石墨爐原子吸收光譜測定人血中鉛含量

石墨爐原子吸收光譜測定人血中鉛含量第1頁/共27頁石墨爐原子吸收光譜

測定

人血中鉛的含量第2頁/共27頁石墨爐原子吸收光譜測定人血中鉛的含量實驗?zāi)康膶嶒炘砑耙饬x實驗步驟及方法注意事項實驗報告第3頁/共27頁實驗?zāi)康?.了解石墨爐原子吸收法檢測血鉛的基本原理。2.理解血鉛的測定在職業(yè)鉛中毒診斷和職業(yè)性健康檢查中的意義。3.了解不同基體改進劑對石墨爐原子吸收法測定血鉛的影響。第4頁/共27頁實驗原理職業(yè)性慢性鉛中毒：

由于接觸鉛煙或鉛塵所致的以神經(jīng)、消化、造血系統(tǒng)障礙為主的全身性疾病第5頁/共27頁鉛的代謝及分布鉛塵、鉛煙肺血液（紅細(xì)胞、血漿）骨骼肝、腎、腦尿液第6頁/共27頁鉛中毒

線粒體卟啉代謝紊亂δ-氨基-r-酮戊酸（ALA)血原卟啉（FEP)

血鋅原卟啉(ZPP)血紅素合成抑制神經(jīng)系統(tǒng)：周圍神經(jīng)病中毒性腦病消化系統(tǒng)：腹絞痛血液系統(tǒng)：貧血點彩紅細(xì)胞血管、腎臟：牙齦鉛線

Fanconi第7頁/共27頁中毒診斷血鉛≥2.9μmol/L(0.6mg/L、600μg/L)輕、中、重鉛中毒實驗室診斷指標(biāo)職業(yè)接觸限值

診斷值血鋅原卟啉(ZPP)μmol/L(μg/gHb)

2.91(13.0)

血原卟啉(EP)μmol/L(μg/L)

3.56(2000)

血鉛(PbB)μmol/L(μg/L)

1.9(400)

2.9(600)

尿鉛(PbB)μmol/L(μg/L)0.34(70)0.58(120)

尿δ-氨基-r-酮戊酸(ALA)μmol/L(μg/L)

61.0(8000)

結(jié)合職業(yè)接觸史、作業(yè)環(huán)境調(diào)查、臨床表現(xiàn)作出診斷（GBZ37-2002)觀察對象血鉛≥1.9μmol/L(0.4mg/L、400μg/L,)

第8頁/共27頁石墨爐原子吸收法----血鉛基本原理：血液經(jīng)硝酸處理后進入石墨爐原子化器中進行原子化，被測元素（Pb）形成基態(tài)原子蒸氣；

鉛空心陰極燈輻射出的特征譜線283.3nm通被基態(tài)原子態(tài)吸收，生成相應(yīng)吸光度值；

在一定實驗條件下，其吸光度與試樣中的鉛濃度成正比，據(jù)此進行血液中鉛的定量分析。第9頁/共27頁石墨爐原子吸收法----血鉛基本步驟：干燥灰化原子化（收集信號）

氬氣（保護、清除基體蒸汽及雜質(zhì)）調(diào)整氣流量、溫度、持續(xù)時間對試驗條件進行優(yōu)化第10頁/共27頁石墨爐原子吸收法----血鉛基體改進劑作用：保護被測物質(zhì)消除基體干擾血鉛：TritonX-100、磷酸二氫銨第11頁/共27頁意義及應(yīng)用血液中95%的鉛在紅細(xì)胞中，其濃度與機體鉛吸收、分布、排出處于平衡狀態(tài)當(dāng)生活或生產(chǎn)環(huán)境不變，鉛暴露基本穩(wěn)定的情況下，血鉛不僅反映了近期的鉛接觸水平，也一定程度上作為內(nèi)暴露水平反映體內(nèi)的鉛負(fù)荷采樣方便、不易污染、靈敏度高，血鉛常被用于反映鉛對人體危害的指標(biāo)第12頁/共27頁實驗器材與試劑儀器：原子吸收分光光度計（有石墨爐原子化器和背景校正裝置）；鉛空心陰極燈；器材：15ml、1.5ml離心管；肝素鈉抗凝真空采血管燒杯、100ml容量瓶、移液管、膠頭滴管、移液槍（1ml及200ul)及槍頭試劑：血樣；鉛標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.00mg/ml），硝酸（G.R）；TritonX-100（G.R）；磷酸二氫銨溶液（A.R）；高純水。第13頁/共27頁實驗方法與步驟（一）溶液配制鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液、基體改進劑、血鉛標(biāo)準(zhǔn)液第14頁/共27頁實驗方法與步驟鉛標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液配制（已配好）

