糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)基礎(chǔ)及標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)展

糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)基礎(chǔ)及標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)展第1頁/共89頁HbA1c實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)第2頁/共89頁糖化血紅蛋白的發(fā)展歷史概述1958年，Allen報(bào)告，在離子交換層析上的的人血紅蛋白可以分離出三個(gè)小組分，他們較HbA的負(fù)電荷更強(qiáng)，被命名為HbA1a,HbA1b,HbA1c。1969年Rahbar使用瓊脂電泳，報(bào)告糖尿病患者的這些小血紅蛋白組升高1970年代中期，弄清楚了是葡萄糖對(duì)血紅蛋白HbA的非遺傳修飾，產(chǎn)生了HbA1c1980年中期，GHb(糖化血紅蛋白）檢測(cè)被廣泛應(yīng)用，但當(dāng)時(shí)結(jié)果可比性很差DCCT研究發(fā)表后，1996年起，美國(guó)正式啟動(dòng)了NGSP項(xiàng)目，推動(dòng)糖化血紅蛋白檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化。2010年達(dá)成了全球標(biāo)準(zhǔn)化共識(shí)第3頁/共89頁HbHbA0HbA1HbA1aHbA1bHbA1cHbA(??)HbA2()HbF()95%<2%1-3.5%成人血紅蛋白分三種，HbA為主要成人Hb非糖化Hb糖化Hb6-8%87-89%血紅蛋白胎兒血紅蛋白HbF在胎兒及出生6個(gè)月以內(nèi)的新生兒體內(nèi)為高濃度，6個(gè)月后基本降為成人水平糖化和非糖化的血紅蛋白<1%<1%4%-6%HbA1a:?鏈NH2端與其它糖成分結(jié)合的產(chǎn)物HbA1b:HbA1c進(jìn)一步代謝的產(chǎn)物HbA1c:?鏈NH2端與葡萄糖結(jié)合的產(chǎn)物第4頁/共89頁HbA1c是血紅蛋白HbA的糖基化產(chǎn)物葡萄糖與血紅蛋白HbA發(fā)生糖化反應(yīng)兩步反應(yīng)：

先快速生成不穩(wěn)定A1c,

后緩慢生成穩(wěn)定的A1c。血紅蛋白HbA糖化后，負(fù)

