藥理學(xué)講義是研究藥物與機(jī)體相互作用的一門實(shí)驗(yàn)性科學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)

1 第一篇總論藥理實(shí)驗(yàn)課須知1藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本知識(shí)4藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本要素與方法4藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原則5實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的方法與步驟79體外培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)第二篇實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn) 不同給藥途徑對(duì)藥物作用的影 實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn) 磺胺類藥物在體內(nèi)的分 實(shí)驗(yàn) 藥物半數(shù)有效量的測(cè) 實(shí)驗(yàn) 藥物對(duì)麻醉動(dòng)物動(dòng)脈血壓的影 實(shí)驗(yàn) 藥物對(duì)離體兔腸的作 實(shí)驗(yàn) 藥物的鎮(zhèn)痛作 實(shí)驗(yàn) 比妥鈉的抗戊四氮驚厥作 實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)十 實(shí)驗(yàn)十 對(duì)小鼠尿量及電解質(zhì)的影 實(shí)驗(yàn)十 藥物的體外抗凝血作 實(shí)驗(yàn)十 實(shí)驗(yàn)十 實(shí)驗(yàn)十 實(shí)驗(yàn)十 實(shí)驗(yàn)十 藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作 第三 科研訓(xùn) 附錄A常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生殖生理常數(shù)和鑒定 附錄B非揮發(fā)性的給藥劑量和用法 附錄C常用營(yíng)養(yǎng)液的組成和配 附錄D動(dòng)物采血部位與采血量的關(guān)系及最大安全采血量與最小致死采血量 附錄E體表面積計(jì)算法及藥物劑量換算 附錄F幾種易變質(zhì)藥物溶液的配制、保存方法和防腐劑的應(yīng) 附錄G常用液體的配 附錄H化學(xué)試劑的分級(jí)及使用注意事 附錄I隨機(jī)數(shù)字 第一篇藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)基本知識(shí)第一章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)須知整理實(shí)驗(yàn)器材，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將自己所用實(shí)驗(yàn)器材洗凈、擦干后放在自己的工作臺(tái)上，將動(dòng)物及其他廢物丟入指定場(chǎng)所。值日生協(xié)助老師收好實(shí)驗(yàn)器材，并打掃衛(wèi)生，離開(kāi)實(shí) 理論的簡(jiǎn)要總結(jié)。不必再在結(jié)論中重述具體結(jié)果和討論的內(nèi)容。未獲的理論分析不能寫(xiě)入結(jié)[附]守．保持清潔整齊，除實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，相應(yīng)的專業(yè)課及原始記錄紙外，不必要的物品不要帶進(jìn)。實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)將實(shí)驗(yàn)器材、用品和實(shí)驗(yàn)桌凳收拾干凈；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的尸體及廢物應(yīng)放到指定的地點(diǎn)，不得隨地亂丟。的清潔衛(wèi)生工作應(yīng)由各實(shí)驗(yàn)小組輪流負(fù)責(zé)打掃，并最后注意關(guān)好水、電、門窗等，經(jīng)指導(dǎo)教師檢查后，方可離開(kāi)。第二章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基本知識(shí)第一節(jié)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本要素與方法實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是科學(xué)研究計(jì)劃中關(guān)于研究方法與步驟的一項(xiàng)內(nèi)容，是實(shí)驗(yàn)涉及的各項(xiàng)基本但效率低，如觀察單一使用劑量對(duì)血壓的影響；單因素多水平的實(shí)驗(yàn)效率較高，并且使 第二 藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的基本原組不少于30例，進(jìn)行組間比較時(shí)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)每組所需的樣本數(shù)參見(jiàn)表11動(dòng)物分配完后，再分配另一的動(dòng)物。各組雌雄數(shù)目應(yīng)一致。節(jié)、時(shí)間和的溫度、濕度也要一致；操作的手法前后要相同等。（一）1對(duì)照 pH、滲透壓、溶媒等均與用藥組相同，可比性好，兩組對(duì)比時(shí)常用。安慰劑對(duì)照用于臨床研究，采用外形、氣味相同，但不含主藥（改用乳糖或淀粉）的 不同劑量可闡明量－效關(guān)系，證明療效確由藥物引起；還可避免因劑量選擇不當(dāng)而錯(cuò)誤淘汰有價(jià)值的新藥。一般采用3～5個(gè)劑量組。不同制劑將提取的各種有效組分、不同提取部分或不同方式提取的產(chǎn)物，同時(shí)進(jìn)行藥（二）自身對(duì)比又稱同體對(duì)比、前后對(duì)比，為同一用藥前后、或身體左右側(cè)用藥的對(duì)比。配對(duì)對(duì)比采用同種、同窩、同、同體重的動(dòng)物，一一配對(duì)?？蓽p實(shí)驗(yàn)誤差，提高實(shí)組間對(duì)比藥理實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用最廣的對(duì)比。注意非用藥因素要盡可能一致，以減少誤差。交叉對(duì)比同一前后兩次分別接受甲乙兩藥治療。一組動(dòng)物先用甲藥，后用乙藥，另歷史對(duì)比利用個(gè)人既往經(jīng)驗(yàn)、過(guò)去的記錄或歷史文獻(xiàn)資料作為對(duì)比?？杀刃圆?，雙盲對(duì)比主要用于臨床研究，可減少醫(yī)師和兩方面的心理因素影響。實(shí)驗(yàn)中和觀察病情的醫(yī)師都不知道誰(shuí)是用藥組，誰(shuí)是對(duì)照組。只有主持研究者保留，以決定具體治療果設(shè)計(jì)、書(shū)寫(xiě)。而實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是科研工作的中心環(huán)節(jié)，是為了達(dá)到課題研究的預(yù)期目標(biāo)而對(duì)實(shí)用兩種或多種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（其中至少有一種是哺乳類）。另外，動(dòng)物的、、機(jī)能狀態(tài)及生根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)對(duì)象和實(shí)驗(yàn)方法，確定實(shí)驗(yàn)樣本的大小。確定樣本大小的精確方法是通過(guò)預(yù)試或以往經(jīng)驗(yàn)，選擇顯著性水平，按統(tǒng)計(jì)學(xué)計(jì)算。設(shè)立對(duì)照組在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，為避免非實(shí)驗(yàn)因素的干擾而造成誤差，應(yīng)設(shè)立對(duì)照組以消除；擬定實(shí)驗(yàn)記錄格式原始記錄是實(shí)驗(yàn)的重要，是分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果的依據(jù)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的情況（如動(dòng)物的種類、、體重等）、實(shí)驗(yàn)的環(huán)境條件（溫度、濕度等）、實(shí)驗(yàn)方法、步驟、觀察指標(biāo)的數(shù)據(jù)、描記圖形等。原始記錄要及時(shí)、完整、準(zhǔn)確，實(shí)驗(yàn)圖形、要整擬定統(tǒng)計(jì)處理方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)的性質(zhì)和特點(diǎn)選擇適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)處理方法，以對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果作預(yù)試中應(yīng)有計(jì)劃地查明與保證正式實(shí)驗(yàn)成功有關(guān)的各種重要信息,如:動(dòng)物品種、臟器類型、 第三章藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)處理原則等；其內(nèi)涵的信息比計(jì)數(shù)資料豐富，是藥效統(tǒng)計(jì)分析中最常用的資料類型。計(jì)數(shù)資料,又稱質(zhì)反，組數(shù)據(jù)的趨中性，其計(jì)算為X=（x1+x2＋……）/n＝∑x/n；標(biāo)準(zhǔn)差是該組數(shù)據(jù)的離散性代ttTPt﹤t0.05時(shí)，P﹥0.05,差異無(wú)顯著意義t≥t0.05時(shí)，P≤0.05,差異有顯著意義ndnt=Sd=SddSdSdf=n-1。然后用t檢驗(yàn)比較兩組間的差異顯著性，也可用對(duì)比限作圖法，作出直觀的判斷。XSDX3SD和百分率（P）。兩組以上百分率間差別的顯著性檢驗(yàn)，通常用X2法進(jìn)行。X2＝∑

