造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)專家講座

第一篇造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)

造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第1頁(yè)造血（hematopoiesis）是指血細(xì)胞生成過(guò)程。造血干細(xì)胞在造血微環(huán)境中增殖、分化為各類血細(xì)胞。造血系統(tǒng)經(jīng)過(guò)造血器官、造血干細(xì)胞、造血調(diào)控因子等組成復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)來(lái)維持血液細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第2頁(yè)第一節(jié)造血器官和造血微環(huán)境

一、造血器官人體造血器官是生成血液器官起源于中胚葉，主要包含骨髓、胸腺、淋巴結(jié)、肝臟和脾等其造血過(guò)程分為胚胎期造血和出生后造血造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第3頁(yè)（一）胚胎期造血器官

人類血液細(xì)胞首先在卵黃囊中形成，肝、脾、胸腺和骨髓均參加造血依據(jù)發(fā)育過(guò)程中造血中心轉(zhuǎn)移，胚胎期造血又分為三個(gè)時(shí)期：

卵黃囊造血期

、肝造血期

、骨髓造血期造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第4頁(yè)1．卵黃囊造血期（中胚葉造血期）始于胚胎3周左右，卵黃囊壁上中胚層細(xì)胞開(kāi)始分化聚集成團(tuán)，稱為血島（bloodisland）。血島是人類最初造血中心。血島外周細(xì)胞逐步變長(zhǎng)，分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第5頁(yè)血島中央細(xì)胞形成多能造血干細(xì)胞，繼爾分化成幼稚紅細(xì)胞，以后大量多能造血干細(xì)胞遷移至肝、脾、骨髓和淋巴組織繼續(xù)增殖、分化為干細(xì)胞。胚胎

2個(gè)月后，卵黃囊逐步退化、萎縮,被肝、脾取代其造血功效。

造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第6頁(yè)2．肝造血期

始于胚胎第6周，是卵黃囊血島造血干細(xì)胞移植到肝臟結(jié)果，以造紅細(xì)胞為主，后期可生成粒細(xì)胞和巨核細(xì)胞。肝臟是胚胎2~5個(gè)月造血中心，連續(xù)至第7個(gè)月時(shí)，逐步被骨髓造血替換。另外脾、胸腺、淋巴結(jié)等也參加造血。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第7頁(yè)

胎肝造血規(guī)律：造血細(xì)胞分布在肝竇、肝細(xì)胞索之間。胎肝造血以幼稚紅細(xì)胞為主，巨核細(xì)胞常與紅系細(xì)胞在一起。胎肝造血細(xì)胞密度隨妊娠日期不一樣而改變。證實(shí)肝造血在第15周以前為上升期，15~30周為旺盛期，24周以后為減退時(shí)期，至出生前停頓。故肝造血為第二代造血。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第8頁(yè)脾造血

始于胚胎第3個(gè)月，主要生成紅細(xì)胞、粒細(xì)胞，第5個(gè)月時(shí)產(chǎn)生淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，而紅細(xì)胞和粒細(xì)胞產(chǎn)生逐步降低。至出生時(shí)，脾已成為產(chǎn)生淋巴細(xì)胞器官。胸腺

在胚胎期主要產(chǎn)生淋巴細(xì)胞和少許紅細(xì)胞、粒細(xì)胞，胚胎后期成為誘導(dǎo)和分化T淋巴細(xì)胞器官。淋巴結(jié)

在胚胎早期可產(chǎn)生紅細(xì)胞，但時(shí)間很短，在胚胎4個(gè)月以后，成為終生制造淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞器官。

造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第9頁(yè)3．骨髓造血期自胚胎第14周骨髓開(kāi)始造血，5個(gè)月以后成為胚胎期造血中心。骨髓中造血干細(xì)胞起源于肝、脾種植，可維持終生。胚胎期骨髓主要生成紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和巨核細(xì)胞，也生成淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。

造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第10頁(yè)胚胎期造血三個(gè)時(shí)期是不能截然分開(kāi)，而是此消彼長(zhǎng)，互為交織。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第11頁(yè)（二）出生后造血出生后造血主要靠骨髓。在正常情況下骨髓是唯一能產(chǎn)生紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板場(chǎng)所，也生成淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。脾和淋巴結(jié)為終生制造淋巴細(xì)胞器官。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第12頁(yè)1．骨髓

