醫(yī)科考研藥分3雜質(zhì)檢查

第三章藥物的雜質(zhì)檢查學(xué)習(xí)要求掌握藥物中雜質(zhì)的來源、分類、雜質(zhì)限量的概念和計(jì)算，一般雜質(zhì)和特殊雜質(zhì)檢查方法熟悉藥物中雜質(zhì)鑒定方法了解熱分析法基本原理及其中雜質(zhì)研究中的應(yīng)用一、藥物的雜質(zhì)與純度第一節(jié)藥物的雜質(zhì)與限量1.藥物純度：指藥物的純凈程度。2.雜質(zhì)：藥物中存在的無治療作用的、影響藥物穩(wěn)定性和療效、甚至對(duì)人體健康有害的物質(zhì)。例：外消旋氧氟沙星

左氧氟沙星有抗感染作用3對(duì)藥物純度的認(rèn)識(shí)是在防治疾病的實(shí)踐中積累起來的如：ASA中除了SA外，還存在乙酰水楊酸酐、乙酰水楊酰水楊酸等SA的衍生物，具有致敏作用。4.對(duì)藥物純度的要求隨著臨床應(yīng)用的實(shí)踐和分析測(cè)試技術(shù)的發(fā)展，在不斷改進(jìn)，使之更加完善如：度冷?。á瘢?948年收入BP，1970年經(jīng)GC分離鑒定出兩種無效異構(gòu)體（Ⅱ）和（Ⅲ），有時(shí)高達(dá)20%～30%。5.藥物純度的評(píng)價(jià)：應(yīng)把藥物的性狀、理化常數(shù)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定等作為一個(gè)有聯(lián)系的整體來評(píng)價(jià)藥物的純度。（低血鉀，使肌肉組織先興奮，再轉(zhuǎn)為抑制而致麻痹）6.不能用化學(xué)試劑的規(guī)格代替藥品標(biāo)準(zhǔn)，更不能將化學(xué)試劑當(dāng)作藥品直接用于臨床如：試劑規(guī)格的BaSO4,允許存在可溶性鋇鹽藥品中不允許：可導(dǎo)致醫(yī)療事故雜質(zhì)的來源：生產(chǎn)過程中引入貯藏過程中產(chǎn)生二、雜質(zhì)的來源A+B→C→D+E①原料中間產(chǎn)物副產(chǎn)物產(chǎn)品③試劑溶劑催化劑⑤金屬容器、管道、裝置②制劑過程中產(chǎn)生新雜質(zhì)④異構(gòu)體多晶型在貯藏過程中，受外界條件如：溫度、濕度、光線、空氣或微生物的影響，發(fā)生水解、氧化、分解、異構(gòu)化、晶型轉(zhuǎn)變、聚合、潮解和發(fā)霉等變化，產(chǎn)生相關(guān)雜質(zhì)。

依雜質(zhì)來源分類：一般雜質(zhì)：含義，品種特殊雜質(zhì)：含義依雜質(zhì)毒性分類：信號(hào)雜質(zhì)有害雜質(zhì)依雜質(zhì)理化性質(zhì)分類：有機(jī)雜質(zhì)無機(jī)雜質(zhì)殘留溶劑三、雜質(zhì)的分類一般雜質(zhì):在自然界分布比較廣泛,在多種藥物的生產(chǎn)或貯存過程中容易引入的雜質(zhì)。如：pH值、溶液的澄清度、氯化物、硫酸鹽、重金屬等特殊雜質(zhì)：在特定藥物的生產(chǎn)和貯存過程中，因其生產(chǎn)工藝或藥物本身的性質(zhì)可能引入的雜質(zhì)。如：乙酰水楊酸中的水楊酸四、雜質(zhì)的限量在不對(duì)人體有害、不影響療效的情況下，允許藥物中存在一定量的雜質(zhì)1.雜質(zhì)限量：藥物中所含雜質(zhì)的最大允許量表示方法：％或百萬分之幾2.限量檢查：藥物中雜質(zhì)的檢查，一般不要求測(cè)定其含量，而只是檢查雜質(zhì)的量是否超過限量3.方法供試液對(duì)照液合格不合格（被檢雜質(zhì)對(duì)照品按照限量標(biāo)準(zhǔn)配制而成）（1）對(duì)照法相同條件下反應(yīng)比較供試液＜對(duì)照液現(xiàn)象現(xiàn)象供試液＞對(duì)照液現(xiàn)象現(xiàn)象（2）靈敏度法：在供試品溶液中加入一定量試劑，在一定條件下反應(yīng)，不得有正反應(yīng)出現(xiàn)（3）比較法：取供試品一定量依法檢查，測(cè)定特定的雜質(zhì)參數(shù)，與規(guī)定的限量相比，不得更大如：UV法檢查腎上腺素中的腎上腺素酮配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.05