1.00mg/ml的鉛標(biāo)準(zhǔn)儲備液用1%的硝酸稀釋為：

1mg/LPb標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液I，

0.1mg/L的Pb標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液II。第15頁/共27頁實驗方法與步驟基體改進劑基體改進劑1100ml溶液含0.1%TritonX-100（WS/T20-1996），0.1%硝酸基體改進劑2100ml溶液含0.2%磷酸二氫銨，0.3%TritonX-100，0.1%硝酸第16頁/共27頁實驗方法與步驟血鉛標(biāo)準(zhǔn)液配制（基體改進劑---血液---Pb標(biāo)準(zhǔn)液）分別用基體改進劑1、基體改進劑2配置兩組血鉛的標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0，10，,20，40，80，μg/LPb標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度（μg/L）010204080血液（μl）100100100100100Pb標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液I（μl）0004080Pb標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液II（μl）010020000基體改進劑（μl）900800700860820第17頁/共27頁實驗方法與步驟（二）被測樣品制備1.采用肝素鈉抗凝真空采血管采集被測血樣，混勻后保存于4°C冰箱；2.吸取100μl血樣分別加兩種基體改進劑，稀釋至1ml，充分混勻，配成血液檢測樣，分別儲存于1.5ml離心管中備用。第18頁/共27頁實驗方法與步驟（三）樣品檢測1.選定被檢測元素，設(shè)置檢測條件及參數(shù)；2.對血鉛標(biāo)準(zhǔn)液進行測定，得出吸光度值并擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線；3.對樣品進行檢測，將吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)曲線進行比對，得出血液檢測液濃度。第19頁/共27頁實驗方法與步驟序號操作步驟溫度（°C）持續(xù)時間(s)氣體流量(L/min)1干燥1601.00.32干燥290400.33干燥3120100.34灰化13500.20.35灰化2650100.36灰化36505.00.07原子化20000.90.08原子化20003.00.09清除26000.30.310清除26005.00.3信號收集讀數(shù)第20頁/共27頁樣品檢測注意：樣品檢測前，清洗清潔池及進樣管；進樣程序開始前，先對石墨管進行空燒，排除上次檢測的余樣，減少干擾；上樣前需將樣品充分混勻，減少測量誤差第21頁/共27頁實驗方法與步驟結(jié)果分析1.繪制血鉛的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出標(biāo)準(zhǔn)方程式2.樣品的吸光度值減去試劑空白的吸光度值，由標(biāo)準(zhǔn)曲線算得的濃度即為稀釋血樣中的鉛濃度c0（μg/L）。3.血樣中鉛的濃度：c=c0*s第22頁/共27頁注意事項所有實驗使用的器皿都用20%硝酸浸泡48h，然后依次用去離子水和高純水沖洗，晾干備用；血樣采集、運輸、保存及配置過程中也應(yīng)避免鉛污染；操作時，避免實驗器皿觸碰到皮膚及桌面，以防止外源的鉛污染，影響實驗結(jié)果；正確使用移液槍，精準(zhǔn)加樣；如果血樣含鉛量超出標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定范圍，可增加稀釋倍數(shù)。第23頁/共27頁實驗分組及分工全班分兩個組（12人/組）組1：基體改進劑1

基體改進劑1作為溶劑的血鉛標(biāo)準(zhǔn)液及被測血樣的稀釋

組2：基體改進劑2

基體改進劑2作為溶劑的血鉛標(biāo)準(zhǔn)液及被測血樣的稀釋注：每組2份被測血樣，分別來自不同的受檢個體實驗結(jié)果全班共享，兩組對實驗結(jié)果進行整合及比較，完成結(jié)果討論及分析

第24頁/共27頁實驗報告實驗?zāi)康膶嶒灧椒ǎ汉唵螖⑹霾僮鞑襟E實驗結(jié)果1.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算樣品含鉛濃度；2.根據(jù)國家職業(yè)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)對被測者血鉛濃度進行初步評價及診斷；若要確診，還需哪些資料的補充？3.討論：加入基體改進劑對血鉛的測定有什么影響？第25頁/共27頁實驗試劑的配制基體改進劑基體改進劑1100ml溶液含0.1%TritonX-100（WS/T20-1996），0.1%硝酸基體改進劑2100ml溶液含0.2%磷酸二氫銨，0.3%TritonX-100，0.1%硝酸檢測樣品配制吸取100μl血樣加入基體改進劑，稀釋至1ml，充分混勻，配成血液檢測樣，分別儲存于1.5ml離心管中備