電荷會(huì)增加第5頁/共89頁HbA1c的主要檢測(cè)方法基于電荷離子交換高壓液相色譜法（HPLC）電泳法毛細(xì)管電泳基于結(jié)構(gòu)硼酸親和層析法酶法免疫法第6頁/共89頁各檢測(cè)方法的分析物HbA(a2b2)HbA1HbA0HbA1aHbA1bHbA1c非糖化成分糖化成分離子交換色譜和免疫法檢測(cè)物硼酸親和色譜檢測(cè)物第7頁/共89頁離子交換HPLC檢測(cè)原理A:患者紅細(xì)胞裂解物被注入到帶有負(fù)電荷的分析柱中B,C:因?yàn)榕c帶負(fù)電荷樹脂間的離子相互作用，帶正電荷的血紅蛋白分子的移動(dòng)速度比帶負(fù)電荷的慢D:因?yàn)镠bA1c比HbA0所帶負(fù)電荷強(qiáng)，所以首先被洗脫.E:離子交換HPLC方法能分離并鑒定其他種類Hb及一些血紅蛋白變異體，在色譜圖上將出現(xiàn)相應(yīng)的分離峰PathologyConsultationonHbA1cMethodsandInterferences,AmJClinPathol2014;141:5-16第8頁/共89頁國(guó)內(nèi)上市的IE-HPLC方法的主要廠家平臺(tái)廠家儀器Bio-RadVARIANTIITurboHbA1cKit-1.0/2.0VARIANTIIHbA1cProgramD-10HemoglobinA1cProgramTosohG7G8GXArkray81608180上?；葜蠱Q2000MQ2000PT第9頁/共89頁國(guó)內(nèi)上市的LPLC方法的主要廠家平臺(tái)廠家儀器深圳普門GH-900HbA1cAnalyzerDrewScientificDrewDS5Diastat江蘇奧迪康A(chǔ)C660第10頁/共89頁毛細(xì)管電泳法的檢測(cè)原理毛細(xì)管電泳分離血紅蛋白組分是基于電荷等決定的電泳遷移率一種高壓電源產(chǎn)生電場(chǎng)，使分子通過毛細(xì)管從陽極遷移到陰極。患者紅細(xì)胞裂解液中帶正電荷的血紅蛋白組分將首先被檢測(cè)到，其次是中性物質(zhì)，最后由帶負(fù)電荷的血紅蛋白組份。電泳圖譜顯示HbA1c與HBA0分離。PathologyConsultationonHbA1cMethodsandInterferences,AmJClinPathol2014;141:5-16第11頁/共89頁Sebia糖化產(chǎn)品概覽Capillarys2withFlexPiercing是Sebia糖化系統(tǒng)中的唯一有CFDA證的，8個(gè)通道同時(shí)使用時(shí)，1.6分鐘/檢測(cè)。全國(guó)總代理-廣州執(zhí)信價(jià)格：30元/測(cè)試（到代理商）今年在全國(guó)主要地區(qū)推廣力度強(qiáng)，特別在南方兩廣地區(qū)是該公司傳統(tǒng)重要市場(chǎng)MiniCAPCapillary2Capillary2withFlexPiercing*(Capillary2withFlexPiercing為Capillary2的升級(jí)版，只多了可采原始樣本管，其他參數(shù)一致)withFlex第12頁/共89頁硼酸親和色譜法的原理A：患者的紅細(xì)胞裂解液注入到含有結(jié)合了硼酸基團(tuán)的樹脂的分析柱中。B：在pH高于8.0時(shí)，血紅蛋白被糖化后產(chǎn)生一個(gè)特殊的順式二糖醇基團(tuán)與硼酸基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)C：糖化的血紅蛋白被綁定在分析柱中，而非糖化的血紅蛋白組分直接流出D酸性緩沖液被使用，使得糖化的血紅蛋白從分析柱內(nèi)釋放出來圖E是一種簡(jiǎn)化的色譜圖（藍(lán)線），顯示了非糖化和糖化血紅蛋白組分的分離。PathologyConsultationonHbA1cMethodsandInterferences,AmJClinPathol2014;141:5-16第13頁/共89頁硼酸親和色譜法特點(diǎn)硼酸親和色譜法直接檢測(cè)的是總糖化血紅蛋白，報(bào)告結(jié)果是計(jì)算出來的HbA1c。硼酸親和色譜法不能分離出血紅蛋白變異體第14頁/共89頁國(guó)內(nèi)上市的硼酸親和色譜法的主要廠家平臺(tái)廠家儀器PrimusHb9210PDQPlusUltra2Bio-RadIn2itAlereAfinionNycoCard第15頁/共89頁免疫分析法檢測(cè)原理-抗原抗體反應(yīng)A:在沒有HbA1c時(shí)，polyhaptens（包含多個(gè)HbA1c表位的合成分子）與綁定在微粒上的抗HbA1c抗體反應(yīng)，形成不溶性抗體-polyhapten復(fù)合物。這導(dǎo)致顯著的光散射（濁度增加）B:患者紅細(xì)胞裂解液中的HbA1c與抗HbA1c抗體結(jié)合，形成可溶性抗原抗體復(fù)合物，從而減少光散射（濁度降低）。通過比濁測(cè)定可檢測(cè)出該樣本中的HbA1c的量PathologyConsultationonHbA1cMethodsandInterferences,AmJClinPathol2014;141:5-16第16頁/共89頁酶法檢測(cè)原理A：圖示是糖化的HbA的β鏈的前8個(gè)氨基酸，

患者的紅細(xì)胞裂解液在蛋白酶存在的情況下，

氨基酸和小段肽鏈被釋放,包括HbA1c的氨基

酸末端糖化的纈氨酸B：糖化纈氨酸的酶促去糖化反應(yīng)C：纈氨酸去糖化過程產(chǎn)生H2O2.H2O2的形成

可以用比色法測(cè)定.產(chǎn)生的信號(hào)與樣本中的

HbA1c成正比PathologyConsultationonHbA1cMethodsandInterferences,AmJClinPathol2014;141:5-16第17頁/共89頁國(guó)內(nèi)免疫分析法/酶法廠家儀器平臺(tái)及試劑盒廠家儀器試劑盒RocheCobas生化系列機(jī)型糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒(免疫比濁法)Tina-quant系列試劑盒Hitachi生化系列機(jī)型開放或羅氏試劑Siemens

