章微生物鑒定崗位

（優(yōu)選）章微生物鑒定崗位目前一頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)技能目標(biāo)1.學(xué)會微生物生化試驗(yàn)的接種方法。2.學(xué)會正確觀察微生物生化試驗(yàn)的結(jié)果。3.復(fù)習(xí)微生物常用的接種方法。目前二頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)崗位描述

該崗位的任務(wù)是利用不同微生物對外界物質(zhì)不同的代謝作用和所產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的不同，進(jìn)行微生物的鑒定和分型，提供疾病的輔助診斷、療效評估、預(yù)后判斷及藥品、食品、化妝品菌檢判斷所需的重要生物學(xué)參數(shù)。該崗位的從業(yè)人員除了要有微生物培養(yǎng)、接種技術(shù)外，還必須具備一定的微生物生物化學(xué)知識，能根據(jù)一定的生化反應(yīng)現(xiàn)象進(jìn)行結(jié)果判斷。目前三頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)任務(wù)一

認(rèn)識微生物的新陳代謝目前四頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)概念:微生物在其生理活動過程中，一方面不斷從外界環(huán)境吸收營養(yǎng)物質(zhì)，經(jīng)過一系列復(fù)雜的生化反應(yīng)過程，轉(zhuǎn)化為細(xì)胞生理活動過程中有用的物質(zhì)；另一方面又不斷向外界排泄出廢物，以維持細(xì)胞的正常生長和繁殖，這就是微生物的新陳代謝。

物質(zhì)代謝（分解代謝、合成代謝）能量代謝（產(chǎn)能代謝、耗能代謝）一、微生物新陳代謝的特點(diǎn)

目前五頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)分解代謝（異化作用）：復(fù)雜有機(jī)物→

簡單化合物→釋放能量合成代謝（同化作用）：簡單化合物→復(fù)雜有機(jī)物→消耗能量一、微生物新陳代謝的特點(diǎn)

攝取的營養(yǎng)物質(zhì)細(xì)胞組成物質(zhì)

自身細(xì)胞內(nèi)復(fù)雜的細(xì)胞物質(zhì)及環(huán)境中大分子營養(yǎng)物質(zhì)目前六頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)初級代謝：合成細(xì)胞生長、繁殖必需的物質(zhì)，如：氨基酸、蛋白質(zhì)、核酸、維生素次級代謝：合成細(xì)胞生長、繁殖無顯著作用的物質(zhì)如：抗生素、色素等一、微生物新陳代謝的特點(diǎn)

目前七頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)細(xì)菌產(chǎn)生的酶部位分：胞內(nèi)酶胞外酶（與細(xì)菌毒力有關(guān)）生成條件分：固有酶（與遺傳有關(guān)）誘導(dǎo)酶特點(diǎn)：溫和性、高效性、專一性一、微生物新陳代謝的特點(diǎn)

目前八頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)一、微生物新陳代謝的特點(diǎn)

微生物新陳代謝有三個(gè)突出的特點(diǎn)：

①新陳代謝十分活躍；

②新陳代謝類型多樣化；

③新陳代謝途徑靈活

目前九頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)二、微生物的新陳代謝產(chǎn)物

微生物新陳代謝產(chǎn)物主要有：

1.熱原質(zhì)2.侵襲性酶及毒素3.色素4.抗生素5.細(xì)菌素6.維生素注入人體或動物體內(nèi)可引起發(fā)熱反應(yīng)。耐高溫特性，不被121℃高壓滅菌所破壞，可用吸附法、蒸餾法、濾過法、熱破壞法（250℃干熱45min）、強(qiáng)酸強(qiáng)堿處理法去除。某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的微量就能選擇性的抑制或殺滅其它微生物或腫瘤細(xì)胞的物質(zhì)某些細(xì)菌菌株產(chǎn)生的,僅能對一些與其產(chǎn)生菌密切相關(guān)的細(xì)菌有作用的一類具有抗菌作用的蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)與脂多糖的復(fù)合物。目前十頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)透明質(zhì)酸酶（利于擴(kuò)散）鏈激酶（利于擴(kuò)散）鏈道酶（利于擴(kuò)散）血漿凝固酶（抗吞噬）目前十一頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)目前十二頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)二、微生物分解代謝的類型

