免疫增殖病的檢測(cè)方法

免疫增殖病檢驗(yàn)何印蕾免疫增殖病的檢測(cè)方法第1頁(yè)第一節(jié)免疫增殖病分類一、定義免疫增殖?。╥mmunoproliferativedisease）是指免疫器官、免疫組織或免疫細(xì)胞（包含淋巴細(xì)胞和單核—巨噬細(xì)胞）異常增生（包含良性或惡性）所致一組疾病。

這類疾病表現(xiàn)有免疫功效異常及免疫球蛋白質(zhì)和量改變。免疫增殖病的檢測(cè)方法第2頁(yè)二、免疫增殖病分類增殖細(xì)胞疾病T細(xì)胞ALL、淋巴母細(xì)胞瘤、部分非霍奇金淋巴瘤等。B細(xì)胞CLL、MM、傳單、原發(fā)性巨球蛋白血癥、淋巴瘤等組織-單核細(xì)胞急單、急性組織細(xì)胞增多癥等其它毛細(xì)胞白血病、其它霍奇金病等免疫增殖病的檢測(cè)方法第3頁(yè)第二節(jié)免疫增殖病免疫損傷機(jī)制一、漿細(xì)胞異常增生漿細(xì)胞異常增生是指單克隆漿細(xì)胞異常增生并伴有單克隆免疫球蛋白或其多肽鏈亞單位合成異常。

免疫增殖病的檢測(cè)方法第4頁(yè)對(duì)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞起源觀察表明，骨髓瘤細(xì)胞起源于骨髓中前B細(xì)胞進(jìn)入淋巴細(xì)胞階段，當(dāng)受到抗原刺激后，其增殖產(chǎn)生記憶B細(xì)胞，B細(xì)胞在淋巴結(jié)中完成免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換，可變成為漿細(xì)胞瘤細(xì)胞并移至骨髓定居并增殖。免疫增殖病的檢測(cè)方法第5頁(yè)在通常情況下IL-6是支持漿細(xì)胞增殖分化關(guān)鍵因子，所以漿細(xì)胞瘤細(xì)胞連續(xù)增殖當(dāng)有IL-6連續(xù)高水平存在。而臨床檢測(cè)表明骨髓瘤患者血清IL-6確有異常升高。所以，高水平IL-6是漿細(xì)胞瘤原因之一。免疫增殖病的檢測(cè)方法第6頁(yè)二、正常體液免疫抑制正常體液免疫是B細(xì)胞增殖分化產(chǎn)生效應(yīng)過(guò)程，一系列細(xì)胞因子將有序地開(kāi)啟上述過(guò)程，IL-4可開(kāi)啟休止期B細(xì)胞進(jìn)入DNA合成期；IL-5促進(jìn)B細(xì)胞繼續(xù)增殖；IL-6促使B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞，正常條件下IL-6能夠反饋抑制IL-4控制B細(xì)胞增殖分化過(guò)程，上述過(guò)程組成了一個(gè)生物信息調(diào)整回路，恰到好處地控制體液免疫應(yīng)答過(guò)程有序進(jìn)行。

免疫增殖病的檢測(cè)方法第7頁(yè)漿細(xì)胞瘤患者體內(nèi)IL-6水平異常增高，其直接效應(yīng)是抑制IL-4產(chǎn)生，從而抑制了整個(gè)體液免疫反應(yīng)過(guò)程。另外，漿細(xì)胞瘤能夠分泌大量無(wú)抗體活性免疫球蛋白，其Fc段與正常B細(xì)胞和原漿細(xì)胞以及其它有Fc受體細(xì)胞結(jié)合，這些細(xì)胞表面將被無(wú)活性免疫球蛋白封閉，影響對(duì)其它生物信息接收，并可阻斷B細(xì)胞增殖、發(fā)育和影響抗原提呈。免疫增殖病的檢測(cè)方法第8頁(yè)免疫增殖病的檢測(cè)方法第9頁(yè)三、異常免疫球蛋白增生所造成病理?yè)p傷漿細(xì)胞異常增生后果是產(chǎn)生大量單克隆型免疫球蛋白或其片段，這類免疫球蛋白或片段無(wú)正常免疫功效。多為一個(gè)類型或?yàn)橹劓溁蜉p鏈，其含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常免疫球蛋白。