【教學(xué)】第十四章-長期毒性作用及其試驗方法

第十四章長期毒性作用及其試驗方法

long-termtoxicityimpactandtestmethod

5/1/20231.第一節(jié)基本概念和目的第二節(jié)試驗設(shè)計原則及方法5/1/20232.

第一節(jié)基本概

念

和目的5/1/20233.

長期毒性作用是指藥物以一定的等級劑量連續(xù)多日給予受試動物所產(chǎn)生的有害作用。為觀察這種有害作用而設(shè)計的毒理學(xué)試驗稱之為長期毒性試驗。一、定義

急性毒性試驗

是為觀察和評價急性毒性的有害作用或中毒反應(yīng)而設(shè)計的一種毒理學(xué)試驗。研究藥物一次或24小時內(nèi)多次給予受試藥物后，一定時間內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。5/1/20234.123給

藥

的

期

限

不

同長期毒性試驗與急性毒性試驗的根本差別5/1/20235.根據(jù)給藥期限的長短，可分為：亞慢性毒性試驗——給藥期限不超過90天或不超過試驗動物平均壽命的10%；慢性毒性試驗——給藥期限超過90天或超過試驗動物平均壽命的10%；終生毒性試驗數(shù)代毒性試驗5/1/20236.123給

藥

的

期

限

不

同給

藥

的

劑

量

范

圍

不

同長期毒性試驗與急性毒性試驗的根本差別5/1/20237.蓄積作用(accumulationaction)

當(dāng)較長時間連續(xù)、反復(fù)給藥時，或者說給藥的時間間隔和劑量超過機體消除藥物的能力，就會出現(xiàn)藥物進入機體的速度

(或總量)超過排除的速度(或總量)的現(xiàn)象，此時藥物就有可能在體內(nèi)逐漸增加并貯存起來，即蓄積作用。

5/1/20238.

蓄積作用的表現(xiàn)形式作用量積蓄功能性蓄積5/1/20239.123給

藥

的

期

限

不

同給

藥

的

劑

量

范

圍

不

同觀

察

的

毒

效

應(yīng)

不

同長期毒性試驗與急性毒性試驗的根本差別5/1/202310.急性毒性試驗是以死亡為觀察終點的質(zhì)反應(yīng)過程長期毒性試驗重點觀察體重、血液生化等量反應(yīng)指標(biāo)（量變→質(zhì)變）5/1/202311.二、目的與意義5/1/202312.1預(yù)測受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)2判斷受試物反復(fù)給藥的毒性靶器官或組織提示臨床試驗中需重點監(jiān)測的指標(biāo)43推測臨床試驗的起始劑量和重復(fù)用藥的安全劑量范圍為臨床試驗中的解毒或解救措施提供參考5長期毒性試驗的目的5/1/202313.第二節(jié)試驗

設(shè)

計

原

則

及

方

法5/1/202314.一、一般原則和要求基本原則全面、嚴(yán)謹、合理整體性隨機、對照、重復(fù)5/1/202315.一、一般原則和要求基本原則整體性長期毒性試驗不能與藥效學(xué)、藥代動力性和其他毒理學(xué)研究割裂，試驗設(shè)計應(yīng)充分考慮其他藥理毒理研究的試驗設(shè)計和研究結(jié)果。長期毒性試驗的結(jié)果應(yīng)該力求與其他藥理毒理試驗結(jié)果互為印證、說明和補充。5/1/202316.一、一般原則和要求選用兩種實驗動物三個劑量給藥途徑應(yīng)與臨床擬用途徑相同基本要求5/1/202317.一、一般原則和要求

至少在兩種動物體上進行，兼顧雌雄性別。選用兩種實驗動物基本要求5/1/202318.一、一般原則和要求三個劑量劑量至少分為高、中、低三個檔次。高劑量組應(yīng)能充分反映藥物的毒性，低劑量組不出現(xiàn)毒性反應(yīng)。同時設(shè)一溶劑(或賦形劑)對照組或已知藥物毒性對照組。基本要求5/1/202319.一、一般原則和要求給藥途徑應(yīng)與臨床擬用途徑相同口服給藥大鼠一般常用灌胃，灌胃的容量為每天1~2ml/100g，也可將受試藥物混在飼料或水中給予，但要保證每只動物按規(guī)定劑量在一定時間內(nèi)服入。靜脈注射大鼠時可采用腹腔或皮下代替，各劑量組采用等容量不等濃度給藥。特殊情況另作說明?；疽?/1/202320.理想動物的標(biāo)準(zhǔn)：對受試物的生物轉(zhuǎn)化與人體相近；對受試物敏感；已有大量歷史對照數(shù)據(jù)。二、實驗動物