Dimension等生化系列機(jī)型糖化血紅蛋白測(cè)定試劑盒(免疫比濁法)ADVIA生化分析系統(tǒng)糖化血紅蛋白A測(cè)定試劑盒(乳膠凝集法)DCAVantage（POCT）糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒(免疫乳膠凝集抑制法)BeckmanAU生化系列機(jī)型糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒(比色法)Beckman其他生化系列AbbottARCHITECT生化儀系列糖化血紅蛋白測(cè)定試劑盒(化學(xué)發(fā)光微粒子免疫檢測(cè)法)Randox(朗道）血紅蛋白A1c檢測(cè)試劑盒(乳膠增強(qiáng)免疫比濁法)德國(guó)胡曼糖化血紅蛋白(HbA1c)測(cè)定試劑盒JEOLLtd（希森美康代理）糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒(酶法)Sekisui（積水）Medical糖化血紅蛋白檢測(cè)試劑盒(酶法)AuditDiagnostics（北京歐迪代理）糖化血紅蛋白測(cè)定試劑盒(直接法)國(guó)產(chǎn)廠商國(guó)產(chǎn)生化分析系統(tǒng)國(guó)產(chǎn)生化試劑第18頁/共89頁HbA1c的主要檢測(cè)方法的特點(diǎn)方法原理優(yōu)勢(shì)挑戰(zhàn)酶法使用特別作用于氨基酸末端糖化的纈氨酸的酶檢測(cè)HbA1c不受變異體的分析干擾不能發(fā)現(xiàn)血紅蛋白變異體免疫法使用針對(duì)糖化的β鏈氨基酸末端的抗體檢測(cè)HbA1c在使用新一代的試劑盒時(shí)分析不受大多數(shù)常見變異體的干擾不能發(fā)現(xiàn)血紅蛋白變異體，新一代的試劑盒依然會(huì)受到少見變異體的分析干擾硼酸親和層析法糖化的血紅蛋白被綁定在硼酸基團(tuán)樹脂時(shí)，非糖化的血紅蛋白組分直接流出分析柱最小的Hb變異體分析干擾檢測(cè)的是總糖化血紅蛋白，而不是HbA1c,不能發(fā)現(xiàn)血紅蛋白變異體離子交換HPLC基于電荷分離血紅蛋白組分能夠發(fā)現(xiàn)常見的血紅蛋白變異體變異體被共洗脫時(shí)易被干擾毛細(xì)管電泳法基于電荷分離血紅蛋白組分能夠發(fā)現(xiàn)血紅蛋白變異體工作流程PathologyConsultationonHbA1cMethodsandInterferences,AmJClinPathol2014;141:5-16第19頁/共89頁糖化血紅蛋白的重要地位在第59屆美國(guó)糖尿病學(xué)會(huì)年會(huì)上，HbA1c監(jiān)測(cè)的重大影響與胰島素問世相提并論，并將前者作為血糖控制的金標(biāo)準(zhǔn)2014年ADA指南推薦：對(duì)于治療達(dá)標(biāo)（血糖控制穩(wěn)定）的患者，每年應(yīng)該至少進(jìn)行兩次HbA1c檢測(cè)。對(duì)更改治療方案或血糖控制未達(dá)標(biāo)患者，應(yīng)每年進(jìn)行四次HbA1c檢測(cè)在臨床上，無論用什么方法反映血糖的變化，最終都要以HbA1c的變化作為最終評(píng)價(jià)一種藥物或一個(gè)治療方案在血糖控制上是否有效的指標(biāo)DiabetesCareVolume37,Supplement1,January2014“中國(guó)糖化血紅蛋白教育計(jì)劃”教材第20頁/共89頁2010年ADA率先正式推薦HbA1c診斷DM,推薦原因之一就是在美國(guó)HbA1c已高度標(biāo)準(zhǔn)化2011年WHO推薦有條件的地方采用HbA1c診斷糖尿病中國(guó)？？？HbA1c檢測(cè)用于糖尿病篩查診斷的全球現(xiàn)狀HbA1c有早期提示的價(jià)值，可作為糖尿病的診斷指標(biāo)第21頁/共89頁最新2013版中國(guó)2型糖尿病防治指南HbA1c臨床應(yīng)用推薦鑒于HbA1c檢測(cè)在我國(guó)尚不普遍，檢測(cè)方法的標(biāo)準(zhǔn)化程度不高，測(cè)定HbA1c的儀器和質(zhì)量控制尚不能符合目前糖尿病的診斷的要求。本指南仍不推薦在我國(guó)采用HbA1c診斷糖尿病。但對(duì)于采用標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)方法，并有嚴(yán)格質(zhì)量控制，正常參考值在4.0%~6.0%的醫(yī)院，HbA1c≥6.5%可作為診斷糖尿病的參考。