這些惡性增殖免疫球蛋白能夠沉積于組織，造成組織變性和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，造成對(duì)應(yīng)器官功效障礙，因其血漿濃度過(guò)高而造成血液粘稠度增加，產(chǎn)生一系列直接或間接病理?yè)p害。免疫增殖病的檢測(cè)方法第10頁(yè)第三節(jié)常見(jiàn)免疫球蛋白增殖病單克隆免疫球蛋白增殖病是指患者體內(nèi)存在異常增多單克隆免疫球蛋白一類疾病。免疫增殖病的檢測(cè)方法第11頁(yè)免疫球蛋白電泳位置在丙種球蛋白區(qū)域，故又稱丙種球蛋白增殖病，因?yàn)閱慰寺〖?xì)胞增生，所以其產(chǎn)生免疫球蛋白理化性質(zhì)高度均一，但無(wú)抗體及其它免疫活性，所以這類免疫球蛋白亦叫副蛋白或M蛋白。M蛋白可經(jīng)過(guò)腎小球從尿中排出，即本-周蛋白。免疫增殖病的檢測(cè)方法第12頁(yè)一、多發(fā)性骨髓瘤(一)定義多發(fā)性骨髓瘤（multiplemyelomaMM)是漿細(xì)胞增生惡性腫瘤，其免疫學(xué)特征:血清中和尿中出現(xiàn)M蛋白、血清中正常Ig水平顯著降低、骨髓中不成熟漿細(xì)胞百分比顯著升高。免疫增殖病的檢測(cè)方法第13頁(yè)(二)、臨床表現(xiàn)和病理改變1、早期：無(wú)特殊癥狀，僅表現(xiàn)為ESR增快，血中檢出M蛋白、蛋白尿、漿細(xì)胞增多。2、經(jīng)典病人癥狀及病理改變：(1)骨髓瘤細(xì)胞增生，浸潤(rùn)和破壞骨組織，造成骨質(zhì)疏松和溶骨性病變，造成骨痛和不一樣部位骨折；免疫增殖病的檢測(cè)方法第14頁(yè)(2)、惡性增殖骨髓瘤細(xì)胞代替了骨髓中正常成份，引發(fā)貧血、粒細(xì)胞、血小板降低，因?yàn)镸蛋白增高，引發(fā)血粘增加，或沉積于腎小管中，造成腎小管上皮細(xì)胞淀粉樣變性，發(fā)生腎病綜合征，嚴(yán)重時(shí)可造成腎衰。血粘增高可引發(fā)神經(jīng)功效障礙。(3)、骨髓瘤細(xì)胞浸潤(rùn)其它組織時(shí)，可引發(fā)其相關(guān)組織或器官病變。免疫增殖病的檢測(cè)方法第15頁(yè)(三)、分類依據(jù)M蛋白類別不一樣可分為：IgG型：約占50~60%IgA型：約占20~25%IgD型約：占1~2%IgE型約：罕見(jiàn)依據(jù)漿細(xì)胞合成功效不全分類可分為：輕鏈病和重鏈病免疫增殖病的檢測(cè)方法第16頁(yè)二、原發(fā)性巨球蛋白血癥是一個(gè)伴有血清IgM增加B細(xì)胞增殖病。病因不明。臨床癥狀：主要表現(xiàn)為IgM過(guò)多所致血液高粘性綜合征，另外貧血、肝脾、淋巴結(jié)腫大、重復(fù)感染也常見(jiàn)。免疫增殖病的檢測(cè)方法第17頁(yè)三、重鏈病因?yàn)闈{細(xì)胞發(fā)生突變并異常增殖，合成功效障礙，只產(chǎn)生免疫球蛋白重鏈或有缺點(diǎn)重鏈，不能與輕鏈組成完整免疫球蛋白分子，致使血清中和尿中出現(xiàn)大量游離無(wú)免疫功效重鏈，稱為重鏈病。免疫增殖病的檢測(cè)方法第18頁(yè)四、良性單克隆丙種球蛋白病是指血清中出現(xiàn)M蛋白，而不伴有漿細(xì)胞惡性增殖疾病。本病普通無(wú)癥狀，往往因其它疾病就診時(shí)發(fā)覺(jué)血中有M蛋白。假如尿中出現(xiàn)本-周氏蛋白則是危險(xiǎn)信號(hào)。免疫增殖病的檢測(cè)方法第19頁(yè)第四節(jié)免疫檢測(cè)方法免疫球蛋白異常增生病試驗(yàn)室診療主要依靠血液學(xué)和免疫學(xué)伎倆，其中免疫學(xué)檢測(cè)尤為主要。