實驗四 蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗二

實驗四蛋白質(zhì)的性質(zhì)實驗二第1頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六一實驗目的1、了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)。2、學習測定蛋白質(zhì)等電點的一種方法。3、加深對蛋白質(zhì)膠體溶液穩(wěn)定因素的認識。4、了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實用意義。5、了解變性與沉淀的關系。第2頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六二實驗原理---等電點測定

蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)，即其分子中含有的自由氨基和羧基均可解離，解離示意式如下：第3頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六二實驗原理---等電點測定

蛋白質(zhì)分子的解離狀態(tài)和解離程度受溶液的酸堿度影響。當溶液的PH達到一定數(shù)值時，蛋白質(zhì)顆粒上正負電荷的數(shù)目相等，在電場中，蛋白質(zhì)既不向陰極移動，也不向陽極移動，此時溶液的pH值稱為此種蛋白質(zhì)的---等電點。第4頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六二實驗原理---等電點測定各種蛋白質(zhì)分子由于所含的堿性氨基酸和酸性氨基酸的數(shù)目不同，因而有各自的等電點。凡堿性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)，等電點就偏堿性，如組蛋白、精蛋白等。反之，凡酸性氨基酸含量較多的蛋白質(zhì)，等電點就偏酸性，人體體液中許多蛋白質(zhì)的等電點在pH5.0左右，所以在體液中以負離子形式存在。所帶電荷影響因素內(nèi)因：酸性、堿性氨基酸含量外因：所在溶液環(huán)境的PH值第5頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六二實驗原理---等電點測定不同蛋白質(zhì)各有特異的等電點。在等電點時，蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)都有變化，可利用此種性質(zhì)的變化測定各種蛋白質(zhì)的等電點。最常用的方法是測其溶解度最低時的溶液pH值。

本實驗通過觀察不同pH溶液中的溶解度以測定酪蛋白的等電點。配制各種不同pH值的醋酸溶液，向各個溶液中加入酪蛋白后，沉淀出現(xiàn)最多的緩沖液的pH值即為酪蛋白的等電點。第6頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六二實驗原理---沉淀反應

蛋白質(zhì)水溶液是一種比較穩(wěn)定的親水膠體溶液，保持穩(wěn)定的因素有兩點：①蛋白質(zhì)顆粒含有很多極性基團，氨基，羧基，巰基等，親水后形成水化層，使蛋白顆粒互相隔開，不容易聚集；②非等電點狀態(tài)時，蛋白顆粒帶有相同電荷，互相排斥。因此，蛋白質(zhì)在水溶液中，雖分子量很大，但仍能維持穩(wěn)定的溶解狀態(tài)。在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆?？梢蛎撍褪ル姾啥恋?。第7頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六二實驗原理---沉淀反應蛋白質(zhì)變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。所以，蛋白質(zhì)的變性與沉淀之間沒有必然聯(lián)系。第8頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六三實驗操作---等電點測定（一）酪蛋白等電點的測定（1）取同樣規(guī)格的試管4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻。第9頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六三實驗操作---等電點測定（2）向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL，搖勻。此時1、2、3、4管的pH依次為5.9、5.5、4.7、3.5。靜置10分鐘后，觀察其混濁度。最混濁的一管pH即為酪蛋白的等電點。第10頁，共12頁，2023年，2月20日，星期六三實驗操作---沉淀反應（二）蛋白質(zhì)的沉淀及變性第11頁，共12頁，2023