(|AT|T行合計(jì) 第四章1、青蛙（Frog）和(Toad)這兩種動(dòng)物容易獲得，也容易飼養(yǎng)，經(jīng)濟(jì)方便，其離體心臟2、小鼠(Mouse)小白鼠便于大量人工繁殖，飼養(yǎng)方便，比較經(jīng)濟(jì)，適用于需要大量動(dòng)物的 平喘藥和抗組胺藥的研究，豚鼠離體回腸是研究作用于M及H受體藥物的經(jīng)典離體。5、家兔(Rabbit)易飼養(yǎng)，比較馴服，體型較大，其耳靜脈便于注射給藥及采血，是藥理實(shí)6、貓（Cat）為食肉動(dòng)物，性情暴躁，飼養(yǎng)管理較，動(dòng)物資源較少。血壓較穩(wěn)定，對(duì)降 2020代以上的兄妹或親子相互交配，達(dá)到遺傳性質(zhì)的均一性以后的動(dòng)物。純系動(dòng)物對(duì)藥物這給大量供應(yīng)造成了。所以，純系動(dòng)物只用于某些特殊場(chǎng)合，如用L615系棕色小鼠試驗(yàn)藥物了注意動(dòng)物的種屬選擇外，還應(yīng)注意動(dòng)物的選擇。這方面包括動(dòng)物的、體重、、生1、與體重進(jìn)行藥理實(shí)驗(yàn)時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的和內(nèi)容，選用適齡的動(dòng)物。一般成年動(dòng)一致（體重相差不宜超過(guò)10。2、許多實(shí)驗(yàn)證明，不同的動(dòng)物對(duì)同一藥物的反應(yīng)性存在差異，所以，在同一批實(shí)3(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的鑒別道口與距離較遠(yuǎn)，兩者間有毛；②雌鼠的口與比較靠近，界限不清，兩者間相2的腹部可見(jiàn)5對(duì)。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，多數(shù)是在動(dòng)物或動(dòng)物的組織上進(jìn)行，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的妥善捉拿及正確給藥，是保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要條件。正確的捉拿方法應(yīng)該是捉拿牢穩(wěn)，既不動(dòng)物或操作者，又般0.1-0.25ml/10g，最大量為1ml/只（圖1。0.1－0.25ml/10g，最大量1ml/只（圖2。尾靜脈注射：將小鼠置于特制的固定器內(nèi)。使鼠尾部露在外邊，用70%乙醇涂擦或浸入40C左右的溫水中半分鐘，使血管擴(kuò)張，左手拉住尾尖部，右手持注射器，選擇擴(kuò)張明顯的應(yīng)重新穿刺。注射量一般0.1-0.2ml/10g，最大量0.8ml/只（圖3。圖1.小鼠灌胃 圖2.小鼠腹腔注射 圖3.小鼠尾靜脈注射4量一般為0.3~0.5ml/100g，最大量為2ml/只。一般為0.2ml/100g，最大量1ml/只。腹腔注射：注射方法基本同小鼠。注射量一般為

4.5，靜脈。注射時(shí)用棉球輕輕涂擦，使血管顯露急性實(shí)驗(yàn)也可選用豚鼠的靜脈，注射量， 圖5.豚鼠捉拿、固定，也可用固定箱將其固定（6。6.8號(hào)導(dǎo)尿管從開(kāi)口器中部小孔插入食兔劇烈掙扎及呼吸，表明導(dǎo)尿管插入胃內(nèi)，7 圖7.兔灌胃8。注射量0.2~2.0ml/kg，等滲藥液5~10ml/kg。肉注射：左手將兔一側(cè)后肢拉直，右手持注射器在肌肉豐滿處給藥。針頭選用6~7號(hào)。注