中華糖尿病雜志2014年7月第6卷第7期第22頁/共89頁HbA1c用于糖尿病監(jiān)測(cè)和篩查診斷的必備條件實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)參與臨床評(píng)估、作為診斷標(biāo)準(zhǔn)，除了檢測(cè)指標(biāo)固有的先天優(yōu)勢(shì)外，具有符合要求的準(zhǔn)確性精密度（CV）正確度（Bias）第23頁/共89頁HbA1c分析中的CV對(duì)臨床判斷的影響0.5%HbA1c是一個(gè)“臨床上顯著變化”的指標(biāo)CV%6.0%A1C6.5%A1C7.0%A1C25.76-6.246.24-6.766.72-7.2835.64-6.366.11-6.896.58-7.4255.4-6.65.85–7.156.3–7.7不同室內(nèi)CV對(duì)A1C分析的影響（95%的可信區(qū)間）正常人和病人無法區(qū)分血糖控制好壞無法區(qū)分第24頁/共89頁HbA1c分析中偏倚大對(duì)臨床判斷的影響Copyright?2010AmericanAssociationforClinicalChemistry小的偏倚將導(dǎo)致很大人群的誤診第25頁/共89頁標(biāo)準(zhǔn)化的目的和意義目的:實(shí)現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果的可比性--保證檢驗(yàn)質(zhì)量意義（益處）可以建立起普遍接受（可用）的參考區(qū)間可以合并分析、比較不同醫(yī)學(xué)中心的研究資料促進(jìn)醫(yī)學(xué)研究和研究成果的轉(zhuǎn)化能夠有效地應(yīng)用循證醫(yī)學(xué)和檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)實(shí)踐指南第26頁/共89頁HbA1c實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)展第27頁/共89頁全球范圍內(nèi)主要標(biāo)準(zhǔn)化日本標(biāo)準(zhǔn)化瑞典標(biāo)準(zhǔn)化中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化之路第28頁/共89頁1993年CAP糖化血紅蛋白調(diào)查結(jié)果HbA1cTotalGHBHbA1在DCCT和UKPDS結(jié)果發(fā)表之前，美國(guó)有800個(gè)試驗(yàn)室在做A1C檢測(cè)，CAP實(shí)驗(yàn)調(diào)查顯示在不同的實(shí)驗(yàn)室，用不同的檢測(cè)方法得出的A1C結(jié)果存有巨大的差異。第29頁/共89頁從DCCT認(rèn)識(shí)標(biāo)準(zhǔn)化在組織進(jìn)行DCCT的臨床試驗(yàn)中，考慮到當(dāng)時(shí)檢測(cè)“糖化血紅蛋白”的方法繁多、相互間可比性差的問題。為了確保臨床試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，整個(gè)試驗(yàn)期間所有檢測(cè)糖化血紅蛋白的樣品全部在兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)檢測(cè)，并強(qiáng)調(diào)僅以一個(gè)實(shí)驗(yàn)室為準(zhǔn)，另一個(gè)實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果必須校準(zhǔn)至與該實(shí)驗(yàn)室一致。這就是在當(dāng)時(shí)沒有參考物質(zhì)和參考方法的前提下采取的標(biāo)準(zhǔn)化，確保了試驗(yàn)成功！第30頁/共89頁DCCT成果的推廣為了將DCCT的成果用于臨床為糖尿病病人服務(wù)，就必須要求美國(guó)的各實(shí)驗(yàn)室的糖化血紅蛋白結(jié)果和DCCT值具有可比性；因?yàn)槿绻麅H確定任何方法的糖化血紅蛋白值是否在實(shí)驗(yàn)室的“正常范圍”，是沒有意義的。需要更精確地了解：這個(gè)檢測(cè)值和DCCT值的關(guān)系是什么？因?yàn)橹挥蠨CCT結(jié)果直接和平均血糖及并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)。第31頁/共89頁國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃(NGSP)美國(guó)自1996年開始開展國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃(NGSP)開展NGSP的目的：1.糖化血紅蛋白檢測(cè)項(xiàng)目實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化