5/1/202321.☆我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物,一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，首選狗。1.種類及品系二、實驗動物

5/1/202322.☆我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物,一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，首選狗。1.種類及品系二、實驗動物

Wistar大鼠SD大鼠

5/1/202323.☆我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物,一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，首選狗。1.種類及品系二、實驗動物

一類新藥：Beagle犬二類新藥：雜種狗

5/1/202324.☆我國藥政部門規(guī)定的基本原則是選用兩種動物,一種為嚙齒類，首選大白鼠；另一種為非嚙齒類，首選狗。1.種類及品系二、實驗動物

☆在吸入給藥時，猴是首先推薦的動物，因為它在呼吸系統(tǒng)的解剖學(xué)和生理學(xué)方面比其它動物更接近人類?！钊缪芯坑媱澤盟?，應(yīng)選擇猴或其他大動物。5/1/202325.5/1/202326.5/1/202327.

Beagle犬：原產(chǎn)英國，純種小獵兔犬Beagle犬的特點：體型小,毛短,性情溫和,親人,抗病力強

缺點：價格昂貴5/1/202328.2.起始月(周)齡一般選擇較年輕的或正處于生長發(fā)育階段的動物。二、實驗動物

5/1/202329.2.起始月(周)齡二、實驗動物

長期毒性試驗的給藥期限較長；1原因：處于生長發(fā)育階段的動物對藥物的毒性反應(yīng)較敏感；2年齡較大的動物反應(yīng)性降低,存在許多自發(fā)性疾病干擾試驗結(jié)果。3一般選擇較年輕的或正處于生長發(fā)育階段的動物。5/1/202330.嚙齒類動物最好在斷奶后不久即開始給藥

大鼠起始周齡要求在4~9周齡；

犬的起始月齡為4~9月齡，一般不超過12月齡；如選用雜種狗，起始年齡可稍大些。二、實驗動物

2.起始月(周)齡5/1/202331.起始體重應(yīng)在體重均值±

20%的范圍內(nèi)。二、實驗動物

2.起始月(周)齡5/1/202332.3.性別及數(shù)量（1）性別二、實驗動物

☆一般來講是兼用兩種性別的動物，每個劑量組中雌雄性別的動物數(shù)必須一致。5/1/202333.在特殊情況下如藥物對雄性（或雌性）生殖細胞的毒效應(yīng)已確知，或者急性試驗已證明藥物對雌雄兩性動物的毒性有明顯差別時，就應(yīng)主要選用敏感性別的動物進行試驗。二、實驗動物

3.性別及數(shù)量（1）性別5/1/202334.超過90天的試驗嚙齒類動物每組至少40只（雌雄各20只）；非嚙齒類每組8~10只（雌雄各4~5只）。90天以內(nèi)的試驗嚙齒類動物每組至少20只（雌雄各10只）；非嚙齒類每組6只（雌雄各3只）；二、實驗動物

3.性別及數(shù)量（2）數(shù)量5/1/202335.超過90天的試驗嚙齒類動物每組至少40只（雌雄各20只）；非嚙齒類每組8~10只（雌雄各4~5只）。90天以內(nèi)的試驗嚙齒類動物每組至少20只（雌雄各10只）；非嚙齒類每組6只（雌雄各3只）；二、實驗動物

3.性別及數(shù)量（2）數(shù)量《指導(dǎo)原則》：一般大鼠為雌、雄各30只，Beagle犬或猴各3~6只。5/1/202336.恢復(fù)期觀察的動物數(shù)；給藥期的長短，過長，試驗過程中的自然死亡動物數(shù)。注意5/1/202337.4.飼養(yǎng)管理嚴(yán)格控制環(huán)境條件，避免不必要的干擾因素是非常重要的。二、實驗動物

5/1/202338.酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕度光照通風(fēng)條件飲水質(zhì)量環(huán)境因素4.飼養(yǎng)管理二、實驗動物

5/1/202339.光照通風(fēng)條件酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕度飲水質(zhì)量環(huán)境因素4.飼養(yǎng)管理二、實驗動物