8.揮發(fā)性使用方法見(jiàn)表1。表1.常用非揮發(fā)性的使用方濃度麻醉持續(xù)時(shí)間及特點(diǎn)戊巴比妥20-32-4小時(shí)。注射后作全，最常用。30-1-豚鼠、大鼠、小鼠40-22.0-乙酯（拉坦狗、貓、兔、豚鼠、大鼠、小鼠750-20-3.2-2-4小時(shí)。對(duì)呼吸和神經(jīng)反射影響小，但可降低血壓。狗、貓、兔、大鼠25-21.3-15-30分鐘。 50-15.0-于手術(shù)動(dòng)物。吸的。其方法是取4根帶子，打活結(jié)捆住四肢，前肢兩繩左右背下交叉，壓住前肢固定于動(dòng)在實(shí)驗(yàn)研究中，經(jīng)常需要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血液進(jìn)行或某些生化分析，故必須掌握正確的血液方法。采血方法的選擇，取決于實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、所需血量及?dòng)物種類。不同動(dòng)物采血部針手感到心臟搏動(dòng)時(shí)，再稍刺入即入心臟，然后抽液，取針時(shí)直接拔出。由前側(cè)方向后行走。采血時(shí)，將動(dòng)物固定，局部剪毛、，采血者左手緊握剪毛區(qū)上部或扎緊67號(hào)針頭的注射器刺入靜脈，左手放松，以適當(dāng)速30s~3min內(nèi)。:問(wèn)3kg貓應(yīng)注射多少毫升？0.01g，1ml0.1mg(100μg)，30/100=0.3ml，3kg10-4鹽酸腎上腺素容量應(yīng)第五章體外培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)1培養(yǎng)箱：為體外培養(yǎng)提供穩(wěn)定的溫度和pH環(huán)境。存在4℃，而、酶、蛋白等試劑則需長(zhǎng)期冷凍保存。的作用。幾種常用的BSS配方見(jiàn)表1。培養(yǎng)基有天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基之分，天然培養(yǎng)基主要包括各種動(dòng)物、水乳解蛋白以及的體液或組織提取液等。合成培養(yǎng)基將各種營(yíng)養(yǎng)成分（無(wú)機(jī)鹽、氨基酸、維生素和脂類、葡萄糖等）RPMI1640、DMEM、HamF12等。1 成 ——————————————————————————————*Ca2+、Mg2+Ca2+、Mg2+PBS、D-Hanks配制。NaOH（1M紫外線常用于房間和操作臺(tái)的高溫干熱滅菌過(guò)濾除菌常用于培養(yǎng)基、酶等的，因?yàn)楦邷馗邏合逻@些試劑的營(yíng)養(yǎng)成分會(huì)被破電離輻射滅菌以放射性核素產(chǎn)生的γ射線或電子產(chǎn)生的加速離子輻照物品以 況下常具寬扁胞質(zhì)突起（片狀偽足；胞質(zhì)近處有橢圓形胞核，污染多指各類微生物（包括細(xì)菌、真菌、支原體、等）對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的污染。直接肉眼觀察無(wú)污染的貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞，其培養(yǎng)液都是澄清透明的，如果被細(xì)菌倒置相差顯微鏡下觀察利用倒置相差顯微鏡可以觀察到各種細(xì)菌、真菌，從而判普通的倒置顯微鏡無(wú)法觀察到支原體和的形態(tài)，判斷培養(yǎng)物是否被支原體或病毒，需要借助有關(guān)檢測(cè)技術(shù)對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行特殊檢測(cè)，如免疫學(xué)方法、聚合酶鏈第六章文Windows操作系統(tǒng)平臺(tái)為基礎(chǔ)，直觀而操作簡(jiǎn)便，這套實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)主要由以下三部分組成：1BL-410641BL-410區(qū)條數(shù)4個(gè)波形2表示的是一個(gè)波形顯示窗口，窗口中包含有背景格線、標(biāo)尺、基線和基線調(diào)節(jié)旋鈕等四部分。22顯

4鼠標(biāo)單擊菜單條“輸入信號(hào)”，彈出下拉式菜單（51通道、2通道、3通道、44個(gè)菜單項(xiàng)，每一個(gè)菜單項(xiàng)都有一個(gè)輸入信號(hào)選擇子菜單，可根據(jù)需要選鼠標(biāo)單擊菜單條“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目”，彈出下拉式菜單（6），可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選 圖5輸入信號(hào)下拉式菜 圖6實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目下拉式菜驗(yàn)標(biāo)題編輯和實(shí)驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)編輯等8個(gè)命令，以下介紹其中

89）輸入?yún)⒓訉?shí)驗(yàn)的人員名字和實(shí)驗(yàn)組號(hào)，這能有利圖9實(shí)驗(yàn)人員編輯框（10）來(lái)改變實(shí)驗(yàn)題目，并且可 10改變實(shí)驗(yàn)標(biāo)題10鈕進(jìn)行選擇，BL-41024個(gè)圖形按鈕圖11設(shè)置實(shí)驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)12暫停波形顯示按鈕，選擇它將暫停波形顯示。數(shù)據(jù)記錄按鈕，當(dāng)按鈕呈紅色時(shí)，表示系統(tǒng)正在進(jìn)行記錄，再次選擇它時(shí)程綠色，表反演數(shù)據(jù)按鈕，選擇它（與“文件”菜單中的“選擇反演數(shù)據(jù)”命令功能相同）將彈

圖13打開(kāi)打印位置等11個(gè)命令。下面重點(diǎn)介紹打印比例和打印位置命令。70%、50%25%進(jìn)行打印，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行選擇。默認(rèn)的打印比例為100%。圖14打印下拉式菜 圖15打印比例子菜 圖16打印位置子菜信息區(qū)同時(shí)觀察4個(gè)通道的測(cè)量結(jié)果。參數(shù)設(shè)置時(shí)，選擇控制按鈕，主界面上彈出控制區(qū)總體圖（17，它包括4個(gè)通道的增益、時(shí)息區(qū)將顯示收縮壓、舒和平均壓；如果選擇輸入信號(hào)選擇的是電信號(hào)或張力信號(hào)時(shí)，那么信圖17控制區(qū)總體 圖18信

19windows操作系統(tǒng)下的其他文件中，為實(shí)驗(yàn)報(bào)告的整理和的能進(jìn)量，但可以與其它windows的應(yīng)用程序所共享。在進(jìn)行圖形剪輯時(shí)，選擇或從反2021

22可以作為反演數(shù)據(jù)進(jìn)行，也可以對(duì)其進(jìn)量、分析。進(jìn)行數(shù)據(jù)剪輯時(shí)，選擇或從反23第二篇實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)一不同給藥途徑對(duì)藥物作用的影響【目的】觀察不同給藥途徑對(duì)硫酸鎂、戊妥鈉作用的影響【原理給藥途徑不同，不僅影響藥物作用的快慢、強(qiáng)弱及維持時(shí)間的長(zhǎng)短，有時(shí)還可改變藥物作用的性質(zhì)，出現(xiàn)不同的藥理作用。甚至出現(xiàn)毒副作用，硫酸鎂即為一典型藥物。硫酸鎂為導(dǎo)瀉、利膽、降壓和抗驚厥藥，口服不易吸收，并使腸內(nèi)容物滲透壓升高，水分吸收Mg2+增加，在神經(jīng)肌肉接頭處對(duì)抗Ca2+，使運(yùn)動(dòng)神經(jīng)末稍釋放Ach減少，骨胳肌松弛，癱瘓?！静牧希ㄋ幤罚?0%硫酸鎂、0.5%戊妥1ml注射器、針頭、小鼠灌胃針頭、小鼠籠【實(shí)驗(yàn)方法不同給藥途徑對(duì)硫酸鎂作用的影響取小白鼠20只，隨機(jī)分為2組，觀察正?；顒?dòng)、排便、肌張力及呼吸情況。甲組以20%硫酸鎂溶液30mg/10g體重灌胃，乙組肌肉注射20硫酸鎂溶液30mg/10g察并記錄各鼠給藥后情況，將結(jié)果填入表1。1.不同途徑給予硫酸鎂后小鼠活動(dòng)情況