2.以使各臨床試驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果與DCCT的報(bào)告結(jié)果具有可比性第32頁/共89頁NGSP網(wǎng)絡(luò)PRLPRLNGSP實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)SRLSRLSRLNGSP監(jiān)控網(wǎng)絡(luò)（月度）SRLCPRL指導(dǎo)委員會(huì)執(zhí)行核心SRLSRLSRLSRL第33頁/共89頁NGSP程序NGSP監(jiān)控

網(wǎng)絡(luò)（月度）廠商和實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證（I級(jí)和II級(jí)）校準(zhǔn)品1新鮮血(精密度與偏差)認(rèn)證2新鮮血能力比對(duì)測(cè)試3新鮮血常規(guī)臨床實(shí)驗(yàn)室第34頁/共89頁NGSP對(duì)廠家方法的認(rèn)證NGSP要求：生產(chǎn)廠家有責(zé)任保證其它批號(hào)的試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、（色譜柱）所測(cè)結(jié)果與認(rèn)證結(jié)果保持一致認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)：逐步提高認(rèn)證有效期：1年/docs/methods.pdf第35頁/共89頁第36頁/共89頁NGSP對(duì)實(shí)驗(yàn)室的認(rèn)證由NGSP的二級(jí)參考實(shí)驗(yàn)室來對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行認(rèn)證工作得到認(rèn)證的實(shí)驗(yàn)室所測(cè)結(jié)果是可靠的認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)：逐步提高認(rèn)證有效期：1年http:///docs/labs.pdf第37頁/共89頁38第38頁/共89頁CAP項(xiàng)目：能力比對(duì)測(cè)試美國(guó)病理家學(xué)會(huì)（CAP）2007年開始使用基于NGSP設(shè)定的目標(biāo)值作精密度等級(jí)(+CV)，要求逐年嚴(yán)格2007±152008±122009±102010±82011±72012±72013/2014±6/CAP/CAP09b.pdf,andMeetingminutesfromNGSP/IFCCManufacturersForum,AACCAtlanta2011第39頁/共89頁2014年CAP結(jié)果第40頁/共89頁NGSP標(biāo)準(zhǔn)化成果2013年調(diào)查顯示3000多家CAP實(shí)驗(yàn)室間，A1C的檢測(cè)結(jié)果已經(jīng)有效的標(biāo)準(zhǔn)化第41頁/共89頁IFCC國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化1995年IFCC成立HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化工作組，旨在建立具有高計(jì)量學(xué)水準(zhǔn)的參考系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)HbA1c測(cè)定的全球可比性明確定義HbA1c葡萄糖與血紅蛋白β鏈N末端纈氨酸殘基穩(wěn)定的化合物，全稱為：血紅蛋白β鏈（血液）-N-（1-脫氧果糖-1-基）血紅蛋白β鏈制備純度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)建立一個(gè)特異測(cè)定HbA1c的參考方法建立國(guó)際參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)完成了與指定比對(duì)方法的比較工作第42頁/共89頁

IFCC參考方法的原理谷氨酸內(nèi)切酶HbA1c六肽HbA0六肽糖基化的β鏈N末端的六肽片段非糖基化的β鏈N末端的六肽片段第43頁/共89頁IFCC參考方法的流程溶血液制備酶解HPLC串聯(lián)毛細(xì)管電泳HPLC串聯(lián)質(zhì)譜高特異性和準(zhǔn)確性的計(jì)量結(jié)果第44頁/共89頁IFCCHbA1cStandardization第45頁/共89頁IFCC參考方法的局限性特異測(cè)定HbA1cIFCC測(cè)定結(jié)果低于目前商業(yè)方法（NGSP）結(jié)果耗時(shí)、費(fèi)用高，目前不適合臨床實(shí)驗(yàn)室第46頁/共89頁其他國(guó)家、地區(qū)的標(biāo)準(zhǔn)化日本標(biāo)準(zhǔn)化參考方法：KO500（離子交換HPLC法）瑞典標(biāo)準(zhǔn)化參考方法：MonoS（強(qiáng)氧離子交換樹脂甲基磺酸鹽HPLC法）各標(biāo)準(zhǔn)化組織在相應(yīng)區(qū)域內(nèi)實(shí)現(xiàn)了HbA1c測(cè)定結(jié)果的一致性，但采用參考方法特異性不同，不同國(guó)家、地區(qū)間結(jié)果不具可比性。第47頁/共89頁不同國(guó)家值之間的差異JDS/JSCC=0.927*IFCC+1.73NGSP=0.915*IFCC+2.15Sweden=0.989*IFCC+0.88IFCC%HbA1cJDS%HbA1c2.09.610.811.6NGSP%HbA1c4681012第48頁/共89頁改變數(shù)值對(duì)患者的影響改變HbA1c報(bào)告的數(shù)值范圍的心理影響將對(duì)血糖控制產(chǎn)生影響RagnarHanas,DiabetesCare2002,25:2110-2111第49頁/共89頁對(duì)病人的心理影響RagnarHanas,DiabetesCare2002,25:2110-2111糖化血紅蛋白的百分比數(shù)字表示患者實(shí)際數(shù)字.虛線表示糖化血紅蛋白值基于參考水平變化的預(yù)期變化調(diào)整為較高的DCCT檢測(cè)校準(zhǔn)后，患者的HbA1c結(jié)果降低，說明血糖控制顯著改善當(dāng)調(diào)整回瑞典檢測(cè)校準(zhǔn)后，患者的HbA1c結(jié)果升高，血糖控制惡化第50頁/共89頁如何看待不同結(jié)果第51頁/共89頁糖化血紅蛋白的全球標(biāo)準(zhǔn)化之路ADA/EASD/IDF的HbA1c工作組，建立于2004年，目的是使HbA1c報(bào)告一致。2007年5月4日在意大利米蘭召集了討論審核，并發(fā)布了國(guó)際協(xié)調(diào)申明2010年正式公布了HbA1c全球標(biāo)準(zhǔn)化

