流式細(xì)胞術(shù)和生物芯片技術(shù)

流式細(xì)胞術(shù)

（flowcytomertry,FCM)目前一頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點流式細(xì)胞術(shù)是利用流式細(xì)胞儀進行的一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù);目前二頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點流式細(xì)胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計算機科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物;目前三頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點它可以高速分析上萬個細(xì)胞，并能同時從一個細(xì)胞中測得多個參數(shù);

與傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比，具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點，成為當(dāng)代最先進的細(xì)胞定量分析技術(shù)。目前四頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點二.什么是流式細(xì)胞儀的基本結(jié)構(gòu)?

目前五頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點流式細(xì)胞儀由三部分構(gòu)成:傳感系統(tǒng):包括樣本遞送系統(tǒng)、樣品池、檢測系統(tǒng)、電子傳感器和激光源等;計算機系統(tǒng);電路、光路和水路系統(tǒng):有電源、光學(xué)傳導(dǎo)和濾片、鞘液循環(huán)和回收部分等。目前六頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點三.什么是流式細(xì)胞儀的工作原理？

使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標(biāo)記的細(xì)胞或微粒一個個地依次通過樣品池，細(xì)胞的流速可達(dá)9m/秒；由熒光探測器捕獲熒光信號并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角，側(cè)向散射角和不同熒光強度的電脈沖信號；經(jīng)計算機處理形成相應(yīng)的點圖，直方圖和假三維結(jié)構(gòu)圖像進行分析。目前七頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前八頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點四.什么是樣本制備的基本原則？用于FCM的樣本是單細(xì)胞懸液;使各種體液和懸浮細(xì)胞樣本新鮮;針對不同的細(xì)胞樣本進行適當(dāng)?shù)南礈?，酶消化或EDTA處理；新鮮實體瘤組織可選用或聯(lián)用酶消化法、機械打散法和化學(xué)分散法來獲得足夠數(shù)量的單細(xì)胞懸液。目前九頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點五.流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用特點：測定細(xì)胞內(nèi)DNA的變異系數(shù)最小，一般在2%以下;能準(zhǔn)確地進行DNA倍體分析;借助于熒光染料進行細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)和核酸的定量研究;快速進行細(xì)胞分選和細(xì)胞收集。目前十頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點六.流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用范圍外周血細(xì)胞的免疫表型測定和定量分析；某一特定細(xì)胞群的篩選和細(xì)胞收集；細(xì)胞耐藥基因的檢測；癌基因和抑癌基因的檢測；細(xì)胞凋亡的定量研究、細(xì)胞毒功能檢測；細(xì)胞內(nèi)某些蛋白質(zhì)和核酸的定量分析。目前十一頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點（一）在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用這是FCM在臨床醫(yī)學(xué)中應(yīng)用最早的一個領(lǐng)域。首先需要把實體瘤組織解聚、分散制備成單細(xì)胞懸液，用熒光染料(碘化吡啶PI)染色后對細(xì)胞的DNA含量進行分析，將不易區(qū)分的群體細(xì)胞分成三個亞群(G1期，S期和G2期)，DNA含量直接代表細(xì)胞的倍體狀態(tài)，非倍體細(xì)胞與腫瘤惡性程度有關(guān)。目前十二頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點協(xié)助腫瘤早期診斷當(dāng)人體發(fā)生癌變或具有惡性潛能的癌前病變時，在其發(fā)生、發(fā)展過程中可伴隨細(xì)胞DNA含量的異常改變，F(xiàn)CM可精確定量DNA含量的改變，作為診斷癌前病變發(fā)展至癌變中的一個有價值的標(biāo)志，能對癌前病變的性質(zhì)及發(fā)展趨勢作出估價，有助于癌變的早期診斷目前十三頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點（二）在細(xì)胞免疫中的作用FCM通過熒光抗原抗體檢測技術(shù)對細(xì)胞表面抗原分析，進行細(xì)胞分類和亞群分析。正常人群淋巴細(xì)胞T4/T8比值大約為2∶1，但在人體細(xì)胞免疫力低下時可出現(xiàn)比例倒置。用FCM還可以監(jiān)測腎移植后病人的腎排斥反應(yīng)，如果T4/T8比例倒置，病人預(yù)后良好，較少發(fā)生腎排異現(xiàn)象；反之排異危險性增加。