適宜溫度為18~26℃。相對濕度為40%~70%。光照宜持續(xù)12h明亮，12h黑暗。通風(fēng)條件良好。所用飼料應(yīng)符合動物的營養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。5/1/202340.光照通風(fēng)條件酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕度飲水質(zhì)量環(huán)境因素4.飼養(yǎng)管理二、實驗動物

嚙齒類動物雌雄動物應(yīng)分開飼養(yǎng)，每籠不宜超過5只5/1/202341.酮癥酸中毒4.飼養(yǎng)管理二、實驗動物

犬光照通風(fēng)條件酮癥酸中毒室內(nèi)溫度飼料或飼料配方濕度飲水質(zhì)量環(huán)境因素單籠飼養(yǎng)，定量喂食。

Beagle犬實驗前至少馴養(yǎng)1~2周;

雜種狗應(yīng)先檢疫，驅(qū)蟲。5/1/202342.試驗前觀察記錄動物的行為活動、飲食、體重、精神狀況、心電圖，檢測心、肝、腎功能2次；選擇正常、健康、雌性無孕的動物作為受試動物。5/1/202343.

雪貂作為實驗動物的資料介紹，還在本世紀(jì)，雖然它還未被廣泛應(yīng)用，但它對人類健康的貢獻無疑是很重要的（北美常用）。

5/1/202344.

雪貂是食肉類動物，屬于鼬科。經(jīng)馴化供實驗的雪貂毛色呈野生色或白化的。它缺乏盲腸、汗腺，雄貂缺乏前列腺。通常雪貂的實驗和繁殖期為5至6年，而整個壽命約14年。雄貂體重可為雌貂的兩倍。

雪貂在早期用于傳播病毒性疾病的研究，如犬瘟和人類流感，對其它一些病毒性疫病，雪貂也提供了獨特的、合適的模型，如麻疹、皰疹性口炎，阿留申病和牛鼻氣管炎。雪貂已應(yīng)用于病毒學(xué)、生殖生理、藥理學(xué)等研究，最近報導(dǎo)特殊適合毒理學(xué)試驗。還可作為小腦發(fā)育不全、流行性感冒等動物模型來研究人類相應(yīng)的疾病。5/1/202345.三、給藥期限按我國藥政管理部門的要求，長期毒性試驗的給藥期限一般為臨床療程的3~4倍時間。創(chuàng)新藥品試驗周期應(yīng)不少于90天，超過180天的新藥可以在試驗開始90天后，同時進行I期臨床試驗。創(chuàng)新藥物是指具有自主知識產(chǎn)權(quán)專利的藥物。相對于仿制藥，創(chuàng)新藥物強調(diào)化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎或新的治療用途，在以前的研究文獻或?qū)＠校匆妶蟮馈?/1/202346.我國藥政部門關(guān)于一般藥物重復(fù)給藥毒性試驗期限的規(guī)定臨床擬用毒性試驗期限給藥時間嚙齒類動物非嚙齒類動物﹤5天

2周

2周﹤2周

1月

1月

2-4周

3月

3月

1-3月

6月

6月

﹥3月

6月9月

5/1/202347.我國藥政部門關(guān)于一般藥物重復(fù)給藥毒性試驗期限的規(guī)定臨床擬用毒性試驗期限給藥時間嚙齒類動物非嚙齒類動物﹤5天

2周

2周﹤2周

1月

1月

2-4周

3月

3月

1-3月

6月

6月

﹥3月

6月

9月

每天給藥最好固定時間。5/1/202348.四、劑量水平的選擇

三個劑量組是必不可少的：一個是足以引起明顯的毒性反應(yīng)的高劑量，但死亡率應(yīng)控制在10%以內(nèi)；一個是不引起毒性作用的低劑量(一般為動物有效劑量或臨床治療量的2~3倍)；為表明毒性作用的量—效關(guān)系，在上述兩個劑量之間插入一個(或多個)中間劑量。5/1/202349.亞慢性毒性試驗基礎(chǔ)最大劑量：選擇90天試驗中體重增長不到10%的劑量；中劑量：1/4最大劑量；低劑量：1/8最大劑量。5/1/202350.最高劑量組的基本要求僅出現(xiàn)輕度毒性，不改變試驗動物的正常壽命，或至少在給藥的前四分之一時間內(nèi)不影響動物的體質(zhì)，外觀無異常，可有血清酶活力的改變或輕度體重增長抑制（＜10%）。5/1/202351.在選擇合適的劑量時還應(yīng)考慮到：