體 給（

排 肌張 呼 是否不同給藥途徑對(duì)戊妥鈉作用的影響取體重相近的小白鼠30只，隨機(jī)分為3組，觀察正?；顒?dòng)情況及翻正反射，然后用0.5%戊妥鈉溶液0.5mg/10g體重，用不同途徑給藥（甲組灌胃、乙組皮射、丙組腹腔注射），觀察三只小白鼠入睡情況。以翻正反射為入睡，翻正反射恢復(fù)為指標(biāo)，記錄小鼠入睡潛伏期（從給藥到入睡所需時(shí)間、睡眠期（從入睡到時(shí)間。2.不同途徑給藥小鼠入睡情況記錄鼠 給

（

給藥時(shí) 入睡時(shí) 時(shí) 是否【結(jié)果與處理【討論結(jié)合全組實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說(shuō)明硫酸鎂及戊妥鈉不同途徑給藥后，小鼠的反應(yīng)有何不同，分析同一藥物，同等劑量以不同途徑給藥為什么影響藥物效應(yīng)？【注意事項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)嚴(yán)格按照動(dòng)物體重計(jì)算給藥量。為消除實(shí)驗(yàn)誤差，保證各鼠抽取藥液及給藥分別由同一人完成取小鼠30只，隨機(jī)分為2組，甲組于正式實(shí)驗(yàn)前48小時(shí)皮射5%四氯化碳油溶mL/10g造模，乙組皮射等容積生理鹽水作對(duì)照。48小時(shí)候，給兩組小鼠均腹腔注射0.3%表1.肝功能狀態(tài)對(duì)戊妥鈉作用的影組別鼠號(hào)體重（g）藥物給藥量（ml）入睡潛伏期（min）睡眠持續(xù)期【結(jié)果與處理結(jié)合全組結(jié)果，說(shuō)明小鼠注射四氯化碳后，對(duì)戊妥鈉的作用有何影響，并分析其原因?！灸康模╰1/2、表觀分布容積（Vd）（CL學(xué)習(xí)藥物血藥濃度測(cè)定及藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)的計(jì)算方法?！驹矶鄶?shù)藥物在體內(nèi)按一級(jí)動(dòng)力學(xué)的規(guī)律消除，靜脈注射后，如果以血漿藥物濃度的對(duì)數(shù)值為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，其時(shí)量關(guān)系可成直線，該直線方程式為：logCt=logC0kt2.303一些結(jié)構(gòu)中含對(duì)氨基苯的化合物，如磺胺類藥物和酯類局麻藥等，在酸性環(huán)境中可與亞硝酸鈉起重氮化反應(yīng)，產(chǎn)生重氮鹽，該鹽在堿性環(huán)境中與酚類化合物（如麝香草酚）起偶聯(lián)反應(yīng)，形成橙紅色的偶氮化合物，通過(guò)測(cè)其光密度，即可推算出藥物濃度?！静牧纤幤罚夯前粪奏もc注射液、7.5%三氯醋酸溶液、500U/ml肝素生理鹽水溶液、亞硝酸鈉溶液、0.5%麝香草酚溶液、3%戊妥鈉溶液、生理鹽水器材：722型分光光度計(jì)、勻漿機(jī)、漩渦混勻器、微量移液器、瓶口分液器、嬰兒秤、兔解剖臺(tái)、離心管、吸量管、注射器、離心機(jī)、天平、手術(shù)器械?！緦?shí)驗(yàn)方法取離心管107.5%三氯醋酸5.8ml取家兔一只，稱重，一側(cè)耳緣靜脈注射3%戊妥鈉溶液1ml/kg，麻醉后固定，剪開(kāi)頸部皮膚，頸外靜脈。取注射器1只，用肝素生理鹽水沖洗后，由頸外靜脈取血0.4ml，放入預(yù)先存有肝素的肝燥試管中，準(zhǔn)確吸取0.2ml血液置于1號(hào)離心管，混勻。另一側(cè)耳緣靜脈注射磺胺嘧啶鈉注射液2ml/kg，分別于藥后、、、、、、45、60、90分鐘用同樣方法各取血0.2ml，分別放入210號(hào)離心管中，混勻，各管以1500rpm離心5min。取上清液1.5ml放入試管中，各管再分別加入0.5%亞硝酸鈉0.5ml，混勻后再加0.5%麝香草酚溶液1ml，混勻，以1號(hào)管為空白對(duì)照，在525nm波長(zhǎng)處，測(cè)其它各管的光根據(jù)預(yù)先的標(biāo)準(zhǔn)曲線或其回歸方程，由光密度查出或計(jì)算出給藥后不同時(shí)間的血藥濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為： CD為測(cè)得的光密度值?！窘Y(jié)果與處理將測(cè)得的不同時(shí)間點(diǎn)的光密度值填入下表，并計(jì)算血壓濃度和對(duì)數(shù)濃度表給藥后不同時(shí)間點(diǎn)血藥濃度試管 時(shí)間 藥前