測(cè)定共識(shí)第52頁/共89頁2010年全球標(biāo)準(zhǔn)化共識(shí)內(nèi)容HbA1c的檢測(cè)必須在世界范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)化，包括參照系統(tǒng)和數(shù)值報(bào)告。IFCC的參考系統(tǒng)是唯一能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)化要求的方法。將來HbA1c同時(shí)以IFCC單位(mmol/mol)以及衍生的NGSP單位(%)報(bào)告，使用IFCC-NGSP換算公式進(jìn)行轉(zhuǎn)換。第53頁/共89頁NGSP與IFCC關(guān)于報(bào)告單位在美國(guó)，日本和中國(guó)依然報(bào)告%HbA1cNGSP歐洲和其他國(guó)家接受了IFCCmmol/molNGSP與IFCC關(guān)于報(bào)告單位的爭(zhēng)論仍未結(jié)束第54頁/共89頁中國(guó)HbA1c產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)化認(rèn)證現(xiàn)狀市面常見的HPLC方法獲得NGSP認(rèn)證；多數(shù)免疫方法獲得NGSP認(rèn)證；部分POCT、酶法獲得NGSP認(rèn)證；國(guó)產(chǎn)生化試劑基本無NGSP認(rèn)證第55頁/共89頁中國(guó)HbA1c標(biāo)準(zhǔn)化之路EQA（NCCL及各地臨檢中心）NGSP認(rèn)證及國(guó)內(nèi)一致性項(xiàng)目

參考系統(tǒng)建立及應(yīng)用IFCC參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)糖化血紅蛋白教育計(jì)劃-CHEP糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃-CHSP(CNSP)制定中國(guó)糖化血紅蛋白相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)第56頁/共89頁國(guó)內(nèi)目前主要EQA項(xiàng)目衛(wèi)生部臨檢中心（NCCL）HbA1c室間質(zhì)量評(píng)價(jià)計(jì)劃（EQA）

每年一次，5個(gè)樣本，冰凍新鮮全血各省臨檢中心HbA1c室間評(píng)價(jià)計(jì)劃（EQA）

各省情況不一美國(guó)病理協(xié)會(huì)(CAP)HbA1c室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃（CAPGH2survey)