骨髓是位于骨髓腔內(nèi)海綿樣膠狀組織，有紅骨髓和黃骨髓之分。嬰幼兒骨髓幾乎都參加造血，即全為紅骨髓。大約從5歲開(kāi)始，長(zhǎng)骨髓腔內(nèi)出現(xiàn)脂肪細(xì)胞，隨年紀(jì)增加，長(zhǎng)骨遠(yuǎn)端紅骨髓逐步被脂肪組織代替轉(zhuǎn)化為黃骨髓。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第13頁(yè)到18歲以后，紅骨髓只限于顱骨、脊椎骨、肋骨、胸骨、骼骨以及長(zhǎng)骨近心端。所以，在作骨髓穿刺或活檢時(shí)，成人可選擇部位是骼骨、棘突、胸骨等處，脛骨粗隆則只適合用于2歲以下幼兒。成人紅骨髓和黃骨髓約各占50%，但黃骨髓仍有造血潛能，當(dāng)機(jī)體需要時(shí)又轉(zhuǎn)變?yōu)榧t骨髓而參加造血。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第14頁(yè)2.淋巴器官

分為中樞淋巴器官和周圍淋巴器官。中樞淋巴器官主要包含胸腺和骨髓，主導(dǎo)淋巴細(xì)胞產(chǎn)生、增殖、分化和成熟。周圍淋巴器官主要包含淋巴結(jié)、脾、腸粘膜相關(guān)淋巴組織等，是淋巴細(xì)胞聚集和免疫應(yīng)答發(fā)生場(chǎng)所。

造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第15頁(yè)(1)胸腺（thymus）來(lái)自骨髓淋巴干細(xì)胞經(jīng)增殖和在胸腺素作用下，誘導(dǎo)分化為免疫活性細(xì)胞，進(jìn)人胸腺髓質(zhì)，然后釋放人血并遷移到外周淋巴器官胸腺依賴區(qū)成為胸腺依賴淋巴細(xì)胞即T細(xì)胞。青春期后，胸腺逐步退化，被脂肪組織取代。

