高等植物基因工程

高等植物基因工程第1頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二第二節(jié)植物基因工程方法一、植物遺傳轉化的方法

植物遺傳轉化技術可分為兩大類：（一）生物介導的轉化方法主要有農(nóng)桿菌介導和病毒介導兩種轉化方法，其中農(nóng)桿菌介導的轉化方法操作簡便、成本低、轉化率高，廣泛應用于雙子葉植物的遺傳轉化。（二）直接基因轉移技術包括基因槍法、原生質(zhì)體法、脂質(zhì)體法、花粉管通道法、電激轉化法、PEG介導轉化方法等，其中基因槍轉化法是代表。第2頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

1、農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒與T-DNA的整合機制幾乎所有雙子葉植物都容易受到土壤農(nóng)桿菌感染，而產(chǎn)生根瘤。它是一種革蘭氏陰性土壤桿菌（A.tumefaciens）。其致瘤特性是由Ti（tumor－inducing）質(zhì)粒介導的。（一）生物介導的轉化第3頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二Ti質(zhì)粒（Tumorinducedplasmid）第4頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

T-DNAT-DNA長約23kb（15kb-30kb

）

，共有三套基因：AuxinCytokininOpine合成的植物生長素與細胞分裂素，促使植物創(chuàng)傷組織無限制地生長與分裂，形成冠癭瘤。

第5頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二Ti質(zhì)粒（Tumorinducedplasmid）環(huán)狀ds-DNA,160-250kb，具六個功能區(qū)致瘤區(qū)：合成植物生長素和細胞分裂素冠癭堿合成區(qū)：參與冠癭堿合成冠癭堿分解區(qū)：參與冠癭堿分解Ti質(zhì)粒轉移區(qū)(tra)：參與在不同農(nóng)桿菌中的接合轉移毒性區(qū)（Vir）（Virulenceregion)

：直接參與T-DNA的轉移和插入植物染色體DNA復制區(qū)（Rep）：參與Ti質(zhì)粒DNA復制第6頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二根癌農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒介導的基因轉化分子機理整個過程分為以下6個步驟：

1）農(nóng)桿菌對受體的識別

2）農(nóng)桿菌附著到受體細胞

3）誘導和啟動毒性區(qū)基因表達

4）類似接合孔復合體的合成和裝配

5）T-DNA的加工和轉運

6）T-DNA與受體基因的整合第7頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二Ti質(zhì)粒作為載體的優(yōu)點宿主范圍廣，能轉化所有的雙子葉植物整合到染色體上后成為染色體的正常組分永遠保留冠癭堿合成酶基因啟動子是一個強啟動子第8頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二Ti質(zhì)粒的改造策略天然的Ti質(zhì)粒不能作為表達載體使用的原因：

a.

植物轉化細胞產(chǎn)生大量的生長素和分裂素，阻止了生長在培養(yǎng)基上的細胞再生長為整株植物，因此，必須除去生長素和分裂素基因。

b.

有機堿的合成與T-DNA的轉化無關，而且會影響植物細胞生長，因為有機堿合成大量消耗精氨酸和谷氨酸，因此必須去除有機堿合成基因（tmt）。

c.

Ti質(zhì)粒過大，重組操作非常困難，也很難找到單一的酶切位點。

d.Ti質(zhì)粒不能在大腸桿菌中復制。第9頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二Ti質(zhì)粒的改造為了使重組質(zhì)粒DNA的大量擴增，添加大腸桿菌復制子；加入植物細胞的篩選標記，如neor基因（新霉素磷酸轉移酶基因）；使用植物細胞啟動子及末端polyA化信號；加入多聚人工接頭以利于外源基因的克隆。

植物中一般不存在質(zhì)粒，為利用農(nóng)桿菌的Ti質(zhì)粒，發(fā)展了一元載體系統(tǒng)和雙元載體系統(tǒng)，避免了在大的Ti質(zhì)粒上進行分子重組操作的困難。

