細菌總數的測定

細菌總數的測定水與人類的生產活動和日常生活息息相關。經濟建設的高速進展，往往會使生活用水的水源水受到水中有害有毒物質的污染；而生活污水、人、畜糞便會使甚或用水的水源水受到腐生性微生物的污染。被污染的水都不宜飲用。當水體中含大量的病原問生物是往往會引起傳染病的發(fā)生，人體和動物體的腸道中大約有400多種細菌，雖然，其中的腐生菌進入水體不會引發(fā)人類的疾病，但隨著糞便一起排解的致病菌，如霍亂弧菌、傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、阿米巴蟲、脊髓灰質炎病毒和傳染性感染病毒等致病性微生物，則會引發(fā)人體的腸道傳染病。為愛護人體健康，防止因水源水污染而造成的疾病發(fā)生和流行，必需對生活用水及其水源水進行嚴格的水中細菌學檢查。測定水樣是否合乎引用標準，一般包括：水中細菌總數測定和大腸菌群測定。本試驗以自來水和自然水為水樣進行細菌總數的測定一、試驗目的（1）學習水樣的實行和水樣中細菌總數測定的方法（2）了解和把握平板菌落計數的原則二、試驗原理水中的細菌數可反映出水體被有機物污染的程度。細菌總數越多，說明水中有機物的含量就越高，本試驗應用平板菌落計數來測定水樣中的細菌總數。由于水中細菌的種屬不一，它們對養(yǎng)分成分和生長條件的要求差別很大，不行能設計出一種培育基在同一固定的條件下，能滿意水中全部細菌的養(yǎng)分要求使其都能生長繁殖，形成菌落。然而，腸道中的絕大多數腐生性和致病性的細菌，可在養(yǎng)分豐富的牛肉膏蛋白豚培育基上進行生長，消失肉眼可見的菌落，雖然這樣設計出來的水中細菌的總數實際上是一種近似值，但它基本上能代表水樣中細菌的數量。故而水中的細菌總數的測定和計算是指：在牛肉膏蛋白陳瓊脂培育基上，1ml水樣,經37℃,24h培育后所生出來的總菌數（包括腐生和致病細菌），我們國家飲用水的衛(wèi)生學指標規(guī)定：在1ml自來水中細菌總數不得超過100個（1X102）o三、試驗材料和用具（1）培育基牛肉膏蛋白陳瓊脂培育基（2）用具 滅菌三角燒杯（體積為50ml或100ml）,具玻塞的試劑瓶（體積為250ml,需滅菌），滅菌培育基（中=9cm）,滅菌吸管或滅菌的塑料吸嘴，稀釋水樣用無菌水（在中16mmX160mm試管中加9ml蒸儲水，滅菌），酒精四、試驗方法（I）以無菌操作、用10倍稀釋法稀釋水樣。（2）用平皿傾注制備待測水樣平皿。五、試驗內容1、水樣的實行（1）自來水先將自來水龍頭用火焰（酒精燈火用長柄鑲子夾酒精棉球）灼燒2-3min滅菌，再開啟水龍頭水水流出5min。以滅菌三角燒杯接取水樣，待測（為節(jié)省用水，自來水龍頭一次滅菌后，試驗者依次實行水樣）。（2）池塘水、河水或湖水應取距水面10-15cm的深層水樣。先將已滅菌具玻璃的試劑瓶，瓶口向下浸入水中，在水中翻轉式瓶口向上，開啟瓶塞，待水盛滿后，在水中將瓶塞蓋好，再取出水面。取樣后應馬上進行試驗。如不能立刻進行試驗，應于4℃冰箱保存。2、細菌總數測定（1）自來水（以下操作均需用無菌操作法進行）①用滅菌吸管或微量家養(yǎng)器吸取1ml水樣，注入滅菌培育中，共做2個平皿。②分別向平皿中傾注15-20ml熔化并冷卻到45℃左右的牛肉膏蛋白月東瓊脂培育基，制成平板，并馬上輕輕搖勻（切忌濺到皿蓋上），使水樣于培育基充分混合。③取另一平皿，只加培育基，不加水樣，作為空白對比平板。④待培育基充分凝固后，倒置于37℃溫箱內，培育24h,進行菌落計數。⑤2個平板的平均菌落數即為1ml水樣的細菌總數。（2）池塘水、河水或湖水①水樣稀釋。取1ml水樣水加入到第一支裝有9nl無菌水的試管中，振蕩勻稱，水樣被稀釋10倍，稀釋度為IO」，再從今管中吸取1ml稀釋水樣介入到其次支裝有9ml無菌水的試管中，振蕩勻稱，水樣被稀釋100倍，稀釋度為10-2,如此稀釋則水樣被稀釋1000倍，10000倍……稀釋度分別為10-3、10"、……。