4.計(jì)算公式雜質(zhì)限量=雜質(zhì)最大允許量／供試品量×100％例題※※※注意：統(tǒng)一單位求的目的（L？C？V?S?）是否稀釋限量表示方法第二節(jié)雜質(zhì)的檢查方法專屬性強(qiáng)方法：利用藥物和雜質(zhì)在物理和化學(xué)性質(zhì)上的差異進(jìn)行物理:外觀性狀、分配或吸附、對(duì)光的吸收的差異化學(xué):對(duì)某一化學(xué)反應(yīng)的差異雜質(zhì)與試劑反應(yīng)藥物無反應(yīng)一、雜質(zhì)的研究規(guī)范二、雜質(zhì)的常用檢查方法（一）化學(xué)方法利用藥物和雜質(zhì)在化學(xué)性質(zhì)上的差異，選擇合適的試劑，使之與雜質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)生顏色、沉淀或氣體，而藥物不發(fā)生反應(yīng)1.比色法2.比濁法3.滴定法或指示劑法（1）滴定法：以滴定至終點(diǎn)消耗滴定液的體積雜來檢查藥物中雜質(zhì)的量（2）指示劑法：根據(jù)加入定量滴定液與指示劑后，溶液應(yīng)顯示或不應(yīng)顯示特定顏色的方法（二）色譜方法1、TLC（1）雜質(zhì)對(duì)照品法判斷結(jié)果：供試品溶液如顯與對(duì)照品相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色與對(duì)照品溶液主斑點(diǎn)比較，不得更深特點(diǎn)：分離效能高，分離的同時(shí)進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)用廣泛需要對(duì)照品供試品A對(duì)照品BA？B（2）供試品溶液自身稀釋對(duì)照法當(dāng)雜質(zhì)結(jié)構(gòu)不能確定、或無雜質(zhì)對(duì)照品時(shí)，采用此法要求：雜質(zhì)斑點(diǎn)的顏色與主成分斑點(diǎn)顏色相同或相近供試液稀釋對(duì)照液點(diǎn)樣、展開、干燥、顯色（高）（低）1供試品2對(duì)照品前沿原點(diǎn)

??12結(jié)果判斷：供試液所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)與對(duì)照液主斑點(diǎn)比較，不得更深（3）1法與2法并用適用：當(dāng)藥物中存在多個(gè)雜質(zhì)時(shí)，其中有的雜質(zhì)有對(duì)照品，有的雜質(zhì)沒有對(duì)照品或結(jié)構(gòu)未知（4）對(duì)照藥物法適用：無合適雜質(zhì)對(duì)照品，或供試品雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色與主成分斑點(diǎn)顏色有差異可用與供試品相同的藥物作為對(duì)照品，此藥物所含待檢雜質(zhì)需符合限量要求，且穩(wěn)定性好（1）外標(biāo)法測(cè)定需要雜質(zhì)對(duì)照品，進(jìn)樣量能夠精確控制供試液：A雜對(duì)照液：A對(duì)2.高效液相色譜法(HPLC)(2)加校正因子的主成分自身對(duì)照法建立方法時(shí)，需要雜質(zhì)對(duì)照品雜質(zhì)檢查時(shí)，不需雜質(zhì)對(duì)照品①雜質(zhì)對(duì)照品＋藥物對(duì)照品f校正因子直接載入各品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中②供試液對(duì)照液：供試液稀釋成與L相當(dāng)?shù)娜芤?/p>

分別測(cè)定C雜(3)不加校正因子主成分對(duì)照法用于沒有雜質(zhì)對(duì)照品時(shí)雜質(zhì)的檢查對(duì)照液：供試品的稀釋液，進(jìn)樣測(cè)得A主

供試液：進(jìn)樣測(cè)得雜質(zhì)∑Ai，雜質(zhì)∑Ai＜A主即為合格.例如:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑:對(duì)照液(0.01mg/ml)進(jìn)樣20μl,調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)10%～30%樣品液(0.14mg/ml)進(jìn)樣20μl,雜質(zhì)∑Ai＜A主的1.0%.（4）內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定法