微生物的分解代謝主要是對糖、蛋白質(zhì)和脂肪的代謝過程：

1.糖類的分解2.蛋白質(zhì)的分解3.脂肪的分解目前十三頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)任務(wù)二認(rèn)識生化檢測原理、用途及方法目前十四頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)一、原理及用途

由于各種不同種類的微生物具有各自獨(dú)特的酶系統(tǒng)，因而新城代謝過程中對底物的分解能力不同，其代謝產(chǎn)物也必定有所差異。用一些生物化學(xué)反應(yīng)測定這些具有不同特性的分解或合成代謝產(chǎn)物，可作為區(qū)別和鑒定微生物種類的重要依據(jù)之一。這就是微生物的生物化學(xué)鑒定試驗(yàn)?，F(xiàn)已有數(shù)百種獨(dú)立的生化測試可供選用，每一種測試都可檢測某種特定的酶或生理活性是否存在。只要將這些生理生化測試中的某幾項(xiàng)聯(lián)合使用就可以描述出某種特定細(xì)菌的特征。

目前十五頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)生化檢驗(yàn)的目的：

通過生化反應(yīng)現(xiàn)象的不同，區(qū)別和鑒定微生物種類。目前十六頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)

微生物的分解代謝主要是對糖、蛋白質(zhì)和脂肪的代謝過程：

1.糖類發(fā)酵試驗(yàn)2.甲基紅試驗(yàn)3.VP試驗(yàn)4.枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)5.吲哚試驗(yàn)6.硫化氫試驗(yàn)?zāi)壳笆唔揬總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)1.糖類發(fā)酵試驗(yàn)

微生物利用單糖、雙糖、多糖、醇類、有機(jī)酸等各種碳源的能力不同，發(fā)酵狀況可通過倒置試管中收集的氣泡看出。目前十八頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)（一）、糖發(fā)酵試驗(yàn)葡萄糖大腸桿菌傷寒桿菌產(chǎn)酸、產(chǎn)氣產(chǎn)酸、不產(chǎn)氣乳糖大腸桿菌傷寒桿菌產(chǎn)酸、產(chǎn)氣不分解區(qū)別大腸與傷寒桿菌檢測pH通過在倒置試管中收集的氣泡看出目前十九頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)空白對照傷寒桿菌大腸桿菌糖發(fā)酵試驗(yàn)氣泡變黃色目前二十頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)色氨酸產(chǎn)氣桿菌吲哚不產(chǎn)生吲哚大腸桿菌二甲基氨基苯甲醛紅色陽性陰性（二）吲哚試驗(yàn)（I）

：二甲基氨基苯甲醛無色

試驗(yàn)原理：常可用于大腸埃希菌與產(chǎn)氣腸桿菌、肺炎克雷伯菌和產(chǎn)酸克雷伯菌等腸桿菌科的鑒別。目前二十一頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)吲哚試驗(yàn)陽性陰性大腸桿菌：+產(chǎn)氣桿菌：-目前二十二頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)葡萄糖產(chǎn)氣桿菌小分子酸乙酰甲基甲醇大腸桿菌甲基紅紅色陽性陰性（三）甲基紅試驗(yàn)（M）：甲基紅橙色

試驗(yàn)原理：二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)常用于腸桿菌科內(nèi)某些屬種的鑒別目前二十三頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)甲基紅試驗(yàn)陽性陰性大腸桿菌：+產(chǎn)氣桿菌：-目前二十四頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)葡萄糖產(chǎn)氣桿菌小分子酸乙酰甲基甲醇大腸桿菌精氨酸無色陽性陰性（四）乙酰甲基甲醇試驗(yàn)（V）：紅色pH?7精氨酸pH?7