①藥物在體內(nèi)的生物蓄積作用。對于高蓄積性藥物應(yīng)適當(dāng)減少其劑量，否則在長期毒性試驗結(jié)束時各劑量均有可能出現(xiàn)毒性作用；②藥物是否有可能被特殊的酶所“解毒”或“活化增毒”，而這些酶又是否易被藥物本身所誘導(dǎo)或抑制。③藥物在消化道中的穩(wěn)定性。與胃腸道內(nèi)容物有親和性的藥物，則應(yīng)酌情增加劑量。

5/1/202352.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量（LD50）法根據(jù)急性毒性的LD50值決定三個劑量。一般在大鼠3個月長期毒性試驗中，高、中、低三個劑量可分別采用約LD50的1/10、1/50和1/100劑量，狗各劑量組可采用大鼠相應(yīng)各組的1/2~1/3劑量。5/1/202353.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量（LD50）法（2）短期蓄積試驗過渡法根據(jù)急性毒性試驗所提供的相關(guān)信息，如毒性的量—效關(guān)系，毒性出現(xiàn)的劑量范圍及敏感動物等，先過渡到7天至21天的短期蓄積性試驗，再將獲得的參數(shù)外推于長期毒性試驗。5/1/202354.急性毒性試驗蓄積毒性試驗和/或7天短期重復(fù)給藥試驗90天重復(fù)給藥試驗180天或更長期重復(fù)給藥試驗5/1/202355.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量（LD50）法（2）短期蓄積試驗過渡法

①Traina法

第一步：確定大鼠亞急性毒性試驗的最高劑量

根據(jù)大鼠的急性毒性試驗找出最大無癥狀劑量，再分別以該劑量及其1/3和1/10量給三組大鼠（雌雄各半）連續(xù)服藥2~3周。（此劑量下的動物僅出現(xiàn)輕微的毒性反應(yīng)，如食耗量略減，體重增長率略慢等）5/1/202356.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量（LD50）法（2）短期蓄積試驗過渡法

①Traina法

①Traina法

第一步：確定大鼠亞急性毒性試驗的最高劑量

第二步：確定犬亞急性毒性試驗的最高劑量

以大鼠亞急性毒性試驗的最高劑量為起點，給狗單次服用，根據(jù)觀察結(jié)果適當(dāng)增減劑量（對數(shù)間隔），找出狗單次服藥的最大無癥狀劑量，再分別以此劑量及其1/3和1/10量給少數(shù)狗連續(xù)服藥2~3周。5/1/202357.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量（LD50）法（2）短期蓄積試驗過渡法

①Traina法

②Homburger法

選擇一個劑量給雌雄各5只大鼠，連續(xù)服藥2周。如果無動物死亡，再成倍增加劑量，直至出現(xiàn)死亡；如果第一個劑量就出現(xiàn)動物死亡，再成倍減少劑量，直至無死亡出現(xiàn)。5/1/202358.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量（LD50）法（2）短期蓄積試驗過渡法

①Traina法

②Homburger法

選擇一個劑量給雌雄各5只大鼠，連續(xù)服藥2周。如果無動物死亡，再成倍增加劑量，直至出現(xiàn)死亡；如果第一個劑量就出現(xiàn)動物死亡，再成倍減少劑量，直至無死亡出現(xiàn)。以無動物死亡的劑量為最大非致死量，以首次出現(xiàn)動物死亡的劑量為最小致死劑量，求算最大耐受量（MTD）。5/1/202359.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量（LD50）法（2）短期蓄積試驗過渡法

①Traina法

②Homburger法

選擇一個劑量給雌雄各5只大鼠，連續(xù)服藥2周。如果無動物死亡，再成倍增加劑量，直至出現(xiàn)死亡；如果第一個劑量就出現(xiàn)動物死亡，再成倍減少劑量，直至無死亡出現(xiàn)。以無動物死亡的劑量為最大非致死量，以首次出現(xiàn)動物死亡的劑量為最小致死劑量，求算最大耐受量（MTD）。MTD=lg-1[(lg最小致死劑量+lg最大非致死劑量)/2]5/1/202360.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗過渡法