需要雜質(zhì)對(duì)照品①校正因子的測(cè)定雜質(zhì)對(duì)照品+內(nèi)標(biāo)物質(zhì)→測(cè)定②供試品+內(nèi)標(biāo)物質(zhì)→測(cè)定(5)峰面積歸一化法適用于粗略測(cè)量雜質(zhì)含量L%=∑Ai/(∑Ai+A主）×100%例如：利巴韋林中有關(guān)雜質(zhì)的檢查：對(duì)照品液(5μg/ml)進(jìn)樣10μl,調(diào)靈敏度，使主峰達(dá)滿量程的20%～25%樣品液(0.4mg/ml)進(jìn)樣10μl,雜質(zhì)∑Ai＜(∑Ai+A主）的1.0%利用藥物和雜質(zhì)對(duì)光選擇性吸收性質(zhì)的差異1.可見-紫外分光光度法在藥物無吸收而雜質(zhì)有吸收的波長(zhǎng)測(cè)定吸收度，規(guī)定測(cè)得的吸收度不得超過某一限值（三）光譜方法例：腎上腺素中腎上腺素酮的檢查腎上腺素酮

220260300nm腎上腺素及腎上腺素酮的紫外吸收曲線λmax310nm310nm處，腎上腺素?zé)o吸收，酮體有吸收采用UV法檢查：腎上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.05

鹽酸去氧腎上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.20鹽酸異丙腎上腺素配2.0mg/mlλ=310nmA≤0.152.紅外分光光度法用于藥物中無效或低效晶型的測(cè)定晶型結(jié)構(gòu)不同，化學(xué)鍵的鍵長(zhǎng)、鍵角等發(fā)生不同程度的變化，導(dǎo)致紅外吸收光譜中某些特征峰的頻率、峰形、強(qiáng)度等出現(xiàn)顯著差異。1.熱分析法在程序控制溫度下，測(cè)定物質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)與溫度關(guān)系的一類技術(shù)①熱重分析法（TGA）在程序升溫下，測(cè)量物質(zhì)的質(zhì)量與溫度的關(guān)系（四）其他方法特點(diǎn)：樣品用量少、靈敏、快速②差熱分析法（DTA)

是在程序升溫下，測(cè)量供試品和參比物之間的溫度差與溫度關(guān)系的一種技術(shù)。參比物是一種惰性物質(zhì)，在加熱過程中不發(fā)生相變和化學(xué)變化。因此溫差(△T)只與被測(cè)物質(zhì)的量質(zhì)變化有關(guān)?！鱐=0被測(cè)物未發(fā)生吸熱或放熱反應(yīng)△T=-為吸熱峰，峰頂向下△T=+為放熱峰，峰頂向上③差示掃描量熱法(DSC)

是在程序升溫下，測(cè)量維持樣品和參比物的溫度相同，系統(tǒng)所需輸給待測(cè)物質(zhì)和參比物的能量差隨溫度（或時(shí)間）變化的熱分析技術(shù)。

供試品吸熱：系統(tǒng)供能增加供試品放熱：系統(tǒng)供能減少應(yīng)用：鑒別、晶型鑒別、純度檢查、測(cè)定熔點(diǎn)或水分2.酸堿度檢查法酸堿滴定法：以消耗酸或堿滴定液的毫升數(shù)為限度指標(biāo)指示液法：將一定量指示液的變色pH范圍作為限度指標(biāo)pH測(cè)定法：測(cè)定供試液的pH值3.物理性狀檢查法：

利用藥物和雜質(zhì)在物理性質(zhì)上的差異臭味及揮發(fā)性的差異若存在具有特殊氣味的雜質(zhì)，可由氣味判斷顏色的差異藥物無色有色雜質(zhì)有色分解產(chǎn)物溶液顏色檢查法溶解行為的差異藥物溶于水、有機(jī)溶劑、酸、堿雜質(zhì)不溶于···································或反之旋光性質(zhì)的差異例：ChP規(guī)定黃體酮在乙醇中的比旋度為:＋186～198°

