGNETMAGNETMAGNETDAT陽性血液標(biāo)本的收集EDTA抗凝血提供紅細胞DAT測定，定型，洗脫，自身吸收不抗凝血提供血清抗體篩選，抗體鑒定DAT陽性血清學(xué)研究多特異性抗球蛋白，抗IgG，抗C3測定附著在紅細胞上的免疫球蛋白的類型血清抗體篩選與鑒定自身抗體，同種抗體自身＋同種抗體放散試驗確認附著抗體的特異性直抗（IgG）陽性，而血清與洗脫液皆無反應(yīng)需進一步研究：藥物處理細胞，A和B細胞，酶處理細胞血清抗體鑒定陽性自身抗體溫抗體，冷抗體

同種抗體特異性鑒定自身吸收鑒定同種抗體陰性

IgG抗A，抗B抗體酶處理細胞藥物依賴抗體抗體放散方法方法用途要點Luifreeze-thawABOHDFN快速；紅細胞用量少；其它抗體難放散Heat(560C)ABOHDFN；IgM凝集抗體容易；IgG同種和自身抗體難放散酸放散試劑盒溫自身和同種抗體容易；當(dāng)高效價的抗體存在時放散液有假陽性洋地黃皂苷酸溫自身和同種抗體洗滌消耗時間乙醚放散溫自身和同種抗體紅細胞疾病紅細胞增多紅細胞減少

紅細胞生成減少

紅細胞破壞過多（溶血性貧血）紅細胞丟失過多免疫溶血性貧血的分類自身免疫溶血性貧血（AIHA）

WarmAIHA(WAIHA)

ColdAgglutininSyndrone(CAS)

Mixed-typeAIHA

ParoxysmalColdHemoglobinura(PCH)

DAT-negativeAIHA同種免疫溶血性貧血

HemolyticTransfusionReaction

HemolyticDiseaseoftheFetusandNewborn(HDFN)藥物誘發(fā)的免疫溶血性貧血

Drug-dependent

Drug-independent自身免疫溶血性貧血的血清學(xué)特征WAIHACASMixed-typeAIHAPCHDATIgGIgG+C3C3C3onlyIgG+C3C3C3only免疫抗體類型IgGIgMIgG,IgMIgG放散液IgG抗體沒有反應(yīng)IgG抗體沒有反應(yīng)血清IAT；在20C，35%未凝集IgM凝集抗體，4C效價>1000(60%)IgGIAT-反應(yīng)抗體和IgM凝集抗體在DLT試驗中IgG雙相溶血特異性廣范圍反應(yīng)；多種特異性報道通常為抗I通常未知抗P溫抗體型自身免疫溶血性貧血(WAIHA)發(fā)病率

1/80000，女性比男性高，年齡多數(shù)>40病因分類網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞腫瘤慢性淋巴瘤;霍奇金病;非霍奇金淋巴瘤病膠原病系統(tǒng)性紅斑狼瘡;類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等

免疫性疾病免疫缺陷綜合癥;低球蛋白血癥等胃腸道疾病某些良性腫瘤WAIHA診斷標(biāo)準(zhǔn)臨床表現(xiàn)起病慢，數(shù)月后才發(fā)現(xiàn)貧血，表現(xiàn)為全身虛弱及頭昏。各有1/3患者皮膚粘膜蒼白及黃膽，半數(shù)以上有脾腫大。實驗室檢查1.貧血：程度不一，可暴發(fā)急性溶血現(xiàn)象。外周血涂片上可見多量球形細胞及數(shù)量不等的幼紅細胞，；

2.骨髓涂片：呈幼紅細胞增生象；

3.再生危象：網(wǎng)織紅細胞極度減少，骨髓象呈細胞再生障礙，血象呈全細胞減少；

4.DAT試驗陽性，為抗IgG和抗C3型。

WAIHA診斷依據(jù)直抗陽性患者近4個月無輸血或特殊藥物服用史，結(jié)合臨床表現(xiàn)和實驗室檢查，可診斷為溫抗體型自身免疫溶血性貧血。直抗陰性但臨床表現(xiàn)較符合本病癥狀，腎上腺皮質(zhì)激素或切脾術(shù)有效，其它溶血性貧血除外，可診斷為抗球蛋白蛋白試驗陰性的溫抗體型自身免疫溶血性貧血。

WAIHA療效標(biāo)準(zhǔn)緩解患者臨床癥狀消失部分緩解患者臨床癥狀基本消失。血紅蛋白量在80g/L以上，網(wǎng)織紅細胞數(shù)在5％以下，血清總膽紅素測定<34umol/L（2mg/dl）。直抗陰性/陽性。無效患者治療后仍有不同程度的貧血或溶血癥狀，實驗室檢查結(jié)果未能達到部分緩解標(biāo)準(zhǔn)者。

