顆粒病毒GV簡介專家講座

顆粒體病毒(GV)

顆粒體病毒（granulosisvirus，簡稱GV）在分類上屬桿狀病毒科B亞組，是有包涵體昆蟲病毒。當前為止國內外發(fā)覺GV約130株，中國發(fā)覺約42株，其中26株為首次發(fā)覺。顆粒病毒GV簡介專家講座第1頁GV普通形態(tài)特征包涵體稱顆粒體(granule)或莢膜(capsule)。先在被感染細胞核內形成，但當核膜破裂后可溢出到細胞質內。包涵體很小。在電子顯微鏡下觀察，顆粒體形狀有卵形、橢圓形、長卵形等，通常直徑為0.1～0.3μm，長0.3～1.0μm。每個包涵體內普通只有一個病毒粒子。有時也出現不正常形狀。顆粒病毒GV簡介專家講座第2頁左圖：霜天蛾GV形態(tài)右圖：小菜蛾GV經堿處理后病毒粒子顆粒病毒GV簡介專家講座第3頁GV理化性狀不溶于水和普通有機溶劑如乙醚、乙醇、丙酮、二甲苯等。遇強酸或強堿，包涵體能快速溶解，并可使病毒粒子變性而失去侵染力。顆粒病毒GV簡介專家講座第4頁GV理化性狀可在室溫下保留5年以上而不失侵染力。高溫可使其失活。冰凍無多大危害。較低溫度有可能延長貯存時期。紫外線或其它輻射線能使完整病毒失活。用稀堿處理后可取得完整和具侵染性病毒粒子。顆粒病毒GV簡介專家講座第5頁GV對昆蟲侵染感病特征：

感染早期無顯著病征之后出現反應遲鈍和停頓取食隨即蟲體顏色發(fā)生改變，血液漸變乳白感病蟲體可能膨大或收縮已死幼蟲體壁脆弱，破后流出大量顆粒體。染病幼蟲可存活較長時間。病死蟲體有時用腹足倒掛枝葉上，呈“Λ”形。顆粒病毒GV簡介專家講座第6頁GV感病特征染病幼蟲常于幼蟲期即死，有時也可活至蛹期或成蟲期。從染病到死亡所經時間因蟲而異。普通4～5天，可長至34天，如粘蟲。幼蟲齡期、侵染劑量、溫度等原因也能影響這段時期長短。顆粒病毒GV簡介專家講座第7頁GV感染路徑經過口服進入易感蟲體，顆粒體在中腸中溶解，游離病毒粒子經過腸道柱形細胞微絨毛而侵入，在這些細胞核中增殖，新形成顆粒體病毒釋放于血淋巴中而造成對其它組織繼發(fā)感染。蟲體外傷和寄生天敵產卵可引發(fā)GV對皮下感染，也可經卵垂直傳輸。顆粒病毒GV簡介專家講座第8頁GV專化性顆粒體病毒?；暂^強，交叉感染情況甚為少見，普通認為顆粒體病毒是包涵體病毒含DNA各類中?；宰顝娨活悺Ｒ酝袩o顆粒體病毒能在植物或其它動物細胞中增殖報道。近年我國用小菜蛾細胞系BCIRL-Px2-HNU3復制小菜粉蝶GV和用家蠶細胞系Bm-21E-HNU5復制小菜蛾GV成功。顆粒病毒GV簡介專家講座第9頁GV交叉感染現象鱗翅目幼蟲可合并感染NPV和GV兩種病毒。如黃地老虎、菜粉蝶、粘蟲等可同時感染顆粒體病毒和NPV。粘蟲六齡幼蟲如單感染NPV，死亡率3.4％，單感染顆粒體病毒，死亡率20%，如二種合并感染，則死亡率為80％，死體為NPV病征，體內主要是核型多角體，也有些同時存在顆粒體。顆粒病毒GV簡介專家講座第10頁昆蟲病毒生產