黃體酮及其中間體的比旋度（溶劑：乙醇）化合物

濃度%

溫度℃

比旋度

黃體酮1～1.4

20～25

+193°±4°

醋酸雙烯醇酮0.920-31°±2°

醋酸妊娠烯醇酮1常溫+20°±2°一．氯化物檢查法：1.原理：供試液：Ag＋+Cl－→AgCl↓（白色混濁）對(duì)照液：標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液……………

2.方法：比濁第三節(jié)藥物中一般雜質(zhì)的檢查3.討論黑色背景下，從上至下觀察氯化物適宜濃度：50~80μg/50ml硝酸酸性：避免弱酸銀鹽的干擾，加速氯化銀沉淀的生成并產(chǎn)生較好的乳濁避光：避免光線使Ag析出供試液若不澄清：用含硝酸的水洗凈濾紙中的氯化物后過濾暗處5min硝酸銀1.0ml暗處5min供試液若有色：內(nèi)消色法二、硫酸鹽檢查法1.原理：供試液：SO４2－＋Ba2＋→BaSO４↓（白色混濁）對(duì)照液：標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液………比濁2.方法3.討論黑色背景下，從上至下觀察硫酸鹽適宜比濁濃度：100~500μg/50ml鹽酸酸性供試液如需濾過供試液若有色三．鐵鹽檢查法（一）硫氰酸鹽法1.原理：供試液：Fe3＋＋6SCN－→[Fe(SCN)6]3－（紅色）

對(duì)照液：標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液………………比色2.方法3.討論白色背景下，從側(cè)面觀察對(duì)照液供試液對(duì)照液供試液鹽酸酸性：防止鐵鹽水解過硫酸銨：防止光線使硫氰酸鐵還原或分解褪色Fe3＋的適宜比色范圍：10~50μg/50ml色調(diào)不一致時(shí)：正丁醇提取實(shí)驗(yàn)：葡萄糖中鐵鹽的檢查，+HNO3處理四、重金屬檢查法重金屬：在實(shí)驗(yàn)條件下與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)如銀、鉛、汞、銅、鎘、錫、銻、鉍等，檢查時(shí)以鉛作為代表

ChP(2010年版)共三法第一法(硫代乙酰胺法):用于溶于水、稀酸和乙醇的藥物1.原理：供試液：CH3CSNH2+H2OCH3CONH2+H2SH2S+Pb2＋→PbS↓+2H＋（黃～棕黑）對(duì)照液：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液……………2.方法：比濁3.討論白色背景下，從上至下觀察pH3.5醋酸鹽緩沖液：沉淀完全Pb2＋適宜比色范圍：10~20μg/27ml供試品有微量Fe3+:氧化硫化氫析出S處理方法：加Vc供試液有色時(shí)：稀焦糖調(diào)色第二法：熾灼后的硫代乙酰胺法用于在水、稀酸、乙醇中難溶，或含芳環(huán)、雜環(huán)（能與重金屬離子形成配位化合物）的有機(jī)藥物

1.原理：C-M熾灼破壞后→Mn＋→第一法檢查

2.方法：500～600℃熾灼勘誤第三法：硫化鈉法溶于堿性水溶液而難于溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的藥物（磺胺類、巴比妥類）

供試液：Pb2＋＋Na2S→PbS↓＋２Na＋（灰黑色）對(duì)照液：標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液………………比濁五．砷鹽檢查法古蔡氏法二乙基二硫代氨基甲酸銀法（Ag-DDC）（一）古蔡氏法：※※※

1.原理：金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫，氫與藥物中微量砷鹽反應(yīng)，生成具揮發(fā)性的砷化氫氣體，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃至棕色的砷斑，與一定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液在同樣條件下生成的砷斑比較，顏色不得更深A(yù)s3++3Zn+3H+→3Zn2++AsH3

AsO33-+3Zn+9H+

→3Zn2++3H2O+AsH3AsO43-+4Zn+11H+

→4Zn2++4H2O+AsH3AsH3+3HgBr2

→3HBr+As(HgBr)3(黃色)2As(HgBr)3+AsH3

→

3AsH(HgBr)2(棕色)As(HgBr)3+AsH3

→3HBr+As2Hg3(黑色)2.儀器裝置

3.方法：

醋酸鉛棉花的作用

KI和酸性SnCl2的作用標(biāo)準(zhǔn)砷斑用2ml的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液制成供試品、HCl、Zn、KI、SnCl2Pb(Ac)2棉HgBr2試紙返回樣品砷斑標(biāo)準(zhǔn)砷斑KI和酸性SnCl2的作用：