全年測(cè)定2次，每次下發(fā)3個(gè)新鮮全血樣本廠家的HbA1c室間質(zhì)量評(píng)價(jià)服務(wù)（EQAS）Bio-Rad公司EQAS第57頁/共89頁NGSP實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證及中國(guó)NGSP認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室情況認(rèn)證類型#樣品比對(duì)偏差標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)測(cè)（是/否）監(jiān)測(cè)方案廠商（Manufacturer）4040樣本中有37個(gè)結(jié)果在±6%否—I級(jí)認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室（LevelIlab）4040樣本中有38個(gè)結(jié)果在±6%是10個(gè)樣本（季度）II級(jí)認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室（LevelIILab）4040樣本中有37個(gè)結(jié)果在±6%否—NGSP實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)開展針對(duì)全球臨床實(shí)驗(yàn)室的認(rèn)證國(guó)內(nèi)與2005年開始與NGSP的聯(lián)系截至2014年6月，全球NGSP認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室共有147家，其中中國(guó)NGSP認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室共有28家/critsumm.asp第58頁/共89頁國(guó)內(nèi)區(qū)域性的糖化血紅蛋白一致性項(xiàng)目上海糖化一致性項(xiàng)目(SHGHP)目的是提高上海地區(qū)糖化檢測(cè)質(zhì)量。方法是參考NGSP的全血樣本比對(duì)方法。三家核心參考實(shí)驗(yàn)室均為NGSP一級(jí)認(rèn)證實(shí)驗(yàn)室目前有近百家實(shí)驗(yàn)室參與，以上海為主，已有相當(dāng)數(shù)量各地實(shí)驗(yàn)室參加南京地區(qū)糖化血紅蛋白一致性項(xiàng)目江蘇？西安？四川？新疆？……第59頁/共89頁參考系統(tǒng)建立IFCC參考方法建立NCCL：HPLC-LC/MS/MS上海檢驗(yàn)中心：HPLC-CE中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院：同位素稀釋質(zhì)譜法北京市臨床檢驗(yàn)中心：LC/MS/MS參考物質(zhì)第60頁/共89頁參考系統(tǒng)應(yīng)用衛(wèi)生部臨檢中心HbA1c正確度驗(yàn)證計(jì)劃始于2012年，參加實(shí)驗(yàn)室87家；2013年參加實(shí)驗(yàn)室120家；

全年活動(dòng)1次，發(fā)放2個(gè)樣本，為新鮮冰凍全血

靶值確定方法采用IFCC推薦參考方法第61頁/共89頁加入IFCC參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)上海市臨床檢驗(yàn)中心NCCL北京市臨床檢驗(yàn)中心……第62頁/共89頁中國(guó)糖化血紅蛋教育計(jì)劃（CHEP)項(xiàng)目發(fā)起人：紀(jì)立農(nóng)教授寧光教授陳文祥主任主辦單位：中華醫(yī)學(xué)會(huì)科普部協(xié)辦單位：中國(guó)醫(yī)院協(xié)會(huì)臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會(huì)“中國(guó)糖化血紅蛋白教育計(jì)劃”是國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目“公眾健康普及技術(shù)篩選與評(píng)價(jià)研究”的分課題“常見多發(fā)病防治技術(shù)要點(diǎn)篩選和普及研究”中的重要部分中國(guó)糖化血紅蛋白教育計(jì)劃第63頁/共89頁糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃-CHSP(CNSP)……第64頁/共89頁IFCC實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證疑云？全球均無IFCC

臨床實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證中國(guó)哪家IFCC參考實(shí)驗(yàn)室執(zhí)行？如何收費(fèi)？……第65頁/共89頁中國(guó)HbA1c相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SFDA行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《糖化血紅蛋白分析儀》-針對(duì)廠家在中國(guó)上市中國(guó)糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南

-針對(duì)臨床實(shí)驗(yàn)室第66頁/共89頁HbA1c實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和臨床應(yīng)用最新指南第67頁/共89頁中國(guó)糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南目的：

為提高我國(guó)HbA1c檢測(cè)質(zhì)量，適應(yīng)HbA1c臨床應(yīng)用發(fā)展的需要，

更科學(xué)合理有效地運(yùn)用糖化血紅蛋白，

充分發(fā)揮其作用制定機(jī)構(gòu)：

衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心

國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局醫(yī)療器械檢驗(yàn)所

糖尿病專家1糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南中國(guó)糖尿病雜志2013年8月第21卷第8期第68頁/共89頁中國(guó)糖化血紅蛋白實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指南解讀對(duì)分析系統(tǒng)的要求分析系統(tǒng)性能指標(biāo)要求對(duì)色譜柱的要求對(duì)異常結(jié)果處理的建議對(duì)結(jié)果報(bào)告的要求實(shí)驗(yàn)室保證HbA1c測(cè)定結(jié)果質(zhì)量的4個(gè)環(huán)節(jié)第69頁/共89頁1.分析系統(tǒng)的要求測(cè)定方法要求溯源到IFCC參考方法，如NGSP認(rèn)證方法實(shí)驗(yàn)室要知曉所選分析系統(tǒng)可能存在的干擾因素POCT方法的精確性不能滿足臨床要求，目前不能用