Excel軟件繪制磺胺嘧啶鈉的藥時(shí)曲線，確定其模型。計(jì)算消除速率常數(shù)兩點(diǎn)法：取相中任意兩個(gè)給藥時(shí)間，把其相應(yīng)的血藥濃度代入下列計(jì)t為兩次取血的間隔時(shí)間。相的各點(diǎn)作直線回歸，得回歸方程：y=a+ k=－2.303計(jì)算t1/2：把根據(jù)兩點(diǎn)法或回歸法求得的k值，代入下列，計(jì)算t1/2。t1/2=0.693k求表觀分布容積Vd:將相直線延伸到縱坐標(biāo),其交點(diǎn)就是動(dòng)態(tài)平衡時(shí)的血藥濃度C0，代入下列計(jì)算：Vd（1/kg）=D0／D0為快速靜脈注射時(shí)的藥量。求清除率CL=0.693Vd/分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析磺胺嘧啶鈉在家兔體內(nèi)的分布特征，解釋血漿半衰期的意義及主要影響因素是什么？根據(jù)你的結(jié)果計(jì)算：給藥后12血藥濃度降低到2mg/L是什么時(shí)間？某藥的最低有效濃度為2mg%，血濃度半衰期為10.7小時(shí)，現(xiàn)測(cè)得患者血液中的藥物含量為4.7mg%，試問(wèn)尚能維持有效血濃度幾小時(shí)？【注意事項(xiàng)取血及各種液體的量要準(zhǔn)確。亞硝酸鈉溶液要放在棕色瓶?jī)?nèi)避光保存。本實(shí)驗(yàn)介紹的t1/2計(jì)算方法是粗略計(jì)算法。 20％磺胺嘧啶（sulfadaine，D、0.05%SD、7.515％三氯醋酸、0.5％亞硝酸鈉、0.5％麝香草酚（用20％NaOH配制、1000u/mL肝素生理鹽水。（0.0～1.0L【實(shí)驗(yàn)方法】參見(jiàn)圖鹽水灌胃0.1mL/10g作為對(duì)照。30、601只斷頭取血（1000u/mL肝素0.1mL抗凝，取血后立即搖勻。對(duì)照小鼠在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)同法取血。31號(hào)管（對(duì)照、2號(hào)管（30分）3號(hào)管（60分）內(nèi)加7.5％三氯醋酸各2.8mL，再加入抗凝血各0.2mL用振蕩器充分混勻。血液。稱取小鼠全腦，全腎及300-400mg肝組織，分別置于組織研磨器中，加入生理鹽水后為橙黃色。(詳細(xì)步驟見(jiàn)圖1)血 腦全 腎全 （ 組織勻

（3000轉(zhuǎn)/分0.5亞硝酸鈉血藥濃度

（525nm波長(zhǎng)

1（μg/g 血藥濃度(μg/mL)=樣品管濃度×稀釋倍數(shù)（30）組織內(nèi)濃度(μg/g=樣品管濃度×稀釋倍數(shù)實(shí)驗(yàn)五藥物半數(shù)致有效量的測(cè)定了解半數(shù)有效量測(cè)定的原理和方法。測(cè)定戊妥鈉致小鼠入睡的半數(shù)有效量（ED50藥物劑量與動(dòng)物反應(yīng)率存在曲線關(guān)系，其量效關(guān)系曲線為一條長(zhǎng)尾S型曲線，若將劑量數(shù)值換成對(duì)數(shù)值，此曲線變成一條上下對(duì)稱的S型曲線，這條曲線斜率最大，50%的反應(yīng)率對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)是logED50，代表大多數(shù)動(dòng)物的反應(yīng)水平，有實(shí)際意義。藥品：戊妥鈉。1ml【實(shí)驗(yàn)方法】G式求出公比r：D1,D2,D3,D4,D5……DmD1=Dn=最小劑量，D2=D1r;計(jì)算舉例：已知某藥在致死毒性實(shí)驗(yàn)中，Dm=187.5mg/kg;Dn=76.8mg/kg,G=5，依次計(jì)算D3，D4，及DG(D5)分別為120，150，187.5mg/kg。30.1-0.25mL/10g。母液濃度數(shù)（5組）分層隨機(jī)分組，使各組平均體重及分布盡可能一致，每組一般用小鼠10只（5只雄性，5只雌性。（0.2mL/10g52、3、4組順序給藥，再根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果決定是ED50lg1Xmip030100％而又大于70％時(shí)，可按下列校正計(jì)算：l 3pmpn g

4 4n1SlgED式中n―每組的動(dòng)物數(shù)。4）行”，即可算出ED50及95％可信限?！窘Y(jié)果與處理】表 小鼠腹腔注射戊妥鈉小鼠入睡情組 動(dòng)物

數(shù)(只)