①Traina法

②Homburger法

③Weil法

取初斷乳大鼠30或40只，隨機分為3~4組，每組雌雄各5只。連續(xù)給藥7天。觀察死亡率、體重、肝腎指數(shù)和進食量的改變。找出7天藥物最小有效量（MIE）。MIE90天=MIE7天/6.25/1/202361.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量（LD50）法（2）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)（MBS）法

根據(jù)藥代動力學(xué)最大有效安全濃度（MCD）大鼠3個月長期毒性試驗時，低、中、高三個劑量可分別采用大鼠的1.0、3.3~6.6和10~20MCD;狗一般可采用大鼠1/2~1/3的劑量。注意：國內(nèi)應(yīng)用不多。5/1/202362.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)（MBS）法根據(jù)大鼠急性毒性試驗的最大耐受量(MTD)(最大無癥狀劑量)大鼠長期毒性試驗的三個劑量分別為1、1/3及1/10MTD；狗和猴可采用大鼠1/2~1/3的劑量。（4）最大耐受量（MTD）法注意：蓄積性大的藥物參考價值小。5/1/202363.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量（LD50）法（2）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)（MBS）法根據(jù)臨床擬用劑量（3個月長期毒性試驗）

大鼠低、中、高三個劑量可分別采用50~100倍、25~50倍和10~20倍臨床擬用劑量狗可分別采用30~50倍、15~25倍和5~10倍臨床擬用劑量猴可采用與狗相近的劑量或略低于狗的劑量進行試驗（4）最大耐受量（MTD）法（5）臨床擬用劑量（ACD）法5/1/202364.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)法（MBS法）根據(jù)人和動物的等效劑量比值，再按一定倍數(shù)擴大。（4）最大耐受量法（MTD法）（5）臨床擬用劑量法（ACD法）（6）等效劑量法5/1/202365.不同動物的劑量折算系數(shù)

動物種屬小鼠大鼠豚鼠兔貓猴狗人標(biāo)準(zhǔn)K(劑量折算系數(shù))

1

7

12.3

27.5

29.7

64

124

388體重K(kg體重劑量折算系數(shù))

1

0.71

0.62

0.37

0.30

0.32

0.21

0.11任何R(動物體型系數(shù))

0.059

0.09

0.099

0.093

0.082

0.111

0.104

0.1體重W(標(biāo)準(zhǔn)體重kg)

0.02

0.2

0.4

1.5

2

4

12

70注：有些資料記載的動物體型系數(shù)（R）為此表中R值的1000倍，如小鼠R為59，大鼠R為90，這不影響藥物劑量的折算。5/1/202366.對于標(biāo)準(zhǔn)體重的動物：

每只用量（mg/只）DB＝DA·KBKA千克體重劑量（mg/kg）dB＝dB·KBKAKA，KB，RA，RB值由上表查找5/1/202367.對于任何體重的動物：

每只用量（mg/只）DB＝DA·RB·(WB)2/3RAWA千克體重劑量（mg/kg）dB＝dA·RB·(WB)2/3RAWA式中DB、dB分別是欲計算的B種動物的每只劑量及公斤體重劑量，DA、dA分別是已知A種動物的每只劑量及公斤體重劑量，WA、WB是已知動物體重，RA、RB是體型系數(shù)，可由上表查得。5/1/202368.可供參考的具體方法（1）半數(shù)致死量法（LD50法）（2）短期蓄積試驗過渡法（3）藥代動力學(xué)法（MBS法）（4）最大耐受量法（MTD法）（5）臨床擬用劑量法（ACD法）（6）等效劑量法5/1/202369.五、給藥方法長期毒性試驗的給藥途徑一般應(yīng)盡量與預(yù)期臨床使用的途徑相一致。臨床用藥途徑為靜脈或肌注時，3個月及以上的試驗，由于試驗周期長大鼠給藥有困難，可用腹腔或皮下注射代替。臨床用藥途徑為口服時，可采用口服、灌胃或片劑、膠囊給藥，也可混于飼料中給予。5/1/202370.五、給藥方法灌胃給藥可將供試藥物制成一種溶液或混懸液，但必須注意給藥容量不應(yīng)超過1~2ml/100g體重/天。優(yōu)點：給藥劑量精確；時間易于掌握；從藥動學(xué)角度出發(fā)符合臨床給藥的實際情況。缺點：技術(shù)要求高（誤入氣管）；屬外界刺激。5/1/202371.五、給藥方法混于飼料給藥則需計算食耗。食耗：從斷奶至成年期食耗不同。藥物量：要求每周或每兩周根據(jù)各組動物的平均體重進行調(diào)整。灌胃5/1/202372.預(yù)計動物體重（W）W3rd=W2nd+1/2(W2nd-W1st)預(yù)計食耗（FC）FC3rd=FC2nd+1/2(FC2nd-FC1st)預(yù)計食耗率（R）R3rd=FC3rd/W3rd=g飼料/kg體重/動物/天