于糖尿病的診斷第70頁/共89頁2.分析系統(tǒng)性能指標(biāo)要求報(bào)告結(jié)果：以“HbA1c”或相當(dāng)于“HbA1c”報(bào)告結(jié)果，因?yàn)橹挥羞@一個(gè)分析項(xiàng)目才有評(píng)估并發(fā)癥發(fā)生的優(yōu)良數(shù)據(jù)庫。精密度：室內(nèi)CV<3%（以小于2%為宜）；HbA1c測(cè)定質(zhì)量目標(biāo)：<0.5%HbA1c注意：沒有直接的證據(jù)顯示其它的檢測(cè)指標(biāo)與糖尿病長(zhǎng)期并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)有關(guān)(例如：總糖化血紅蛋白、果糖胺或糖化血清蛋白)第71頁/共89頁3.色譜柱的要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)知曉本室所使用色譜柱可檢測(cè)樣品的數(shù)量達(dá)到檢測(cè)數(shù)量限應(yīng)及時(shí)更換，不可超量使用不同方法的色譜柱可檢測(cè)樣品數(shù)量不同第72頁/共89頁4.異常結(jié)果處理HbA1c檢測(cè)結(jié)果低于4%或大于15%的樣品應(yīng)進(jìn)行復(fù)查，并與臨床醫(yī)生溝通對(duì)測(cè)定結(jié)果與臨床表現(xiàn)不符的樣品應(yīng)進(jìn)行進(jìn)一步檢測(cè)(需在NGSP認(rèn)證的方法下使用)第73頁/共89頁5.結(jié)果報(bào)告NGSP單位（%）+IFCC單位（mmol/mol）NGSP與IFCC轉(zhuǎn)換公式(NGSP=[0.0915*IFCC]+2.152)以%為單位的結(jié)果后1個(gè)小數(shù)點(diǎn)報(bào)告如臨床需要，需提供方法學(xué)名稱第74頁/共89頁6實(shí)驗(yàn)室保證HbA1c測(cè)定結(jié)果質(zhì)量的4個(gè)環(huán)節(jié)1選擇可靠的分析系統(tǒng)2規(guī)范化使用分析系統(tǒng)3知曉HbA1c檢測(cè)的干擾因素4參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)第75頁/共89頁HbA1c的測(cè)定結(jié)果受妊娠影響HbA1c是反映血糖控制平均水平的指標(biāo)。妊娠婦女血容量增加，Hb降低，因此其HbA1c水平較非妊娠婦女低，不能真實(shí)反應(yīng)平均血糖水平。RadderJKetal.NethJMed2005Jul-Aug,63(7):256-259.PartidaHernándezGetal.GinecolObstetMex2000Oct,68:420-424.第76頁/共89頁進(jìn)展迅速的T1DM有一些臨床少見的情況，如進(jìn)展迅速的1型糖尿病，這時(shí)HbA1c就可能沒法“趕上”急性血糖變化的速度，因而不能反應(yīng)真實(shí)的平均血糖水平。第77頁/共89頁藥物維生素C和E可抑制血紅蛋白的糖基化，長(zhǎng)期大劑量服用可以使HbA1c測(cè)定結(jié)果假性降低。長(zhǎng)期大劑量服用乙酰水楊酸鹽嗜酒會(huì)導(dǎo)致血紅蛋白乙?；笻bA1c測(cè)定結(jié)果假性升高長(zhǎng)期使用慢性麻醉劑，可使HbA1c測(cè)定結(jié)果假性升高第78頁/共89頁尿毒癥(氨基甲酰化血紅蛋白）對(duì)HbA1c測(cè)定影響第79頁/共89頁HbA1c的測(cè)定結(jié)果受RBC壽命的影響任何改變紅細(xì)胞壽命的因素都將導(dǎo)致HbA1c結(jié)果不準(zhǔn)確RBC壽命降低，

HbA1c降低：溶血性貧血、大量的失血和輸血HbS和HbC（RBC壽命縮短為~29天）。RBC壽命增加，HbA1c升高：鐵缺乏，脾切除術(shù)后、再生障礙性貧血時(shí)，紅細(xì)胞清除障礙或網(wǎng)織紅細(xì)胞生成減少。

KutterDetal.ClinLab2006,52(9-10):477-481.DaaeLNetal.ClinChem1999Apr,45(4):569.WangYe