綜合全組實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，戊托鈉劑量與效應(yīng)間存在何種關(guān)系【注意事項(xiàng)】凡藥后15分鐘內(nèi)翻正反射者均列為入睡注意藥量必須準(zhǔn)確。實(shí)驗(yàn)六藥物對(duì)麻醉動(dòng)物動(dòng)脈血壓的影響觀察傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥物對(duì)動(dòng)物（狗、兔或大鼠）動(dòng)脈血壓的影響及藥物之間的相互作用，分析藥物對(duì)受體的作用。傳出神經(jīng)系統(tǒng)藥物通過(guò)作用于心臟和血管平滑肌上相應(yīng)的受體產(chǎn)生新血管效應(yīng)，導(dǎo)致動(dòng)脈血壓的變化。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察腎上腺素受體和膽堿受體的機(jī)動(dòng)藥與拮抗間的相互作用，分析藥物的作用機(jī)制。藥品：0.01mg/ml、1mg/ml氯化乙酰膽堿溶液；0.5ml/kg甲基硫酸新斯的明溶液；10mg/ml硫酸阿托品溶液；0.1mg/ml鹽酸腎上腺素溶液；0.1mg/ml重酒石酸去甲腎上腺素溶液；0.05mg/ml硫酸異丙腎上腺素溶液。10mg/ml甲磺酸酚妥拉明溶液；10mg/ml鹽酸溶液；30mg/ml戊妥鈉溶液或200mg/ml烏拉坦溶液；500u/ml肝素溶液；生理鹽水?！緦?shí)驗(yàn)方法】麻醉、固定動(dòng)物：取狗（或兔、大鼠）1只，稱重，以戊妥鈉30mg/kg腹腔注（40mg/kg腹腔注射，兔靜脈注射烏拉坦1.0g/kg，麻醉后仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)啟動(dòng)電腦，確認(rèn)USB接口已經(jīng)連通，打開(kāi)BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)軟件。在“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目”下拉菜單中選擇“循環(huán)實(shí)驗(yàn)”“兔動(dòng)脈血壓調(diào)節(jié)”，或在“輸入信號(hào)”下拉菜單中選擇“11通道”連接壓力換能器。手術(shù)：剪去頸部及一側(cè)的毛。在頸部做長(zhǎng)約10cm（兔約3~4cm）的正中切口，分離出氣管并做一“T”形切口，插入氣管插管，用粗線接扎固定，以保持呼吸道通暢。于氣管旁分離出一側(cè)頸總動(dòng)脈，結(jié)扎遠(yuǎn)心端；在相距3~5cm的近心端放置動(dòng)脈夾以阻剪一“V”形切口，將動(dòng)脈插管朝向心方向插入，用線結(jié)扎固定。將壓力傳感器壓力調(diào)整到100~120mmHg。打開(kāi)動(dòng)脈夾及壓力傳感器上的三通管，動(dòng)脈壓的波動(dòng)即可通過(guò)-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)軟件描記下來(lái)。在一側(cè)處，作約長(zhǎng)c的切口，分離出股靜脈。將股靜脈遠(yuǎn)心端結(jié)扎，在其近心端剪一小口，朝向心端插入已接滴定管的靜脈套管，接扎固定，以備給藥和輸液用。描記血壓變化圖形：先記錄正常血壓曲線，然后依次由股靜脈給予下列三組藥物。每次給藥后均注入3ml生理鹽水，以沖洗管內(nèi)殘留藥物。待血壓恢復(fù)原水平或平穩(wěn)后再給下一藥物。觀察擬腎上腺素藥對(duì)血壓的作用及α受體阻斷藥對(duì)其作用的影響。①0.1mg/ml鹽酸腎上腺素溶液②0.1mg/ml重酒石酸去甲腎上腺素溶液0.05mg/ml硫酸異丙腎上腺素溶液10mg/ml甲酸酚妥拉明溶液0.2ml/kg⑤5min觀察觀察擬腎上腺素藥對(duì)血壓的作用及β受體阻斷藥對(duì)其作用的影響。0.1mg/ml鹽酸腎上腺素溶液0.1mg/ml重酒石酸去甲腎上腺素溶液0.05mg/ml硫酸異丙腎上腺素溶液④10mg/ml甲鹽酸溶液0.1ml/kg，緩慢注入5min觀察擬膽堿藥對(duì)血壓的作用及抗膽堿藥對(duì)其作用的影響。0.01mg/ml氯化乙酰膽堿溶液0.5mg/ml甲基硫酸新斯的明溶液10mg/ml硫酸阿托品溶液1mg/ml氯化乙酰膽堿溶液【結(jié)果與處理】將描記的曲線圖打印剪貼，標(biāo)明題目、時(shí)間、地點(diǎn)、室溫、實(shí)驗(yàn)者及主要條件。分析圖形變化原因；也可制成表格，將每次給藥前后血壓變化值填入表中。實(shí)驗(yàn)七藥物對(duì)離體兔腸的作用學(xué)習(xí)動(dòng)物離體腸平滑肌的方法，觀察擬膽堿藥和抗膽堿藥對(duì)離體兔腸平滑肌的離體兔腸平滑肌在適當(dāng)?shù)臈l件下可保持較長(zhǎng)時(shí)間的自動(dòng)節(jié)律性收縮。根據(jù)受體在腸平滑肌中分布的特點(diǎn)，可觀察藥物的作用，并可借助工具藥分析其作用原理。藥品：臺(tái)氏液；10-3mol/L氯化乙酰膽堿溶液；510-3mol/L硫酸阿托品溶液；10-氯化鋇溶液。BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，張力換能器，HW-300型恒溫平滑肌槽，多用電源插座，雙凹夾，L1ml注射器，手術(shù)器械一套?！緦?shí)驗(yàn)方法】HW-300型恒溫平滑肌槽，恒溫370.5℃。啟動(dòng)電腦，確認(rèn)USB接口已經(jīng)連通，打開(kāi)BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)軟件。在“實(shí)驗(yàn)1標(biāo)本：取家兔1只，擊頭致死，，取出空?qǐng)龌蚴改c，放入盛有臺(tái)氏液的器皿中，用吸管吸取臺(tái)氏液將腸內(nèi)容物沖凈，剝離腸系膜。將腸管剪成約2cm長(zhǎng)的腸段備用。將腸管兩端對(duì)角穿線，將其安放在盛有臺(tái)氏液的平滑肌槽中，上端連接張力換能器，下端系于L型鉤上，通入空氣供氧。調(diào)整換能器高度，給腸管1g左右的負(fù)荷，描記正常收縮曲線，待腸肌穩(wěn)定10min后，依次加藥并記錄收縮曲線的變化。每次加藥后均不換液。向浴槽中加入10-3mol/L氯化乙酰膽堿溶液當(dāng)腸段收縮明顯時(shí)，立即加入510-3mol/L硫酸阿托品溶液當(dāng)出現(xiàn)預(yù)期作用時(shí)，加入10-3mol/L氯化乙酰膽堿溶液0.2ml10-1mol/L氯化鋇溶液0.2ml510-3mol/L硫酸阿托品溶液0.2ml3min【結(jié)果與處理】將描記的曲線圖打印剪貼，標(biāo)明題目、時(shí)間、地點(diǎn)、室溫、實(shí)驗(yàn)者及主要條件（如腸段長(zhǎng)度、走紙速度、加藥標(biāo)記等。將加藥后張力及頻率變化情況列表表示。【注意事項(xiàng)】向浴管內(nèi)加藥時(shí)，不要觸碰連接線，也藥滴到管壁上關(guān)閉電腦時(shí)，確認(rèn)USB接口已經(jīng)關(guān)閉，再關(guān)閉BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)軟件，關(guān)閉電腦。實(shí)驗(yàn)八藥物的鎮(zhèn)痛作用一、扭體法觀察度冷丁的鎮(zhèn)痛作用，掌握腹腔注射刺激性物質(zhì)引起動(dòng)物扭體反應(yīng)的方法，并觀察動(dòng)物的扭體反應(yīng)。一些化學(xué)物質(zhì)，如醋酸、酒石酸銻鉀、緩激肽等注入腹腔，可引起動(dòng)物的疼痛反應(yīng)，其表現(xiàn)為腹部?jī)?nèi)凹、后腿伸張、臀部高起、軀體，這種現(xiàn)象稱為扭體反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)觀察藥物對(duì)扭體反應(yīng)的影響。0.2%度冷丁生理鹽水、生理鹽水、0.05%酒石酸銻鉀溶液。動(dòng)物：小白鼠。取體重18-22g的健康小鼠30只，隨機(jī)分為兩組，分別腹腔注射下列藥品0.1ml／10g0.2%度冷丁生理鹽水，乙組生理鹽水。藥后分鐘各鼠均腹腔注射0.05%酒石酸銻鉀溶液0.1ml／10g，觀察10分鐘內(nèi)各組出現(xiàn)扭體反應(yīng)的動(dòng)物鼠，計(jì)算藥物的鎮(zhèn)痛百分率P。P=（實(shí)驗(yàn)組無(wú)扭體反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)－對(duì)照組無(wú)扭體反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)）／對(duì)照組扭體反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)100%【結(jié)果與處理】組 藥物與劑（

