DB37T 3801-2019花生品種純度鑒定技術(shù)規(guī)程-SSR標(biāo)記法_第1頁
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文檔簡介

DB37Protocolofpurityidentificationforpeanutvarietyusing山東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給花生品種純度鑒定技術(shù)規(guī)程-SSR標(biāo)記法GB/T3543.2農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程扦樣GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和推薦引物Recommendedp根據(jù)其兩端的高度保守序列設(shè)計特異引物，通過PCR擴(kuò)增及電泳檢測，從而鑒定花生品種高壓滅菌鍋（105℃~136℃,最大工作壓力0.22MPa凝膠自動掃描儀（400百萬像素高電子天平（最小顯示0.01g電泳槽（樣品通量1.0mm厚磁力攪拌器（0r/min～2500r/min，室溫～100℃);酸度計（-2.00～20.000pH）；微量移液器（2μl、10μl、100μl、20乙二胺四乙酸鈉（EDTA-Na2三羥基甲基氨基甲烷（Tris鹽酸（HCl，36%十六烷基三）；）；）；Mix；SSR引物（10μmol?L-120bpDNALadder；重蒸水或符合GB/T9操作步驟9.1樣品準(zhǔn)備mg?L-1DNA濃度來計算純化DNA的濃度。用0.8%瓊脂糖凝9.3.1反應(yīng)體系9.3.2反應(yīng)程序9.4.1非變性聚丙烯酰胺凝膠制備9.4.1.1玻璃板組裝9.4.1.2灌膠9.4.2.1玻璃板組裝將制好的膠板固定于垂直電泳槽上，凹板向內(nèi)。上下槽中各加入1×TBE緩沖液，至下槽9.4.2.2清洗膠孔9.4.2.3上樣在10μLPCR產(chǎn)物中加入2μL6×loadingb9.4.3銀染顯色9.4.3.1水洗9.4.3.2銀染9.4.3.3水洗9.4.3.5成像 A.1DNA提取試劑稱取121.1gTris，加水定容至1L，濃鹽酸調(diào)至pH8.0，高壓滅A.1.30.5mol?L-1EDTA（A.1.41×TE1mL1mol?L-1Tris-HCl（pA.2聚丙烯酰胺凝膠電泳試劑A.2.210×TBE緩沖液A.2.56%聚丙烯酰胺凝膠溶液（29:A.2.6染色液A.2.7顯色液8F-catcccatcattttccc9A

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