造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第16頁(yè)(2)淋巴結(jié)（lymphnode）淋巴結(jié)外周部分為皮質(zhì)，B細(xì)胞在淋巴結(jié)皮質(zhì)區(qū)濾泡中央增殖、發(fā)育；皮質(zhì)深層和濾泡間隙為副皮質(zhì)區(qū)，富含由胸腺遷移而來(lái)T細(xì)胞，又稱胸腺依賴區(qū)；淋巴結(jié)中央部分為髓質(zhì)，髓質(zhì)區(qū)B細(xì)胞、漿細(xì)胞及巨噬細(xì)胞集結(jié)組成髓索造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第17頁(yè)(3)脾脾切面大部分呈暗紅色，稱紅髓，其中散布著許多灰白色小結(jié)節(jié)，為白髓。白髓是淋巴細(xì)胞聚集處，在中央小動(dòng)脈周圍主要是T細(xì)胞，是脾胸腺依區(qū)；白髓中脾小結(jié)位于脾動(dòng)脈周圍淋巴鞘內(nèi)一側(cè)，內(nèi)有生發(fā)中心，主要由B細(xì)胞組成。脾含有造血、儲(chǔ)血及免疫等各種功效，是T、B細(xì)胞分化成熟主要場(chǎng)所之一。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第18頁(yè)3.髓外造血正常情況下，胎兒出生2個(gè)月以后，骨髓以外組織如肝、脾淋巴結(jié)等不再制造紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板。但在一些病理情況下，如骨髓纖維化、骨髓增生性疾病及一些貧血，這些組織又恢復(fù)造血功效（?？稍斐蓪?duì)應(yīng)器官腫大），稱為髓外造血。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第19頁(yè)髓外造血是機(jī)體對(duì)血細(xì)胞需求尤其增高或?qū)撬柙煅系K一個(gè)賠償，尤其常見(jiàn)于兒童。這種代償作用有限且不完善。髓外造血部位除肝、脾、淋巴結(jié)外，也能夠累及胸腺、腎、腎上腺、腹腔后脂肪及胃腸道。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第20頁(yè)二、造血微環(huán)境造血微環(huán)境（hematopoieticmicroenvironment）是指造血細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育內(nèi)環(huán)境。由微血管系統(tǒng)、末梢神經(jīng)、基質(zhì)、基質(zhì)細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子等組成，不但是造血細(xì)胞支架，還可經(jīng)過(guò)細(xì)胞之間相互作用和釋放細(xì)胞因子影響造血活動(dòng)。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第21頁(yè)（一）骨髓微血管系統(tǒng)骨髓微血管系統(tǒng)是造血微環(huán)境主要組成部分,其功效在于向造血組織輸送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，排出代謝廢物，從而有利于造血細(xì)胞更新。毛細(xì)血管注人管腔膨大靜脈竇，再彼此溝通聚集成集合竇，最終進(jìn)人中央靜脈。靜脈竇與集合竇（統(tǒng)稱為骨髓血竇）是骨髓血管系統(tǒng)關(guān)鍵結(jié)構(gòu)。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第22頁(yè)血竇（Sinusoid）是動(dòng)脈毛細(xì)血管分成不規(guī)則竇狀腔隙。血竇內(nèi)是成熟血細(xì)胞，血竇之間則充以骨髓實(shí)質(zhì)(造血索)，主要是活躍造血實(shí)質(zhì)細(xì)胞。血竇壁是由連續(xù)內(nèi)皮細(xì)胞、顆粒狀基底膜和外皮細(xì)胞所組成，其竇壁薄厚是可變,絕大多數(shù)竇壁僅有一層內(nèi)皮細(xì)胞組成，平時(shí)無(wú)孔，當(dāng)血細(xì)胞穿過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)形成暫時(shí)通道。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第23頁(yè)不一樣造血功效骨髓其微血管結(jié)構(gòu)不一樣造血功效旺盛時(shí)，骨髓血竇很豐富，竇壁孔隙增多；造血功效低下骨髓，骨髓血竇降低，無(wú)造血功效黃骨髓中，微血管呈毛細(xì)管狀。骨髓微血管系統(tǒng)經(jīng)過(guò)調(diào)整物質(zhì)與能量交換、血細(xì)胞釋放、組織內(nèi)酸堿度、氧和二氧化碳分壓等影響造血細(xì)胞增殖和分化。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第24頁(yè)（二）骨髓神經(jīng)骨髓神經(jīng)起源于脊神經(jīng)，其神經(jīng)供給十分廣泛，骨髓全部動(dòng)脈都伴有神經(jīng)束，其分支纏繞于動(dòng)脈壁呈網(wǎng)狀，神經(jīng)纖維終止于動(dòng)脈壁平滑肌纖維。骨髓小動(dòng)脈上交感神經(jīng)纖維受延髓血管運(yùn)動(dòng)中樞控制，但絕大多數(shù)骨髓微血管床主要受血管活性物質(zhì)調(diào)整。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第25頁(yè)骨髓神經(jīng)作用：（1）經(jīng)過(guò)調(diào)整血管舒縮，改變血竇大小及血流速度快慢等影響造血（2）神經(jīng)分泌體液因子可直接作用于造血細(xì)胞（3）基質(zhì)細(xì)胞分泌細(xì)胞因子調(diào)整造血功效造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第26頁(yè)（三）基質(zhì)細(xì)胞及其分泌調(diào)控因子骨髓基質(zhì)細(xì)胞包含成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等，它們經(jīng)過(guò)與造血干細(xì)胞親密接觸起到支持和營(yíng)養(yǎng)造血細(xì)胞作用。各種基質(zhì)細(xì)胞都有分泌細(xì)胞因子功效，其分泌生物大分子物質(zhì)都與造血細(xì)胞粘附相關(guān)，可粘附固定造血細(xì)胞。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第27頁(yè)基質(zhì)細(xì)胞還分泌各種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素、FLT-3配基、干細(xì)胞因子、粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞集落刺激因子、巨噬細(xì)胞集落刺激因子等，這些細(xì)胞因子不但直接作用于造血細(xì)胞，而且作用于基質(zhì)細(xì)胞，改變基質(zhì)細(xì)胞增殖和分泌情況，誘導(dǎo)其它細(xì)胞因子生成。對(duì)造血細(xì)胞增殖、分化和發(fā)育成熟起主要調(diào)控作用。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第28頁(yè)Goon....造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第29頁(yè)第二節(jié)