第10頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二用于植物基因轉化的Ti質(zhì)粒載體系統(tǒng)一元載體系統(tǒng)/共整合載體系統(tǒng)雙元載體系統(tǒng)第11頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二一元載體系統(tǒng)Transgenicplant目的基因oriSelectableMarkerGene中間載體Ti質(zhì)粒AuxinCytokininOpineL/RBorder第12頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二1、Ti質(zhì)粒進行卸甲處理。2、將目的基因構建于中間載體上。3、在卸甲載體T-DNA區(qū)插入一段與中間載體同源的質(zhì)粒序列。4、然后將中間載體轉移到含有卸甲載體的根癌農(nóng)桿菌中，中間載體通過同源重組整合到卸甲載體的T-DNA區(qū)，并與卸甲Ti質(zhì)粒一起復制。5、根據(jù)中間載體上所攜帶的抗性基因進行抗性篩選，獲得遺傳重組根癌農(nóng)桿菌菌株。6、使用這種菌株去侵染植物組織細胞，就可以獲得含有目的基因的轉基因植物。卸甲載體中間載體共整合系統(tǒng)（一元載體系統(tǒng)）要點第13頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二二元載體系統(tǒng)TransgenicplantvirorirepMCSTi質(zhì)粒AuxinCytokininOpineL/RBorder目的基因第14頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二二元載體系統(tǒng)（雙元載體系統(tǒng)）要點1、微型Ti質(zhì)粒缺失Vir區(qū)，T-DNA區(qū)進行卸甲處理；2、引入多個酶切位點和廣譜的復制元件；3、把外源基因重組于微型Ti質(zhì)粒上；4、輔助質(zhì)粒去掉T-DNA區(qū)，Vir區(qū)仍然存在；5、把微型質(zhì)粒轉入含有輔助質(zhì)粒的根癌農(nóng)桿菌中，隨后侵染植物組織；6、兩種Ti質(zhì)粒可通過反式作用將含有外源基因的T-DNA區(qū)轉移到植物組織細胞中。微型Ti質(zhì)粒輔助Ti質(zhì)粒第15頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二轉化程序（1）選擇外植體葉片、子葉、胚軸、…

選擇轉化能力較強幼期外植體最佳感受態(tài)時期外植體易于組培，再生外植體要暴露分生組織細胞，增加農(nóng)桿菌與分生組織細胞接觸面。根癌農(nóng)桿菌轉化的一般步驟第16頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（2）共培養(yǎng)

農(nóng)桿菌溶液接種到外植體損傷切面浸泡一段時間。然后洗掉非傷面菌液轉到培養(yǎng)基上共培養(yǎng)（將接種農(nóng)桿菌的外植體置于誘導培養(yǎng)基上，此時農(nóng)桿菌隨外植體的細胞分裂而繁殖并進行侵染，T-DNA轉移整合，此過程叫共培養(yǎng)）。

第17頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

（3）脫菌共培養(yǎng)后轉到含有殺農(nóng)桿菌抗生素的培養(yǎng)基上脫菌羧卞青霉素250mg/L

頭孢500mg/L

羧吩青霉素四環(huán)素和利福平（4）再生篩選第18頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

2、病毒介導的遺傳轉化植物病毒廣泛存在，而且不受單子葉或雙子葉的限制。因此病毒作為植物基因工程的載體日益受到人們的重視。在已知300種特征清楚的植物病毒中，雙鏈DNA病毒、單鏈DNA病毒各占3%。RNA不適合于作為克隆載體，因為RNA的操作非常困難。在植物上已知有兩種DNA病毒，花椰菜花葉病毒（Cauliflowermosaicvirus,CaMV）和雙聯(lián)體病毒（geminivirus），但都不是基因克隆的理想載體。