試驗(yàn)原理：二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)本試驗(yàn)常與甲基紅試驗(yàn)一起使用，一般情況下，VP試驗(yàn)為陽性的細(xì)菌，甲基紅試驗(yàn)常為陰性，反之亦然。目前二十五頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)V-P試驗(yàn)陰性陽性大腸桿菌：-產(chǎn)氣桿菌：+目前二十六頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)枸櫞酸鈉產(chǎn)氣桿菌不生長培養(yǎng)基呈中性生長使培養(yǎng)基pH?7大腸桿菌不變色陽性陰性（五）枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)（C）：藍(lán)色溴麝香草酚藍(lán)溴麝香草酚藍(lán)

試驗(yàn)原理：在以枸櫞酸鈉為惟一碳源的培養(yǎng)基上接種二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)可用此試驗(yàn)作細(xì)菌種屬間鑒定，目前二十七頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)枸櫞酸利用試驗(yàn)大腸桿菌：-產(chǎn)氣桿菌：+陽性陰性目前二十八頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)IMVC試驗(yàn)

符號表示：I：代表吲哚試驗(yàn)M：代表甲基紅試驗(yàn)V：代表乙酰甲基甲醇試驗(yàn)C：代表枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)?zāi)壳岸彭揬總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)IMVC試驗(yàn)

試驗(yàn)用途：常用于大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的鑒別。二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)?zāi)壳叭揬總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)IMVC試驗(yàn)

大腸桿菌與產(chǎn)氣桿菌鑒別結(jié)果：IMVC大腸桿菌++——產(chǎn)氣桿菌——++二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)?zāi)壳叭豁揬總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)（六）、硫化氫試驗(yàn)

試驗(yàn)用途：常用來鑒別腸道桿菌的種類：如:沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬、愛德華菌屬為陽性大腸桿菌、產(chǎn)氣桿菌為陰性二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)?zāi)壳叭揬總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)

試驗(yàn)原理：培養(yǎng)基中的含硫氨酸沙門菌屬H2S醋酸鉛硫酸亞鐵黑色陽性大腸桿菌產(chǎn)氣桿菌不產(chǎn)生H2S陰性?所屬類型：氨基酸和蛋白質(zhì)試驗(yàn)（六）、硫化氫試驗(yàn)二、常用的生化反應(yīng)試驗(yàn)?zāi)壳叭揬總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)硫化氫試驗(yàn)乙型副傷寒桿菌：+大腸桿菌：-陽性陰性目前三十四頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)三、微生物快速檢測技術(shù)

微生物快速檢測法是近年來不斷取得進(jìn)展的一種新型的檢測方法，常見的有：

1.快速測試片法2.選擇、鑒定用培養(yǎng)基法3.生物化學(xué)技術(shù)4.微生物快速鑒定和自動化分析系統(tǒng)目前三十五頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)（一）快速測試片法

是指以紙片、紙膜、膠片等作為培養(yǎng)基載體，將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在上面，通過微生物在上面的生長、顯色來測定受檢樣品中微生物的方法。快速檢測紙片產(chǎn)品，可以檢測乳酸桿菌、沙門菌、葡萄球菌等。

快速檢測法與傳統(tǒng)檢測方法之間的相關(guān)性非常好，如用大腸菌群快速檢測紙片的特異性和敏感性與發(fā)酵法符合率均較高。有些快速檢測法中還加入了染色劑、顯色劑，增強(qiáng)了菌落的目視效果。目前三十六頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)（二）選擇、鑒定用培養(yǎng)基法

在培養(yǎng)基中加入特異性的生化反應(yīng)底物、抗體、熒光反應(yīng)底物、酶反應(yīng)底物等，可使目標(biāo)培養(yǎng)物的選擇、分離、鑒定一次性完成。