自身抗體同效（mimicking）同種抗體

一位rr型患者的血清中有抗C及抗e抗體，盡管患者的紅細胞缺乏C抗原，但事實上此抗C的反應(yīng)性，是因溫反應(yīng)性自身抗體而引起。這種由于自身抗體所致的反應(yīng)性，可用自身與同種吸收法來研究決定。在上述情況中，抗e為自身抗體，抗C抗體會吸附到自身及同種的r型細胞上，這與“真實”同種抗C完全不同，后者僅被C陽性紅細胞吸收。溫自身抗體（廣范圍抗dl＋自身抗e）

編號DCEceAHG（370C

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2+PCH發(fā)病機制

以全身或局部受寒冷刺激后突然發(fā)生大量血管內(nèi)溶血和血紅蛋白尿為特征，罕見原發(fā)性發(fā)病者極為罕見繼發(fā)性主要由梅毒特別是先天性梅毒及晚期梅毒靜止期所引起，現(xiàn)在此病大多出現(xiàn)于某些病毒感染，如麻疹、流行性感冒、水痘、傳染性單核細胞增多癥等傳染病之后，以兒童居多

PCH診斷標(biāo)準(zhǔn)臨床表現(xiàn)患者多數(shù)受寒后即有急性發(fā)作，表現(xiàn)為寒戰(zhàn)、發(fā)熱（體溫可高達400C），全身無力及腰背痛，隨后即有血紅蛋白尿，多數(shù)持續(xù)幾小時，偶有幾天實驗室檢查1.發(fā)作時貧血嚴重，進展迅速，外周血有紅細胞大小不一及畸形，并有球形紅細胞、紅細胞碎片、嗜堿性點彩細胞及幼紅細胞；

2.反復(fù)發(fā)作者有含鐵血黃素尿；

3.DL試驗陽性；

4.DAT試驗陽性，為C3型DL冷溶血試驗Donath-LandsteinertestDL冷溶血素IgG冷反應(yīng)性抗體，能結(jié)合于幾乎所有正常人紅細胞均有的P血型抗原，是一種冷溫雙相溫度的冷溶血素，具有強烈的溶血作用。體外最適反應(yīng)溫度00C-40C，150C以下補體不能按序最終激活，故不發(fā)生補體溶血，回升370C時抗體與細胞解離，但補體卻依次激活，導(dǎo)致溶血。先置于冰水中約30分鐘，再置于370C水浴中2小時，溶血，DL抗體存在。

冷自身免疫溶血性貧血的輸血慢性冷凝集素病很少需要輸血，但是發(fā)生大量溶血時，病人溫度約400C的環(huán)境。當(dāng)紅細胞輸入開始10分鐘紅細胞快速在病人血液中破壞，然后破壞速度變慢陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿患者很少需要輸血，因抗體反應(yīng)溫度常只到200C

，所以很少引起溶血，當(dāng)抗體反應(yīng)溫度如上升到300C即可引起溶血。輸P陰性血，但有人成功的輸予沒洗滌，沒加溫，P陽性的細胞自身吸收

區(qū)分自身和同種抗體患者血清：自身抗體+同種抗K洗滌患者細胞，560C水浴中孵育5分鐘，洗脫部分自身抗體酶處理洗脫紅細胞，可增大吸附抗體的能力370C吸附患者血清，移去自身抗體，只留下同種抗體Blood-MatchingGoesGeneticHopingtopreventadversetransfusionreactionsandsavelives,Europeanresearchersarelobbyingtoreplaceserology-basedbloodtypingwithmatchingbasedonDNAtests

14MARCH2008VOL319SCIENCE

配血步入基因時代

為了預(yù)防輸血不良反應(yīng)和挽救生命，歐州學(xué)者們正在呼吁用DNA檢測替代血清學(xué)方法來鑒定血型

14MARCH2008VOL319SCIENCE

Blood-MatchingGoesGenetic

Twodecadesago,a20-year-oldmanenteredDukeUniversityhospitalforahipreplacement.Hehadsicklecelldiseaseandbecausehewasanemic,heneededabloodtransfusionbeforetheoperation.Aswithmostsicklecellpatients,hehadreceivedtransfusionsbefore.Butonthisoccasion,hisbodyrejectedtheblood.Thedoctorstriedagainandagainwithdifferentblood,buttheman’simmunesystemrebelledagainsteverynewtransfusion,generatingantibodiesthatkilledthenewbloodcellsandsomeofhisownintheprocess.“Hereactedtoeverything,”saysWendellRosse,ahematologistatDukeatthetime.Theman’sanemiacontinuedtoworsen,and2weekslaterhedied.“Therewasn’tanythingwecoulddo,”