花椰菜花葉病毒載體已用來克隆了一個基因進入蕪箐甘藍，有兩個因素限制了其應用：

1）花椰菜花葉病毒基因組的大小，即使是切除了非必需序列，花椰菜花葉病毒載體的承載插入片段的能力還是有限的，只能插入很小的片段。

2）花椰菜花葉病毒的寄主范圍非常窄，主要是蕓苔屬植物如蕪菁、甘藍和花椰菜等。

二價病毒可能比較有潛力，侵染重要的作物，如玉米和小麥，然而在侵染過程中，二價病毒重新排列并刪除部分序列，攪亂插入的DNA序列。這種病毒可引起破壞性的侵染，需要嚴格的防護，防止載體從寄主中逃逸侵染自然中的植物。所以花椰菜花葉病毒和二價病毒作為克隆載體還需要進一步的改造。第19頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（二）DNA直接轉移法農(nóng)桿菌侵染雙子葉植物獲得轉基因植株是非常成功的，但自然界中的農(nóng)桿菌只侵染雙子葉植物，對單子葉植物不敏感。雖然通過添加乙酰丁香酮類物質(zhì)可使農(nóng)桿菌侵染單子葉植物，但單子葉植物的再生比較困難，因而農(nóng)桿菌轉化單子葉植物仍然是比較困難的。

1984年，科學家發(fā)現(xiàn)，超螺旋結構的細菌質(zhì)粒，雖然不能在植物細胞中復制，但可以重組整合到植物染色體內(nèi)。受這一現(xiàn)象的啟發(fā)產(chǎn)生基因直接轉移技術。重組機制并不清楚，因為細菌質(zhì)粒與植物DNA之間沒有同源性，事實上整合是隨機發(fā)生在植物染色體的任何位點。第20頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二DNA直接轉移法基因槍法原生質(zhì)體法脂質(zhì)體法花粉管通道法電激轉化法PEG介導轉化方法等。第21頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二1.基因槍法第22頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（1）定義基因槍法（particlegun）又稱微彈轟擊法（microprojectilebombardment,particlebombardment,biolistic)。它是把遺傳物質(zhì)或其它物質(zhì)附著于高速微彈上直接射入組織、細胞、細胞器內(nèi)，完成整合并表達的基因轉化的方法。最早是由Cornell大學研制的火藥基因槍。1990年，美國杜邦公司推出了商品基因槍PDS-1000系統(tǒng)?；驑尩慕M成部分由點火裝置、發(fā)射裝置、擋板、樣品室、真空系統(tǒng)組成。第23頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（2）動力系統(tǒng)炸藥爆破力gunpower

高壓氣體（highpressuregas）高壓放電（3）DNA顆粒載體的制備利用CaCl2對DNA沉淀作用；亞精氨、PEG的粘附等作用將DNA固定在顆粒表面。第24頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（4）金屬顆粒

金粉：規(guī)則的球形，比表面積大，DNA吸附力強

鎢粉：廉價，易得，但易在細胞表面形成有害的氧化物第25頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二基因槍轉化率

基因槍轉化率差異很大，一般在10-3~10-2之間。McCabe在大豆上高達2%，而有的報道僅有10-4。相對于農(nóng)桿菌介導的轉化率要低得多，而且基因槍轉化成本高；嵌合體比率大、遺傳穩(wěn)定性差。第26頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二盡管基因槍法有很多缺陷，但在單子葉植物上也有廣泛應用，優(yōu)點有：

a)無宿主限制，無論是單子葉植物和雙子葉植物都可以應用。

b)受體類型廣泛，原生質(zhì)體、葉圓片、懸浮培養(yǎng)細胞、莖、根、以及種子的胚、分省組織、愈傷組織、花粉細胞、子房等幾乎所有具有分生潛力的組織或細胞都可以用基因槍進行轟擊。