如生物一梅里埃公司的BP+RPF(兔血漿+纖維蛋白原)培養(yǎng)基，可在24h內(nèi)鑒定金黃色葡萄球菌。Merk公司的培養(yǎng)基上，大腸桿菌可為墨綠色至紫色菌落，沙門菌為淡綠色至藍(lán)綠色菌落。檸檬酸桿菌和克雷伯桿菌為橙紅色至紅色菌落，其他腸道菌為無色菌落。目前三十七頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)（三）生物化學(xué)技術(shù)1.PCR技術(shù)PCR技術(shù)采用體外酶促反應(yīng)合成特異性DNA片段，再通過擴(kuò)增產(chǎn)物來識別細(xì)菌。優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，節(jié)約了大量時(shí)間缺點(diǎn)：增菌培養(yǎng)基成分和其他微生物DNA對Taq酶具有抑制作用，可能導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果假陰性2.基因探針技術(shù)

利用具有同源性序列的核酸單鏈在適當(dāng)條件下互補(bǔ)的原理，采用特異性基因片段制備基因探針來識別細(xì)菌。優(yōu)點(diǎn)：減少了基因片段長度多態(tài)性所需要分析的條帶數(shù)缺點(diǎn)：不能鑒定目標(biāo)菌以外的其他菌目前三十八頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)（四）微生物快速鑒定和自動化分析系統(tǒng)1.微量多項(xiàng)試驗(yàn)鑒定系統(tǒng)

也稱為數(shù)碼分類鑒定法和簡易診檢技術(shù)，基本原理是通過數(shù)學(xué)的編碼技術(shù)，將細(xì)菌的生化反應(yīng)模式轉(zhuǎn)換成數(shù)學(xué)模式，給每種細(xì)菌的反應(yīng)模式賦予一組數(shù)碼，建立對應(yīng)的數(shù)據(jù)庫或編成檢索本。其計(jì)算步驟分為出現(xiàn)頻率的計(jì)算、對照檢索本數(shù)據(jù)譜得出結(jié)果、結(jié)果解釋三個(gè)部分。目前三十九頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)（四）微生物快速鑒定和自動化分析系統(tǒng)2.自動化的微生物鑒定系統(tǒng)（1）半自動化細(xì)菌鑒定1.BBL

Crystal半自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)2.AutoScan-4半自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)3.VITEK-ATB半自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)4.AutoReader半自動細(xì)菌鑒定系統(tǒng)目前四十頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)（四）微生物快速鑒定和自動化分析系統(tǒng)2.自動化的微生物鑒定系統(tǒng)（2）全自動化微生物鑒定1.VITEK

AMS系統(tǒng)2.MicroScan系統(tǒng)3.PHOENIXTM

系統(tǒng)4.Biolog系統(tǒng)目前四十一頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)（四）微生物快速鑒定和自動化分析系統(tǒng)3.使用自動化鑒定系統(tǒng)的注意的問題1.自動化鑒定系統(tǒng)自身數(shù)據(jù)庫資料有待完善2.用戶應(yīng)及時(shí)更新鑒定系統(tǒng)數(shù)據(jù)庫3.將自動化鑒定儀的結(jié)果和細(xì)菌的其他生物性狀（如標(biāo)本來源、菌落特征及其它的生理生化特征）進(jìn)行核對，盡量避免錯(cuò)誤的鑒定。目前四十二頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)【知識檢測】1.對鑒別細(xì)菌有意義的細(xì)菌代謝產(chǎn)物是

A.維生素B.色素C.侵襲性酶D.抗生素E.毒素

2.內(nèi)毒素的毒性部位在A.特異性多糖B.脂多糖C.核心多糖D.類脂Ａ

E.脂蛋白3.關(guān)于外毒素的敘述不正確的是A.主要化學(xué)成分是蛋白質(zhì)B.可以經(jīng)甲醛脫去毒性變成類毒素C.所引起的毒性反應(yīng)基本相似

D.化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定性

E.大多數(shù)由革蘭陽性菌產(chǎn)生和分泌目前四十三頁\總數(shù)四十九頁\編于二十三點(diǎn)4.下列不屬于細(xì)菌生化反應(yīng)試驗(yàn)的是A.吲哚試驗(yàn)B.半固體試驗(yàn)