造血細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育和造血調(diào)控一、造血細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育胚胎造血組織發(fā)育是血細(xì)胞發(fā)生、發(fā)育研究基礎(chǔ)，也是血液學(xué)研究必不可少前提。造血細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育是一個(gè)連續(xù)不停復(fù)雜過(guò)程，造血器官內(nèi)各種造血細(xì)胞在造血微環(huán)境中經(jīng)過(guò)細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用，在各種細(xì)胞因子誘導(dǎo)下，按一定規(guī)律發(fā)育成為各種成熟血細(xì)胞，然后釋放入血循環(huán)中。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第30頁(yè)

（一）造血細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育概念造血細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育包含增殖、分化、成熟和釋放四個(gè)方面。造血細(xì)胞增殖是指血細(xì)胞經(jīng)過(guò)分裂而使其數(shù)量增加過(guò)程。有絲分裂是造血細(xì)胞主要增殖方式。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第31頁(yè)母細(xì)胞有絲分裂后形成子細(xì)胞同時(shí)都傾向分化成熟。子細(xì)胞還可深入增殖，每增殖一次就越傾向于深入分化。普通來(lái)講，一個(gè)原始細(xì)胞到成熟細(xì)胞可經(jīng)過(guò)4~5次分裂，如1個(gè)原始紅細(xì)胞可產(chǎn)生32個(gè)或64個(gè)成熟紅細(xì)胞。而巨核細(xì)胞增殖（連續(xù)雙倍增殖DNA）與其它系統(tǒng)血細(xì)胞增殖方式不一樣，每增殖一次，核增大一倍，但胞質(zhì)并不分裂，屬多倍體細(xì)胞，形態(tài)上也表現(xiàn)為從原始到成熟胞體逐步變大。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第32頁(yè)造血細(xì)胞分化（differentiation）是指細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中失去一些潛能又取得新功效過(guò)程，即由多潛能轉(zhuǎn)變?yōu)閱螡撃苓^(guò)程。分裂后細(xì)胞在形態(tài)和功效上產(chǎn)生了新特征，分化過(guò)程是不可逆。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第33頁(yè)造血細(xì)胞成熟（maturation）是細(xì)胞從造血干細(xì)胞定向分化后，從原始經(jīng)幼稚到成熟細(xì)胞發(fā)育過(guò)程，血細(xì)胞越成熟其形態(tài)越易識(shí)別，功效也日趨完善。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第34頁(yè)成熟血細(xì)胞在骨髓內(nèi)經(jīng)過(guò)“髓血屏障”釋放入血循環(huán)中，各種調(diào)整原因控制著血細(xì)胞增殖、分化、成熟和釋放，從而維持血細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量穩(wěn)定。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第35頁(yè)（二）造血細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程依據(jù)造血細(xì)胞功效和形態(tài)特征，造血細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程可為：造血干細(xì)胞、造血祖細(xì)胞、原始及幼稚細(xì)胞三個(gè)階段。原始及幼稚細(xì)胞階段細(xì)胞是在骨髓涂片中從形態(tài)學(xué)上能夠識(shí)別各系各階段血細(xì)胞。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第36頁(yè)造血干細(xì)胞階段造血組細(xì)胞階段原始及幼稚細(xì)胞階段成熟細(xì)胞造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第37頁(yè)二、造血干／祖細(xì)胞干細(xì)胞（stemcell）是含有自我復(fù)制和多向分化能力細(xì)胞。早期胚胎中原始生殖細(xì)胞即胚胎干細(xì)胞，含有廣泛發(fā)育和分化潛能，稱為全能干細(xì)胞（totipotenthematopoieticstemcell,THSC）。胚胎干細(xì)胞可分化為各類組織干細(xì)胞，造血組織中存在造血干細(xì)胞、血管干細(xì)胞和間質(zhì)干細(xì)胞。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第38頁(yè)（一）造血干細(xì)胞造血干細(xì)胞（hematopoieticstemcell,HSC）概念于20世紀(jì)初就有些人提出，但當(dāng)初含義不甚明確，研究?jī)?nèi)容含糊不清，直至發(fā)覺(jué)了脾集落形成單位之后，造血干細(xì)胞在六七十年代引發(fā)了人們關(guān)注。伴隨新技術(shù)發(fā)展，造血干細(xì)胞在臨床應(yīng)用等方面潛在巨大價(jià)值被逐步發(fā)覺(jué)，當(dāng)前已成為生命科學(xué)研究領(lǐng)域熱門課題。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第39頁(yè)造血干細(xì)胞又稱多能干細(xì)胞，由中胚層細(xì)胞分化而來(lái)，是各種血細(xì)胞始祖，含有高度自我更新、多向分化和增殖能力，而且在造血組織中含量極少，其形態(tài)酷似小淋巴樣細(xì)胞而難以識(shí)別。在體內(nèi)造血干細(xì)胞多數(shù)處于Go期。造血干細(xì)胞可增殖分化為髓系干細(xì)胞和淋巴干細(xì)胞。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第40頁(yè)1.造血干細(xì)胞基本特征(1)自我更新：即細(xì)胞經(jīng)過(guò)有絲分裂產(chǎn)生兩個(gè)子代細(xì)胞與親代細(xì)胞含有相同特征。造血干細(xì)胞自我更新是維持其數(shù)量平衡基礎(chǔ)，亦稱自我維持。高度自我更新能力是造血干細(xì)胞基本生物學(xué)特征之一。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第41頁(yè)(2）多向分化：即造血干細(xì)胞具備分化為各系造血祖細(xì)胞潛能，是造血干細(xì)胞另一個(gè)基本生物學(xué)特征，造血干細(xì)胞分化受到各種正負(fù)調(diào)控因子調(diào)整，在特定條件下能夠分化成紅細(xì)胞、粒細(xì)胞（中性、嗜酸性、嗜堿性）、單核細(xì)胞、血小板、組織嗜堿細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞等祖細(xì)胞。分化是不可逆，造血干細(xì)胞一旦定向分化為某種祖細(xì)胞，就不可能再變成其它祖細(xì)胞。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第42頁(yè)2．造血干細(xì)胞檢測(cè)