目前十四頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點（三）在血液病診斷和治療中的應(yīng)用FCM通過對外周血細(xì)胞或骨髓細(xì)胞表面抗原和DNA的檢測分析，對各種血液病的診斷、預(yù)后判斷和治療起著舉足輕重的作用。目前十五頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點(1)白血病的診斷和治療FCM采用各種抗血細(xì)胞表面分化抗原(CD)的單克隆抗體，借助于各種熒光染料(異硫氰基熒光素FITC，藻紅蛋白PE等)測定一個細(xì)胞的多種參數(shù)，以正確地判斷出該細(xì)胞的屬性。目前十六頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點例如干細(xì)胞表達(dá)CD34，髓系表達(dá)CD13、CD14，B細(xì)胞系表達(dá)CD10、CD19、CD20等，T細(xì)胞系表達(dá)CD2、CD3、CD5、CD7，利用FCM可以測定出血細(xì)胞表達(dá)各種抗原的水平，協(xié)助臨床確診。目前十七頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點（2）造血干細(xì)胞移植技術(shù)造血干細(xì)胞移植技術(shù)主要包括干細(xì)胞的鑒別、活性測定、干細(xì)胞動員和采集、分離純化、保存擴增、腫瘤細(xì)胞的凈化、干細(xì)胞回輸以及術(shù)后保持移植物抗宿主病的低發(fā)生率等一系列過程。目前十八頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前十九頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前二十頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前二十一頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前二十二頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前二十三頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前二十四頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前二十五頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點一.什么是生物芯片技術(shù)?

（biochiptechnique)目前二十六頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點生物芯片技術(shù)是隨著“人類基因組計劃”(humangenomeproject，HGP)的進展而發(fā)展起來的，它是90年代中期以來影響最深遠(yuǎn)的重大科技進展之一，它融微電子學(xué)、生物學(xué)、物理學(xué)、化學(xué)、計算機科學(xué)為一體的高度交叉的新技術(shù)。目前二十七頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點生物芯片技術(shù)包括：

基因芯片、蛋白質(zhì)芯片、細(xì)胞芯片、組織芯片、以及元件型微陣列芯片、通道型微陣列芯片、生物傳感芯片等新型生物芯片。

目前二十八頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點二.什么是基因芯片?

基因芯片又稱DNA芯片(DNAcMp)，是指固著在固相載體上的高密度的DNA微點陣。具體地說就是將大量靶基因或寡核背酸片段有序地，高密度地排列在如硅片、玻璃片、聚丙烯或尼龍膜等載體上，這就是基因芯片。目前二十九頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點三.基因芯片的分類按基因芯片的功能可將其分為三類:表達(dá)譜基因芯片;

診斷芯片;檢測芯片;目前三十頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點四.基因芯片檢測的基本原理用不同的熒光染料通過逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)將不同組織的mRNA分別標(biāo)記制成探針，將探針混合后與芯片上的DNA片段進行雜交、洗滌，用特有的熒光波長掃描芯片，得到這些基因在不同組織或細(xì)胞中的表達(dá)譜圖片，再通過計算機分析出這些基因在不同組織中表達(dá)差異的重要信息。目前三十一頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前三十二頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前三十三頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點目前三十四頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點五.基因芯片檢測的應(yīng)用目前三十五頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點（一）測序基因芯片利用固定探針與樣品進行分子雜交產(chǎn)生的雜交圖譜而排列出待測樣品的序列。目前三十六頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點用基因芯片進行的表達(dá)水平檢測可自動、快速地檢測出成千上萬個基因的表達(dá)情況。（二）基因表達(dá)水平的檢測目前三十七頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點（三）基因診斷

從正常人的基因組中分離出DNA與DNA芯片雜交就可以得出標(biāo)準(zhǔn)圖譜；從病人的基因組中分離出DNA與DNA芯片雜交就可以得出病變圖譜；通過比較、分析這兩種圖譜，就可以得出病變的DNA信息。

目前三十八頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點（四）藥物篩選

利用基因芯片分析用藥前后機體的不同組織、器官基因表達(dá)的差異,從基因水平解釋藥物的作用機理。目前三十九頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點六.什么是組織芯片?組織芯片(tissuechip)又稱組織微陣列(tissuemicroarray)；是將數(shù)十個至數(shù)百個小的組織片整齊地排列在某一載休上而成的微縮組織切片；組織芯片的制作主要包括組織篩選和定位，陣列蠟塊的制作和切片等步驟。目前四十頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點七.組織芯片的特點

體積小，信息量大，能高效，快速和低消耗地進行各種原位組織學(xué)的研究和觀察，并有較好的內(nèi)對照及實驗條件的可比性。目前四十一頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點高通量：一次檢測可獲取大量的生物學(xué)信息;大樣本：一次試驗可分析成百上千種同一或不同疾病的組織標(biāo)本；省時迅速：一到兩周可完成數(shù)千個組織標(biāo)本的數(shù)十個基因或蛋白分子的定位；簡便經(jīng)濟：是傳統(tǒng)病理方法所需費用的1/10-1/100;目前四十二頁\總數(shù)四十四頁\編于十五點用途廣泛：

基礎(chǔ)研究;臨床研究;分子診斷;預(yù)后指標(biāo)篩選;抗體和藥物篩選;基因和蛋白表達(dá)結(jié)果可靠：

一次室驗可完成數(shù)千個組織標(biāo)本的分析