c)可控度高，商品化的基因槍都可以根據(jù)實驗需要調(diào)控微彈的速度和射入濃度，命中特定層次的細胞。

d)操作簡便迅速。

正因為基因槍這些優(yōu)點，使基因槍成功的應用于：植物基因轉化，特別是單子葉植物的轉化；外源基因導入植物細胞器；種質(zhì)轉化（莖尖分生組織、配子體、胚胎細胞）；植物基因表達調(diào)控研究。第27頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二2.多聚物介導轉化：利用多聚物PEG、多聚賴氨酸、多聚鳥氨酸等在二價陽離子作用下，促進DNA在原生質(zhì)體表面形成沉淀，繼而通過原生質(zhì)體的內(nèi)吞噬作用而被吸收進入細胞內(nèi)。多聚物促進細胞融合的原理：多聚物使細胞膜之間或DNA與膜之間形成分子橋，促進相互間的接觸和粘連，在細胞融合的過程中，DNA進入細胞。第28頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二磷脂介導（Phospholipidsasgene-deliveryvehicles）脂質(zhì)體(liposomes)是一種人造的脂質(zhì)小泡，外周是脂雙層，內(nèi)部是水腔。第29頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二3.電穿孔法將高濃度的質(zhì)粒DNA加入到植物細胞的原生質(zhì)體懸浮液中，混合物在200-600V/cm的電場中處理若干秒鐘，然后將原生質(zhì)體在組織培養(yǎng)基中生長1-2周，再生出整株植物。第30頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（1）定義：利用顯微注射儀通過機械方法將DNA注入細胞質(zhì)或核內(nèi)。4.顯微注射法（microinjection):第31頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二（2）細胞固定（對植物來言）：瓊脂糖包埋法多聚賴氨酸粘連吸管支持法（3）優(yōu)缺點：轉化率高，10-20%甚至60%

繁瑣耗時，需要專門的顯微注射儀，要求精密操作技術和低密度培養(yǎng)技術。第32頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二

5、花粉管通道法在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液，利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道，將外源DNA導入受精卵細胞，并被整合到受體細胞的基因組中，隨著受精卵的發(fā)育而成為帶轉基因的新個體。該方法于80年代初期由我國學者周光宇提出，我國目前推廣面積最大的轉基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的。該法的最大優(yōu)點是不依賴組織培養(yǎng)人工再生植株，技術簡單，不需要裝備精良的實驗室，常規(guī)育種工作者易于掌握。

利用花粉管通道將DNA轉移至胚囊，轉化尚不具正常細胞壁的卵、合子及早期的胚胎組織。目前已應用于水稻、小麥、棉花、大豆、花生、蔬菜等作物的轉基因研究。

第33頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二第三節(jié)轉化子細胞的篩選采用某種轉基因方法處理外植體后，通常外植體中僅有少數(shù)細胞獲得轉化。只有采取有效的篩選方法，才能高效準確地選擇到轉化細胞。篩選方法主要有兩種：

解毒基因篩選選擇基因為一解毒基因，可以消除培養(yǎng)基中有害物質(zhì)（如抗生素、除草劑等）對細胞生長的抑制作用；而非轉化細胞不能在含有有害物質(zhì)的培養(yǎng)基中生長。

營養(yǎng)缺陷型篩選受體細胞為營養(yǎng)缺陷型細胞，不能在選擇性培養(yǎng)基中增殖，而選擇基因可以補償這種缺陷，使轉化細胞在選擇性培養(yǎng)基上正常生長。第34頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二一、植物基因工程中的選擇基因植物基因工程中的選擇標記基因主要是一類編碼可使抗生素或除草劑失活的蛋白酶基因。1、新霉素抗性基因（neor）2、慶大霉素抗性基因（gentr）3、潮霉素磷酸轉移酶基因（hpt）4、膦絲菌素乙酰轉移酶基因（bar）第35頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二1、新霉素抗性基因（Neomycinephosphotransferase–II,NPT-II，neor