扭體反應(yīng)鼠數(shù)

扭體反應(yīng)百分率【注意事項(xiàng)】１、酒石酸銻鉀溶液要用時(shí)現(xiàn)配，存放過(guò)久往往使其作用減弱。２、酒石酸銻鉀溶液的用量應(yīng)隨室溫的變化作適當(dāng)?shù)恼{(diào)整?，F(xiàn)舔后足動(dòng)作，再次按下計(jì)時(shí)開(kāi)關(guān)停止計(jì)時(shí)，立即將鼠取出。4分鐘后重新測(cè)試，如果兩次痛覺(jué)g乙組：腹腔注射0.1mL/10g生理鹽水作對(duì)照。60秒內(nèi)不出現(xiàn)痛覺(jué)反應(yīng)，則按60秒計(jì)取出實(shí)驗(yàn)鼠，不再繼續(xù)刺激。 YLS-3E電子壓痛儀，當(dāng)動(dòng)物安靜后，按“開(kāi)始”鍵或踏下腳踏開(kāi)實(shí)驗(yàn)九比妥鈉的抗戊四氮驚厥作【目的】觀察比妥鈉對(duì)抗戊四氮引起的驚厥作用本實(shí)驗(yàn)采用藥物性驚厥實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?。戊四氮可直接興奮延腦呼吸中樞，過(guò)量則興奮脊髓引起驚厥。根據(jù)用藥后能否抑制驚厥的發(fā)作，可篩選具有抗驚厥作用的藥物。藥品：5mg/ml比妥鈉溶液；0.5mg/ml戊四氮溶液；生理鹽水。器材：天平，小鼠籠，注射器?！緦?shí)驗(yàn)方法】取小鼠30只，稱重，分為甲乙兩組，分別腹腔注射下列藥物0.1ml/10g。甲組：苯妥鈉溶液，乙組：生理鹽水。藥后30min各組小鼠均皮射戊四氮溶液0.1ml/10g，觀察20min內(nèi)各鼠是否出現(xiàn)驚厥（以后肢伸直為驚厥指標(biāo)。將數(shù)據(jù)記錄入下表中1小鼠注射戊四氮后反應(yīng)情況體重（給藥量（是否出現(xiàn)驚厥甲乙【結(jié)果與處理】綜合各組實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入自行設(shè)計(jì)的表內(nèi)。x2檢驗(yàn)判定給藥組與對(duì)照組驚厥發(fā)生率有否顯著性差異。比較各組小鼠注射戊四氮后的反應(yīng)情況，并解釋原因，【注意事項(xiàng)】實(shí)驗(yàn) 器材：BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),兔手術(shù)臺(tái),注射器(1mL，2mL，5mL)，微量注射泵和手術(shù)--。器材：BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，動(dòng)物人工呼吸機(jī)，微量注射泵。10mL/kg1通道連接，記錄Ⅱ?qū)?lián)心電。右頸總動(dòng)脈插管，緩緩?fù)七M(jìn)，使其通過(guò)主動(dòng)脈瓣到達(dá)左3BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（參數(shù)設(shè)定：實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目-循（VEDP（LMVP每5min記錄一次上述各指標(biāo)，以心電圖上出現(xiàn)心律失常為標(biāo)志。表1強(qiáng)心苷對(duì)家兔在竭心臟的作給藥情 戊妥毒毛旋花子苷實(shí)驗(yàn)十二對(duì)小鼠尿量及電解質(zhì)的影20-藥品：1%，生理鹽器材：小鼠代謝籠，注射器，燒杯，量筒，6410火焰光度計(jì)20.5mL/10g灌胃，20分鐘后給藥組每只動(dòng)物給予1%0.1mL/10gip，對(duì)照組給予等容量的生理鹽水。注射后立即將小白鼠放入代謝籠，收集30min尿量。排出量（毫克）=所測(cè)離子讀數(shù)（毫摩爾/升）尿量（升）稀釋倍數(shù)實(shí)驗(yàn)十三藥物的體外抗凝血作用比較幾種藥物的抗凝作用特點(diǎn)，根據(jù)各被測(cè)管血液凝固時(shí)間的不同，可初篩具有體外抗凝作用的藥物，根據(jù)加入CaCl2對(duì)各管凝血時(shí)間的影響，125U/ml肝素溶液、4%枸櫞酸鈉溶液、生理鹽水、2%CaCl2溶液、受試物。器材：恒溫水浴、試管架、小試管、微量加樣器、注射器、秒表、小玻棒?！緦?shí)驗(yàn)方法】取小試管4支，A管生理鹽水，B125u/ml肝素溶液，C4%枸櫞酸鈉溶液，0.1ml將冷凍的家兔抗凝血漿置于37°C水浴中融化，分別向A、B、C、D四支試管中分別加入抗凝血漿0.9ml37°C孵育3min。向4支小試管分別2%CaCl20.1ml，搖勻，立即放入370.5°C恒溫水浴中，開(kāi)始計(jì)錄時(shí)間。每隔30秒，將試管輕輕倒轉(zhuǎn)一次，觀察記錄凝血終點(diǎn)時(shí)間（以將試管慢慢倒轉(zhuǎn)，血液不流出為終點(diǎn)。比較4支試管的凝血時(shí)間，20min后，向不凝試管中再次加入2%CaCl20.1ml，混勻，再次觀察血凝，記錄凝血時(shí)間。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄如下表中1藥物體外凝血時(shí)間試管 藥物（ 凝血時(shí)間(分 凝血時(shí)間(分125u/ml4%【結(jié)果與整理】比較各組藥物凝血時(shí)間的差異，分析原因，判定各藥物的體外抗凝血作用強(qiáng)弱和初步作用機(jī)制?！咀⒁馐马?xiàng)】加兔血后立即用小玻棒將血液與試管內(nèi)的藥液攪勻。攪拌時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。須嚴(yán)格控制水浴溫度例為91），輕輕混勻，防止血液凝固。為主要原因的休克。有效藥物多數(shù)能延緩或Ⅲ或Ⅳ級(jí)哮喘反應(yīng)的發(fā)生。150-200g藥品：20mg/mL磷酸組胺溶液，受試藥物，生理鹽水超過(guò)150秒者認(rèn)為不敏感，不予選用。動(dòng)物一旦出現(xiàn)，應(yīng)立即從霧化箱中取出，必要時(shí)輔以人致跌倒的時(shí)間。1鼠 藥