稀釋倍數視水樣污濁程度而定，中度污濁水樣可稀釋到10-3~10一4,中度污濁水樣可稀釋到10-4~10-5。②吸取稀釋后水樣方法1：用無菌吸管或微量加以昂起分別從低稀釋度向高稀釋度吸取1ml水樣,即10；（1ml）-10-2（iml）f10-3（iml）,每一稀釋度需用一支無菌吸管或塑料吸嘴，不行用同一吸管連續(xù)吸取,不然,培育后消失的菌落數偏高，誤差大。方法2：用同一無菌吸管或微量加樣器，可從高濃度向低濃度連續(xù)吸取1ml水樣，即10-3（iml）fIOj祥m|）（1ml）,由于高稀釋度 比1（）-2的菌數少，用同一吸管逐次連續(xù)吸取1mL培育后的菌落數，偏差不大，此法快速，簡便。③向每一個加油不同稀釋度水樣的平皿內，傾注15-20ml培育基，混勻，每個稀釋度做2皿，計數時取2個拼版菌落數的平均數，作為該稀釋度的菌落數。另作不加水樣平板為空白對比。④37℃溫箱，倒置培育24h,進行菌落計數。3、菌落計數方法（1）計算相同稀釋度的平均菌落數細菌的菌體是微小的顆粒，在水中呈懸浮狀態(tài)而不像可溶性化學藥品在水中勻稱分布呈真溶液。由于細菌在水中分布不均一，故取時1ml菌懸液中菌數的隨機性很大，在加上水樣與培育基的混合不夠充分，有是培育后平板中長出的菌落不單一，成片狀菌苔，故部分成片狀。技術是，若其中一個平板有較大片狀菌苔生長時，棄之，不采納。取另一無片狀菌苔的平板菌落數作為該稀釋度的平均菌落數。若片狀菌苔僅占整個平板的1/2,而其余的菌落分布非常勻稱，則可將菌落數乘以2代表全平板的菌落數，然后，再按下述原則機端該稀釋度的平均菌落數。（2）首先選擇平均菌落數在30-300之間稀釋度的平板，當只有一個稀釋度的平均菌落數符合此范圍時，則以該平均菌落數乘以稀釋倍數，作為該水樣的細菌總數進行報告。如表一中例次稀釋度平板的平均菌落數為16%而10-2為1365,MP為20,均不在30-300范圍內，故取10,稀釋度164個菌落數為平均菌落數，以16400或L6X10-4個/m|作為該水樣的細菌總數。（3）若有兩個稀釋度的平均菌落數均在30-300之間，則按兩個稀釋度菌落總數的比值來打算取數。如比值小于2,應取兩者的平均值，乘以稀釋倍數進行報告,如表1中例次2,10三稀釋度的平均菌落數為295,10-3為46,兩者均在30-300的范圍內，而菌落數比值為1.6（ICT，為46,換算成為460,10-2為295,則460+295=L55=L6）,取量稀釋度菌落數的平均值為37750（29500+46000）+2=37750,以37750或3.8X104個/ml作為該水樣的細菌總數。同法計算，表1中例次3的菌落數的值大于2,則取其較小的細菌總數271（10-2）進行報告。（4）若全部稀釋度的平均菌落數均大于300,則應按稀釋度最高的品均菌落數乘以稀釋倍數進行，見表1中的例次4。（5）若全部稀釋度的平均菌落數均小于30,則按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋配屬進行報告。見表1中的例次5.（6）若全部稀釋度的平均菌落數均均不在30-300之間，則以最接近300或30的平均菌落數乘以稀釋倍數進行報告，見下表中例次6o計算菌落總數方法舉例表例次不同稀釋度的平均菌落數兩個稀釋度菌落數之比菌落總數/（個/ml）備注10-110-2IO』1136516420—16400,即1.6X104以數行五.，的報落heMm-位的實舍姐10數菌數兩后字四入以指告凸心22760295461.637750,即3.8X10432890271602.227100,即2.7X1044無法計數1650513—513000,即5.1X104527115—270,即2.7X1046無法