AsO43-+2I-+2H+→AsO33-+I2+H2O

AsO43-+Sn2++2H+→AsO33-+Sn4++H2O②I2+Sn2+→2I-+Sn4+

4I-+Zn2+→[ZnI4]2-AsO43-AsO33-AsH3慢快KISnCl2①將五價(jià)砷還原為三價(jià)砷，加快反應(yīng)速度＋5＋3③抑制銻化氫的生成促進(jìn)AsH3的生成④形成Zn-Sn齊，去極化返回Pb(AC)2棉的作用：消除鋅粒和供試品中可能含有的少量的硫化物的影響。S2-+2H+H2SH2S+HgBr22HBr+HgS（汞斑）H2S+Pb(Ac)2PbS+2HAc

返回4.供試品處理（1）供試品為S2-,SO32-,S2O32-等:在酸中生成H2S/SO2,與HgBr作用生成HgS或Hg，干擾砷斑檢查。用硝酸氧化成硫酸鹽可消除。（2）供試品為Fe3+，能消耗KI、SnCl2，先加足量SnCl2（3）環(huán)狀結(jié)構(gòu)有機(jī)藥物，先有機(jī)破壞（4）含銻藥物，改用白田道夫（Betterdorff）法2As3++3SnCl2+6HCl→2As↓+3SnCl4+6H+棕褐色膠態(tài)（二）二乙基二硫代氨基甲酸銀法

（silverdiethyldithiocarbamate)（Ag-DDC法）

1.原理：供試液：AsH3+6Ag（DDC）→６Ag＋…

（紅色膠態(tài)）對(duì)照液：標(biāo)準(zhǔn)砷溶液………2.儀器裝置：

比色或測(cè)定A改錯(cuò)Ag(DDC)的吡啶溶液(USP)三乙胺-氯仿溶液(ChP)3.方法：白色背景下，從上至下觀察；或在510nm處，測(cè)定吸收度線性范圍：1～10μg/40ml含銻藥物不干擾測(cè)定用于砷鹽的限量檢查和微量砷鹽的含量測(cè)定比較古蔡法優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高（1μg）；簡(jiǎn)便、成本低缺點(diǎn)：Sb有干擾；不可做定量分析Ag-DDC法優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高（0.5μg)；儀器測(cè)定、重現(xiàn)性好;

500μgSb無干擾缺點(diǎn)：吡啶惡臭、有毒白田道夫法優(yōu)點(diǎn)：可消除Sb的干擾缺點(diǎn)：靈敏度低（20μg）六、干燥失重測(cè)定法干燥失重：藥品在規(guī)定條件下，經(jīng)干燥后所減失的量，以百分率表示檢查：藥物中的水分和揮發(fā)性物質(zhì)1.常壓恒溫干燥法適用于受熱較穩(wěn)定的藥物；溫度：105℃2.減壓干燥法適用于熔點(diǎn)低、受熱分解的藥物3.干燥劑干燥法適用于受熱易分解或升華的藥物干燥劑：硅膠、硫酸、五氧化二磷七、水分測(cè)定法卡爾·費(fèi)休法費(fèi)休氏液：I2、SO2、無水甲醇、無水吡啶原理：I2+SO2+H2O2HI+SO3

終點(diǎn)：費(fèi)休氏液：淡黃→紅棕色永停法八、熾灼殘?jiān)鼨z查法熾灼殘?jiān)河袡C(jī)藥物經(jīng)炭化或揮發(fā)性無機(jī)藥物加熱分解后高溫?zé)胱?，所產(chǎn)生的非揮發(fā)性無機(jī)雜質(zhì)的硫酸鹽加硫酸熾灼法：700～800℃;如熾灼殘?jiān)枇糇髦亟饘贆z查，500～600℃恒重：供試品連續(xù)兩次熾灼或干燥后的重量差異在0.3mg以下九、易炭化物檢查法檢查藥物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有機(jī)雜質(zhì)。這類雜質(zhì)多數(shù)結(jié)構(gòu)未知，常采用加硫酸呈色后與對(duì)照液比較的方法進(jìn)行檢查。對(duì)照液為：標(biāo)準(zhǔn)比色液

由CoCl2,K2Cr2O7,CuSO4

配制

KMnO4液十、殘留溶劑測(cè)定法

主要檢查藥物在生產(chǎn)過程中引入的有害的有機(jī)溶劑