病毒為專性寄生病原，至今還未研究出能在人工培養(yǎng)基上生長，只能在活細胞中增殖。所以，當前國內外應用于害蟲防治昆蟲病毒制劑主要是經過活蟲體增殖和細胞培養(yǎng)法繁殖。顆粒病毒GV簡介專家講座第11頁在昆蟲活體中大量增殖昆蟲病毒3種路徑：直接在自然種群中繁殖

從野外采回大量活蟲接種繁殖

在室內條件下飼育大量害蟲接種繁殖

可采取自然飼料或人工飼料。顆粒病毒GV簡介專家講座第12頁在細胞系中大量增殖昆蟲病毒用組織培養(yǎng)增殖病毒在致病性、?；约捌渌卣鞣矫嬗袥]有變異，尚待深入研究。同時，因組織培養(yǎng)法要求條件較嚴格，大量增殖病毒還存在不少問題，當前還未到達實用階段。

顆粒病毒GV簡介專家講座第13頁顆粒體病毒殺蟲劑

我國在基礎和應用方面研究較詳細顆粒體病毒有菜粉蝶GV，小菜蛾GV，黃地老虎GV，茶小卷葉蛾GV等，其中菜粉蝶GV列入國家“七五”攻關項目進行研究，并完成了中試生產。顆粒病毒GV簡介專家講座第14頁顆粒病毒殺蟲劑生產實例

菜粉蝶GV殺蟲劑生產

菜粉蝶為世界性主要害蟲。其幼蟲又名菜青蟲，是我國分布最普遍，為害最嚴重，經常成災害蟲，幼蟲偏嗜十字花科蔬菜，幼蟲將葉片咬成孔洞和缺刻，嚴重發(fā)生時可將葉片全部吃光。顆粒病毒GV簡介專家講座第15頁菜粉蝶GV生產工藝1人工飼料喂養(yǎng)菜青蟲

將菜粉蝶卵于人工模擬產卵卡上孵化后，人工飼料喂養(yǎng)至3齡，大部分用來增殖病毒，小部分繼續(xù)喂養(yǎng)傳代，每代21－28天。2感染回收

將喂養(yǎng)3齡菜青蟲防于特制塑料籃子中饑餓3－4小時，將病毒用電動噴霧器均勻噴在菜葉上，喂食菜青蟲。普通經過6－7天后，菜青蟲開始感病死亡，及時搜集病蟲。顆粒病毒GV簡介專家講座第16頁菜粉蝶GV生產工藝3顆粒體提取

經感染病蟲用0.7％NaCl浸泡，投入電動勻漿機。將蟲漿加入5－10倍鹽水，電動攪拌機攪拌，用30－80目尼龍過濾3次。濾液r/min離心30min，搜集沉淀。5拌和、分裝

將標定含量病毒原粉中加入展著劑，粘著劑，保護劑等拌和均勻，定量分裝。6產品質量檢驗顆粒病毒GV簡介專家講座第17頁 GV在害蟲防治上應用加拿大研究菜青蟲黃絨繭蜂能在寄主種群中傳輸GV。顆粒病毒GV簡介專家講座第18頁利用病毒防治害蟲首先能夠起到微生物殺蟲劑短期防治作用，另首先使用后有可能使病毒長久存在于農林生態(tài)系中，作為一類被引入生態(tài)因子而起調整害蟲種群密度作用。常規(guī)方法施用或釋放帶毒昆蟲散布一定限量病毒后，病原可在昆蟲種群間自行傳輸。毒餌劑和散布帶毒蟲體含有較高經卵巢傳輸潛力，其它昆蟲或寄生物和捕食者有機械傳輸病毒潛能。顆粒病毒GV簡介專家講座第19頁不足昆蟲病毒對害蟲防治也有其不足，如感染潛伏期較長，普通從感染到致死需7～14天或更長時間，因為