）由大腸桿菌轉座子Tn5中分離。選擇試劑：卡那霉素、新霉素、G418（氨基糖苷類抗生素）。neor可使選擇試劑磷酸化而失效（即催化ATP上的γ-磷酸轉移到諸如新霉素、卡那霉素、慶大霉素和G418等抗生素分子的某些基團上。）。該類抗生素通過干擾70s核糖體的功能抑制蛋白質(zhì)合成，阻礙了原核生物蛋白質(zhì)的合成。對植物細胞的毒性機理是通過干擾植物細胞葉綠體、線粒體中核糖體的功能而抑制葉綠體和線粒體蛋白質(zhì)的合成。該基因廣泛應用于雙子葉植物，單子葉中也有成功應用。第36頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二2、慶大霉素抗性基因（gentr）gentr編碼乙酰轉移酶。選擇試劑：慶大霉素。gentr編碼乙酰轉移酶可使慶大霉素乙?；Щ睢Ｔ摶蛟诎珷颗?、煙草和番茄轉基因篩選中有較廣泛應用。第37頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二3、潮霉素磷酸轉移酶基因（hpt）潮霉素是一種很強的細胞生長抑制劑，對許多植物都有毒性。選擇試劑：潮霉素。hpt可使選擇試劑磷酸化而失活。該基因廣泛應用于單子葉植物，特別是水稻的轉基因研究，是一種選擇效率很高的選擇基因。第38頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二4、膦絲菌素乙酰轉移酶基因（bar）由吸水鏈霉菌中克隆。選擇試劑：膦絲菌素（basta)。膦絲菌素可抑制谷氨酰胺合成酶活性，從而導致非轉化細胞氨的致死性積累。Bar編碼的膦絲菌素乙酰轉移酶可使膦絲菌素乙?；Щ?。該基因廣泛應用于禾谷類作物以及大豆、油菜等油料作物的轉基因研究。第39頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二報告基因是指其編碼產(chǎn)物能夠被快速測定、常用于盤底外源基因是否成功地導入受體細胞（器官或組織），是否啟動表達的一類特殊用途基因。報告基因與選擇基因的區(qū)別在于：二、植物基因工程中的報告基因選擇基因往往需要與外界的篩選壓力如抗生素等相互作用，以篩選轉化細胞；二報告基因的應用不需要外界選擇壓力的存在。第40頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二理想報告基因應具備的條件1、受體細胞不存在相應的內(nèi)源等位基因活性；2、它的產(chǎn)物是唯一的，且不會損害受體細胞；3、具有檢測快速、靈敏、價廉且可定量、重復測定特性。第41頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二目前常用報告基因1、β-葡萄糖苷酸酶基因（gus）2、氯霉素乙酰轉移酶基因（cat）3、

熒光素酶基因（

luc）4、綠色熒光蛋白基因（gfp）第42頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二1、β-葡萄糖苷酸酶基因（gus）gus基因存在于某些細菌體內(nèi)。編碼β-葡萄糖苷酸酶。檢測的底物有3種，

1）X-gluc5-溴-4氯-3-吲哚葡萄糖苷、5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl-b-D-glucuronide；

2）PNPG

對硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷、p-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside。

3）4-MUG

4-甲基傘形酮酰-β-D-葡萄糖醛酸、4-methylumbelliferyl?-D-glucuronide第43頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二X-gluc5，5’-二溴-4，4’-二氯靛藍（藍色，顯色）

(5-溴-4-氯-3-吲哆葡萄糖醛苷酸)4-MUG

4-甲基傘形酮（熒光物質(zhì)）＋β-D-葡萄糖醛酸（4-甲基傘形酮酰-β-D-葡萄糖醛酸）熒光，熒光分光光度計PNPG對硝基苯酚（溶液呈黃色，PH=7.15，400~420nm）（4-甲基傘形酮酰-β-D-葡萄糖醛酸）分光光度計GUSGUS（1）GUS基因的檢測十分簡單、方便和靈敏。（2）絕大多數(shù)植物中沒有檢測到該酶的背景活性。（3）GUS基因還可用來進行嵌合基因的構建和分析。優(yōu)點：GUS第44頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二2、氯霉素乙酰轉移酶（CAT）基因

cat基因是由大腸桿菌易位子Tn9所編碼的，它可以催化乙酰CoA轉乙?；铰让顾胤肿?導致氯霉素分子發(fā)生乙?；饔茫瑥亩セ钚?。真核生物無該基因，無該酶內(nèi)源活性。該酶活性可以通過反應底物乙酰CoA的減少或反應產(chǎn)物還原型乙酰CoA的生成來測定，目前常用的方法有硅膠G薄層層析法及DTNB分光光度法。