甲 生理鹽乙 受試藥實(shí)驗(yàn)十 1200.25%50mg/kg，乙組注射等容鼠 藥

甲 生理鹽乙 K=（lgOD1-lgOD2）/（t2-t1K值的大小除與吞噬細(xì)胞的吞噬活性有關(guān)外，還與小鼠肝、脾重量有關(guān)。因此，K值需經(jīng)下3 WWL3式中α為校正后的吞噬指數(shù)，W為小鼠體重，WLS為肝、脾重量。α值表明小鼠單核吞噬細(xì)胞實(shí)驗(yàn)十 組織水腫等炎癥反應(yīng)，最后致足跖體積變大。吲哚美辛通過(guò)抑制素合成酶，減少致炎物質(zhì) 器材：大鼠固定器，注射器，YLS-7A足趾容積測(cè)量?jī)x，記號(hào)筆。鮮蛋清0lmL。1

藥 藥量

.實(shí)驗(yàn)十 觀察抗腫瘤藥物體外對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。掌握細(xì)胞培養(yǎng)的基本操作，熟悉細(xì)胞毒類藥物的體外篩選方法。四氮唑（MTT）是一種能接受氫原子的?；罴?xì)胞線粒體中與NADP相關(guān)的脫氫酶在細(xì)胞內(nèi)可將黃色的MTT轉(zhuǎn)化成不溶性的藍(lán)紫色的甲月替，而死細(xì)胞則無(wú)此功能。用二甲基亞砜溶解后，在一定波長(zhǎng)下用酶標(biāo)儀測(cè)定光密度值，即可定量測(cè)出細(xì)胞的存活率。K562（人紅白血病細(xì)胞試劑與藥品：MTT、5氟尿嘧啶（5-FU、無(wú)菌生理鹽水、RPMI1640（10%胎牛、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素。量移液器、多通道移液器、滅菌槍頭、槍頭盒、細(xì)胞計(jì)數(shù)板、蓋玻片?！緦?shí)驗(yàn)方法】1、細(xì)胞形態(tài)觀察打開(kāi)顯微鏡電源，2、活細(xì)胞計(jì)數(shù)取細(xì)胞懸液0.4ml0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液0.1ml5min15min內(nèi)用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)活細(xì)胞數(shù)，未染色的是活細(xì)胞，死細(xì)胞呈藍(lán)色。3、抗腫瘤藥物體外對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用超凈工作臺(tái)預(yù)先紫外噴壺噴灑臺(tái)面點(diǎn)燃燈，將實(shí)驗(yàn)物品分類擺好取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期K562細(xì)胞，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)密度，無(wú)菌臺(tái)內(nèi)將細(xì)胞用移液管將細(xì)胞吹打混勻，取一滴進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)；調(diào)整細(xì)胞密度至5×104個(gè)/ml，混勻，用多通道移液器吸取90μl細(xì)胞懸液加入5個(gè)平行孔。實(shí)驗(yàn)組加入10μl無(wú)菌五氟脲嘧啶溶液，對(duì)照組加入10μl無(wú)菌生理鹽水，將培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱內(nèi)，37℃、5%CO2條件下培養(yǎng)48~72小時(shí)。將實(shí)驗(yàn)物品包扎好，拿出超凈工作臺(tái)，噴撒臺(tái)面，拉下玻璃門，關(guān)閉風(fēng)機(jī)和照明電源。48hMTT溶液（5mg/ml用生理鹽水配制）20l/4小時(shí)后，加入三聯(lián)液（10%SDS-5%異丁醇-0.01mol/lHCl）50l/CO2培養(yǎng)箱中過(guò)夜。然后用酶標(biāo)儀測(cè)OD570值。按下列計(jì)算被測(cè)物對(duì)癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率?！窘Y(jié)果與處理】

對(duì)照組OD值治療組OD對(duì)照組1、將顯微鏡下觀察到的幾種細(xì)胞株形態(tài)用文字描述出來(lái)，記錄在下表中。1.倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞名 細(xì)胞形2、細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果3、將測(cè)得OD值填入下表，計(jì)算抑制率和IC50IC50可通過(guò)軟件計(jì)算。2.藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用組別 濃度（μg/ml） OD（X_±SD) 抑制率（%） 對(duì)照組5-與對(duì)照組比較，加入不同濃度的5-FUOD5-FU對(duì)細(xì)胞抑制作用與濃度間的關(guān)系?！咀⒁馐马?xiàng)】任何與培養(yǎng)物直接或間接接觸的物品或液體都需滅菌，不得用手直接觸摸實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，嚴(yán)禁對(duì)著操作臺(tái)實(shí)驗(yàn)十九藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用觀察藥物對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)作用，熟悉凋亡的檢測(cè)方法，了解組化技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)在藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用。組織細(xì)胞內(nèi)含有酸性物質(zhì)和堿性物質(zhì)，細(xì)胞的酸性物質(zhì)與堿性的陽(yáng)離子結(jié)合，而細(xì)胞核的堿性物質(zhì)與酸性的陰離子結(jié)合，使其中酸性細(xì)胞核被堿性的蘇木素染成藍(lán)色，而堿性的胞細(xì)胞株：hela（人宮頸癌細(xì)胞株）；A549（人肺細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)試劑：絲裂霉素C，蘇木素；伊紅；鹽酸；乙醇，多聚；二甲苯；PBS；平衡酚；氯仿；異丙醇；細(xì)胞裂解液（50mMTrispH8.0、100mMEDTANa2、100mMNaCl0.5%SDS(十二烷基磺酸鈉）；上樣緩沖液（20%甘油、0.1MEDTA、100ml泳緩沖液（Trisebase4.84g、EDTA6.73g、冰醋酸1.14ml、pH8.5；瓊脂糖。細(xì)胞培養(yǎng)瓶；細(xì)胞培養(yǎng)板；試劑瓶；小燒杯；眼科鑷； HEDNA1mmol/LEDA0.25%NP-40RNaseA（終濃度為10mg/