慣用以下方法進(jìn)行檢測(cè)：免疫增殖病的檢測(cè)方法第20頁(yè)一、血清蛋白區(qū)帶電泳蛋白質(zhì)區(qū)帶電泳是血清蛋白經(jīng)典分析方法，血清(或尿液)標(biāo)本中不一樣性質(zhì)蛋白質(zhì)可顯著分開(kāi)形成不一樣區(qū)帶，經(jīng)過(guò)正常電泳圖譜進(jìn)行比較分析，可發(fā)覺(jué)患者電泳圖譜有一狹窄而濃縮集中帶，即M區(qū)帶。以下列圖免疫增殖病的檢測(cè)方法第21頁(yè)免疫增殖病的檢測(cè)方法第22頁(yè)二、免疫球蛋白定量測(cè)定慣用單向擴(kuò)散法和免疫濁度法。惡性單克隆丙種球蛋白病展現(xiàn)某一類丙種球蛋白顯著增高(>30mg/ml)。良性單克隆丙種球蛋白病增高不顯著，普通在20mg/ml以下。免疫增殖病的檢測(cè)方法第23頁(yè)三、免疫球蛋白分類判定(一)、免疫電泳免疫電泳是將區(qū)帶電泳和免疫擴(kuò)散結(jié)合起來(lái)一個(gè)免疫學(xué)分析法。血清標(biāo)本先經(jīng)區(qū)帶電泳將各種蛋白成份分開(kāi)，繼而用各種特異性抗血清進(jìn)行免疫擴(kuò)散，依據(jù)M蛋白在免疫電泳中所形成特殊沉淀弧，觀察其電泳遷移位置與抗原特異性，可將M蛋白免疫球蛋白類型和其輕鏈型加以判定。免疫增殖病的檢測(cè)方法第24頁(yè)免疫增殖病的檢測(cè)方法第25頁(yè)圖26-3免疫增殖病的檢測(cè)方法第26頁(yè)1、假如待測(cè)標(biāo)本與某型球蛋白重鏈及輕鏈抗血清產(chǎn)生相同遷移度特殊沉淀弧，提醒存在單克隆丙種球蛋白(M蛋白)，此現(xiàn)象多見(jiàn)于IgG、IgA、IgM型多發(fā)性骨髓瘤或原發(fā)性巨蛋白血癥。免疫增殖病的檢測(cè)方法第27頁(yè)2、在同一抗輕鏈血清反應(yīng)中，同時(shí)出現(xiàn)兩條相鄰特殊沉淀弧，則可能是除M蛋白外還存在游離輕，偶然也可見(jiàn)兩種M蛋白，此時(shí)應(yīng)進(jìn)一歩測(cè)定尿中本-周蛋白。免疫增殖病的檢測(cè)方法第28頁(yè)3、患者血清僅與其中一個(gè)抗輕鏈抗血清產(chǎn)生一個(gè)特殊沉淀弧，而其它五種抗血清均不產(chǎn)生沉淀弧，這種情況可能是：免疫增殖病的檢測(cè)方法第29頁(yè)(1)伴有腎功效不全輕鏈病，游離輕鏈較少?gòu)哪蛑信懦龆鴾粲谘褐校?2)存在輕鏈四分子多聚體，分子量大，不易從尿中排出而存于血液中；(3)還未發(fā)覺(jué)新重鏈免疫球蛋白。免疫增殖病的檢測(cè)方法第30頁(yè)4、若患者血清只與IgG、IgA或IgM中一個(gè)抗重血清產(chǎn)生特殊沉淀弧，但在兩抗輕鏈抗血清中無(wú)沉淀弧，提醒可能存在重鏈病。5、非分泌型骨髓瘤血清標(biāo)本在免疫電泳中均不出現(xiàn)特殊沉淀弧。免疫增殖病的檢測(cè)方法第31頁(yè)(二)免疫選擇電泳將含抗k或r血清瓊脂制成薄層瓊脂板，打孔后加入待測(cè)血清進(jìn)行火箭電泳，與標(biāo)本對(duì)應(yīng)免疫球蛋白形成火箭樣沉淀峰。然后于孔兩側(cè)各挖一槽，加入某型免疫球蛋白抗血清或另一型輕抗血，溫育擴(kuò)散后，按沉淀弧形成情況，進(jìn)行判定。免疫增殖病的檢測(cè)方法第32頁(yè)免疫增殖病的檢測(cè)方法第33頁(yè)(三)免疫固定電泳將待測(cè)血清或其它標(biāo)本在瓊脂平板上作區(qū)帶電泳，分離后于其上覆蓋含抗k或r輕鏈或各類重鏈抗血清濾紙，當(dāng)抗體與某區(qū)帶中單克隆免疫球蛋白結(jié)合后，便形成復(fù)合物而沉淀下來(lái)，再經(jīng)過(guò)漂洗與染色，展現(xiàn)濃而狹窄著色區(qū)帶，即可判斷單克隆丙種球蛋白輕鏈或重鏈型別。免疫增殖病的檢測(cè)方法第34頁(yè)免疫增殖病的檢測(cè)方法第35頁(yè)（四）其它檢測(cè)方法本周蛋白