單個(gè)細(xì)胞在生物體內(nèi)有能力長(zhǎng)久重建造血是判斷該細(xì)胞為造血干細(xì)胞“金標(biāo)準(zhǔn)”。因?yàn)樵煅杉?xì)胞數(shù)量極少，且形態(tài)上不能區(qū)分，也沒(méi)有造血干細(xì)胞表面標(biāo)志，當(dāng)前還沒(méi)有建立體外直接測(cè)定造血干細(xì)胞方法。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第43頁(yè)（1）脾集落測(cè)試法

1961年Till等首先采取體內(nèi)試驗(yàn)小鼠脾集落形成間接證實(shí)了造血干細(xì)胞存在：將受體小鼠以致死劑量射線照射后，破壞全部造血細(xì)胞，動(dòng)物因造血功效衰竭而死亡；如輸以供體骨髓或血液，小鼠能存活，并在受體小鼠脾中形成紅系、粒系、巨核系細(xì)胞組成結(jié)節(jié)即脾集落，經(jīng)證實(shí)全部這些細(xì)胞都是由單個(gè)細(xì)胞增殖分化而來(lái)，即脾集落形成單位（CFU-S）；如將脾結(jié)節(jié)細(xì)胞靜脈注射給受體小鼠，該小鼠也能存活。證實(shí)了骨髓或血液中存在血液細(xì)胞祖先細(xì)胞。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第44頁(yè)20世紀(jì)80年代出現(xiàn)了一系列體外檢測(cè)造血干細(xì)胞試驗(yàn)方法，但只能部分證實(shí)造血干細(xì)胞自我更新和多向分化兩個(gè)特征，如混合集落(CFU-Mix)培養(yǎng)，

高增殖潛能細(xì)胞(HPP-CFC）培養(yǎng)，

原始細(xì)胞集落形成細(xì)胞（CFU-Blast)培養(yǎng)，長(zhǎng)久培養(yǎng)起始細(xì)胞（LTC-IC)檢測(cè)等。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第45頁(yè)（2）單克隆抗體法