CAT1—乙酰氯霉素

CoA＋氯霉素2—乙酰氯霉素（氯霉素失效）

3—乙酰氯霉素優(yōu)點：克服了受體細胞非特異性酶本底較高的缺點，且CAT酶定量分析準確。第45頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二3、熒光素酶（LUC）基因

來源：從北美熒光蟲和叩頭蟲的cDNA文庫中克隆出來的。功能：luc基因所編碼的熒光素酶是生物體催化自身發(fā)光的一種蛋白。該酶在有ATP、Mg2+、O2和熒光素存在的條件下可發(fā)射出熒光，熒光持續(xù)數(shù)秒到數(shù)分鐘即消失，可用微光測定儀檢測到非常微弱的熒光素酶分子。熒光光度計（1）LUC測定靈敏度非常高（2）LUC檢測法成本低（3）免于放射性同位素檢測對人體健康和生態(tài)環(huán)境所造成的危害。（4）該酶的活性不需要轉錄后修飾，可以在幾乎所有的宿主細胞中表達。優(yōu)點：插入了螢火蟲熒光素酶基因的煙草,由于熒光素酶基因的表達使得煙草發(fā)光.第46頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二4、綠色熒光蛋白（GFP）基因

來源：海洋生物水母，其基因可在異源組織中表達并產(chǎn)生熒光。功能：gfp

開放閱讀框架長度約740bp，編碼238個氨基酸殘基，其肽鏈內(nèi)部第65～67位絲氨酸-脫氫酪氨酸-甘氨酸通過自身環(huán)化和氧化形成一個發(fā)色基團，在長紫外波或藍光照射下發(fā)出綠色熒光。檢測：可在熒光顯微鏡或流式細胞儀中直接觀察基因的表達。GreenFluorescentProtein(GFP)第47頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二外源基因是否整合到染色體上？整合方式如何？整合到染色體上的外源基因是否表達？基因表達是否產(chǎn)生了完整的蛋白質(zhì)？是否產(chǎn)生了目的性狀？

需要通過以下鑒定與證實分子生物學鑒定表型鑒定遺傳學鑒定第四節(jié)轉化體的鑒定與證實第48頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二外源基因轉化驗證內(nèi)容和技術外源基因是否整合

PCR技術(需要注意假陽性問題、外源基因仍有可能以游離形式存在問題)Southern雜交外源基因表達

RT-PCR技術(假陽性問題)Northern雜交

Western雜交第49頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二第五節(jié)植物基因工程應用第50頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二轉基因作物

抗病蟲害抗非生物脅迫(逆境)提高作物產(chǎn)量、品質(zhì)花卉植物基因工程植物醫(yī)藥基因工程第51頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二一、抗性基因工程抗病蟲害抗非生物脅迫(逆境)第52頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二抗植物病蟲害基因的應用抗蟲基因Bt基因蛋白酶抑制基因植物凝集素基因淀粉酶抑制劑基因毒素蛋白基因（Bt）第53頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二Bt基因抗蟲應用i.來源：蘇云金桿菌（Bacillusthuringiensis,Bt）在形成芽孢的過程中，產(chǎn)生具有高度特異性殺蟲活性的殺蟲結晶蛋白（insecticidalcrystalprotein,ICP）ii.原理：死亡ICP原毒素昆蟲停止進食細胞滲透平衡破壞形成細胞膜孔道與腸道上皮細胞上特異性蛋白結合毒性多肽ICP在昆蟲堿性腸道內(nèi)活化昆蟲取食第54頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二抗植物抗毒病基因的應用抗病毒基因cp基因（病毒外殼蛋白基因）病毒復制酶基因反義RNA介導抗病毒缺陷型運動蛋白介導抗病毒植物體內(nèi)的抗病毒基因缺陷干擾顆?？共《竞颂求w失活蛋白基因干擾素基因病毒衛(wèi)星RNA第55頁，共64頁，2023年，2月20日，星期二抗植物真菌病害基因的應用植物病原菌致病小種進化相對較快