利用FACS自動(dòng)細(xì)胞分選系統(tǒng)分選出單個(gè)CD34+細(xì)胞亞群細(xì)胞----CD34+CD38+及CD34+CD38—，在無(wú)血清體系中加入各種細(xì)胞因子（如SCF、IL-3、IL-6、GM-CSF及Epo）刺激，結(jié)果表明，CD34+CD38—單個(gè)細(xì)胞可形成原代集落，并可向紅系、粒系、巨噬系、巨核系等細(xì)胞分化。證實(shí)了CD34+CD38—細(xì)胞性能靠近于造血干細(xì)胞，同時(shí)也證實(shí)了造血干細(xì)胞含有多向分化能力，還有試驗(yàn)表明，造血干細(xì)胞含有向淋巴細(xì)胞分化能力。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第46頁(yè)當(dāng)前造血干細(xì)胞表面標(biāo)識(shí)還未確定。普通認(rèn)為CD34陽(yáng)性細(xì)胞含有長(zhǎng)久重建造血能力，推測(cè)部分造血干細(xì)胞CD34陽(yáng)性；CD34陽(yáng)性CD38陰性細(xì)胞比CD34陽(yáng)性細(xì)胞含有更強(qiáng)長(zhǎng)久造血能力；AC133陽(yáng)性細(xì)胞也被認(rèn)為是早期造血細(xì)胞標(biāo)志。明確造血干細(xì)胞表面標(biāo)識(shí)不但含有主要理論價(jià)值，也有利于分離純化高質(zhì)量造血干細(xì)胞供臨床應(yīng)用。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第47頁(yè)（二）造血祖細(xì)胞造血干細(xì)胞深入分化為各種造血祖細(xì)胞（hematopoieticprogenitorcell）。造血祖細(xì)胞是一類由造血干細(xì)胞分化而來(lái)，但失去自我更新能力過(guò)渡性、增殖性細(xì)胞群，過(guò)去稱為定向干細(xì)胞。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第48頁(yè)造血祖細(xì)胞有年紀(jì)結(jié)構(gòu)，依據(jù)其分化能力，可分為多向祖細(xì)胞和單向祖細(xì)胞，多向祖細(xì)胞可深入分化為單向祖細(xì)胞。經(jīng)過(guò)體外造血細(xì)胞半固體培養(yǎng)證實(shí)了造血祖細(xì)胞存在。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第49頁(yè)產(chǎn)生紅細(xì)胞祖細(xì)胞稱為：

紅細(xì)胞爆式集落形成單位（BFU-E)（早期）和紅細(xì)胞集落形成單位(CFU-E)BFU-E造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第50頁(yè)

產(chǎn)生粒細(xì)胞和單核細(xì)胞祖細(xì)胞稱為：

粒-單核細(xì)胞集落形成單位（CFU-GM）CFU-GM造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第51頁(yè)產(chǎn)生巨核細(xì)胞祖細(xì)胞稱：

巨核細(xì)胞集落形成單位（CFU-Meg）CFU-Meg造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第52頁(yè)另外，產(chǎn)生嗜酸性粒細(xì)胞祖細(xì)胞稱為嗜酸性粒細(xì)胞集落形成單位（CFU-Eo）；產(chǎn)生嗜堿性粒細(xì)胞祖細(xì)胞稱為嗜堿性粒細(xì)胞集落形成單位（CFU-Bas）；產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞祖細(xì)胞稱為T淋巴細(xì)胞集落形成單位（CFU-TL）；產(chǎn)生B淋巴細(xì)胞祖細(xì)胞稱為B淋巴細(xì)胞集落形成單位(CFU-BL)。這些祖細(xì)胞失去了自我更新能力，但有較強(qiáng)增殖和定向分化能力。造血祖細(xì)胞表面主要免疫標(biāo)識(shí)已明確，所以，依據(jù)這一特征，可采取流式細(xì)胞術(shù)或其它免疫學(xué)技術(shù)來(lái)分析造血祖細(xì)胞，甚至能夠使之分離純化。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第53頁(yè)（三）造血干／祖細(xì)胞臨床應(yīng)用造血干／祖細(xì)胞臨床應(yīng)用主要包括到造血干／祖細(xì)胞移植。當(dāng)前造血干／祖細(xì)胞主要起源于骨髓、外周血和臍血，不一樣起源造血干／祖細(xì)胞移植在臨床上各有其優(yōu)缺點(diǎn)。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第54頁(yè)造血干／祖細(xì)胞移植主要應(yīng)用于：1.血液系統(tǒng)惡性腫瘤，如急、慢性白血病等；2.血液系統(tǒng)非惡性腫瘤性疾病，如再生障礙性貧血、異常血紅蛋白病、Fanconi貧血、難治性貧血等；3.實(shí)體腫瘤化療后造血重建，如乳腺癌、卵巢癌、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等；4.其它，如重癥聯(lián)合免疫缺點(diǎn)癥、本身免疫性疾病、基因治療等。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第55頁(yè)

三、造血調(diào)控造血細(xì)胞增殖、分化受控于不一樣調(diào)控系統(tǒng)，以保持各種血細(xì)胞數(shù)量和質(zhì)量相對(duì)穩(wěn)定。造血調(diào)控作用于血細(xì)胞發(fā)育每一階段，體內(nèi)許多原因參加了這一過(guò)程，其中細(xì)胞因子調(diào)控占主要地位。細(xì)胞因子（cytokines）是一組基因編碼低分子量蛋白質(zhì)細(xì)胞外信號(hào)分子，有是糖蛋白，有則不含糖基，在機(jī)體內(nèi)含量極低，半衰期短，主要功效是在細(xì)胞間傳遞信息，從而影響造血活動(dòng)。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第56頁(yè)（一）集落刺激因子類(colony-stimulatingfactors,CSFs)CSFs在半固體細(xì)胞培養(yǎng)中能促進(jìn)造血細(xì)胞集落形成。主要有以下幾個(gè)：1.紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）

主要生物學(xué)功效是刺激紅系祖細(xì)胞增殖和分化，以提升紅細(xì)胞數(shù)量。2.粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)

除促進(jìn)粒系祖細(xì)胞形成集落外，G-CSF可誘導(dǎo)一些白血病細(xì)胞株分化成熟，激活中性粒細(xì)胞吞噬功效，誘導(dǎo)早期造血干／祖細(xì)胞從場(chǎng)期進(jìn)人細(xì)胞周期。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第57頁(yè)3.粒一巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)

GM-CSF除了促進(jìn)中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞祖細(xì)胞增殖、分化成熟外，對(duì)成熟細(xì)胞也產(chǎn)生作用4.巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）

促進(jìn)單核系祖細(xì)胞增殖和分化，激活巨噬細(xì)胞吞噬和分泌功效。5.多系集落刺激因子（multi-CSF）

促進(jìn)造血干／祖細(xì)胞增殖、分化，促進(jìn)多系集落生長(zhǎng)。6.血小板生成素（thrombopoietin,TPO）促進(jìn)造血干／祖細(xì)胞增殖、分化；促進(jìn)巨核細(xì)胞集落形成。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第58頁(yè)（二）白細(xì)胞介素（interleukin,IL)白細(xì)胞介素主要是白細(xì)胞產(chǎn)生信號(hào)分子，不但在免疫系統(tǒng)中傳遞信息，同時(shí)也參加造血系統(tǒng)造血調(diào)控，其主要生物學(xué)功效見(jiàn)（臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)》。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第59頁(yè)（三）其它細(xì)胞因子1.干細(xì)胞因子（stemcellfactor,SCF）

又稱肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子

促進(jìn)肥大細(xì)胞生長(zhǎng)；協(xié)同促進(jìn)造血干／祖細(xì)胞增殖、分化。2．FLT-3配基(FLT-3ligand,FL)誘導(dǎo)處于靜止期造血干／祖細(xì)胞進(jìn)人細(xì)胞周期，促進(jìn)其擴(kuò)增。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第60頁(yè)當(dāng)前發(fā)覺(jué)對(duì)造血有調(diào)整作用細(xì)胞因子有近50種，它們對(duì)造血調(diào)控有正向和負(fù)向調(diào)整，一個(gè)細(xì)胞因子對(duì)一類細(xì)胞可能以正向調(diào)整為主，而對(duì)另一類細(xì)胞則可能是反向抑制，而且不一樣濃度作用效果也不一樣。大多數(shù)人類細(xì)胞因子能夠經(jīng)過(guò)基因工程制備，有已成功用于臨床，如EPO較早地用來(lái)治療各種貧血，尤其是與腎功效衰竭、化療、腫瘤骨髓浸潤(rùn)相關(guān)貧血，取得了顯著療效；G-CSF應(yīng)用于治療化療引發(fā)中性粒細(xì)胞降低癥，骨髓移植和外周血造血干／祖細(xì)胞動(dòng)員等。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第61頁(yè)

第三節(jié)造血干／祖細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)

體內(nèi)造血干／祖細(xì)胞在一個(gè)極復(fù)雜造血微環(huán)境中增殖、分化生成血液細(xì)胞。體外造血祖細(xì)胞培養(yǎng)就是在體外模擬體內(nèi)生理環(huán)境，將從機(jī)體中分離出造血祖細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使之生存、增殖分化。造血細(xì)胞及其檢驗(yàn)第62頁(yè)