預(yù)計藥物濃度（C）C3rd=給藥劑量（mg/kg體重/動物/天）R3rd（

g飼料/kg體重/動物/天）5/1/202373.注意事項藥物在飼料中的含量不應(yīng)超過5%；藥物的異味對飼料進行階段性檢查，確保藥物在飼料中的穩(wěn)定性。飼料抽樣：新鮮配制存放一定時間5/1/202374.五、給藥方法混于飼料稀釋劑：惰性的，如乳糖、甘露醇、干酪、淀粉、白陶土、碳酸鈣、磷酸鈣。灌胃膠囊或片劑給藥，將受試物與稀釋劑混合。明膠膠囊，（賦型劑）片劑5/1/202375.五、給藥方法一般情況：長期毒性試驗均強調(diào)每天給藥，每周必須給藥7天。給藥期限長（≥3個月）的藥物每周至少應(yīng)給藥6天。給藥頻率特殊情況：參考體內(nèi)代謝速度。5/1/202376.六、觀察及測定指標(biāo)

試驗前，嚙齒類動物至少應(yīng)進行5天的適應(yīng)性觀察，非嚙齒類動物至少應(yīng)馴養(yǎng)觀察1~2周，應(yīng)對動物進行一般觀察及血液生化學(xué)指標(biāo)的檢測。

試驗期間，至少應(yīng)每天或每兩天作一次詳細的觀察。

試驗結(jié)束時，必須留1/3的動物做恢復(fù)期的觀察試驗，其觀察期時間一般不超過28天（可逆性）。5/1/202377.（一）日常觀察

1.一般觀察內(nèi)容

包括對實驗動物被毛、皮膚、眼睛、粘膜、孔道(及其分泌物)、呼吸、循環(huán)、自主神經(jīng)系統(tǒng)、軀體和肢體活動情況以及精神行為進行仔細地觀察；對動物糞便的量、色澤和內(nèi)含物，散失的食物，飲水瓶中殘余的水以及一切可以反映動物生活情況變化的各種跡象，都必須加以注意。所有出現(xiàn)的癥狀都必須記錄在案。觀察及測定指標(biāo)5/1/202378.1.一般觀察內(nèi)容

如果發(fā)現(xiàn)動物死亡，必須盡可能快地進行尸體剖檢，以減少組織自溶。將組織置于10%的中性福爾馬林或其它適宜的固定液中。如果尸體剖檢不能立即進行，則必須將動物冷藏起來以延緩組織自溶。（一）日常觀察

觀察及測定指標(biāo)5/1/202379.1.一般觀察內(nèi)容

對瀕死的動物也應(yīng)立即處死作尸體剖檢。（一）日常觀察

尸體剖檢后行組織病理學(xué)檢查、評價。觀察及測定指標(biāo)5/1/202380.2.生長率

（一）日常觀察

觀察及測定指標(biāo)食耗量飲水量體重

低毒藥物的毒性表現(xiàn)5/1/202381.（一）日常觀察

觀察及測定指標(biāo)3.食耗食耗常用來評價給藥對食欲及食物利用率的影響食耗的計算

將加入供食器具中飼料的重量減去剩余的飼料重量再除以給食天數(shù)5/1/202382.將給藥組和對照組的食耗加以比較，有助于說明藥物是否影響實驗動物的食欲。（吸收、合成代謝）

（一）日常觀察

觀察及測定指標(biāo)3.食耗食耗常用來評價給藥對食欲及食物利用率的影響食耗的計算

5/1/202383.（二）測定指標(biāo)

1.器官重量

觀察及測定指標(biāo)5/1/202384.２００５年ＳＦＤＡ組織編寫

《藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則》規(guī)定長期毒性試驗中需稱重并計算臟器系數(shù)的器官腦肝臟腎上腺脾臟附睪子宮心臟腎臟胸腺睪丸卵巢肺臟觀察及測定指標(biāo)目的：確定靶器官甲狀腺、前列腺5/1/202385.長期毒性試驗中進行病理組織學(xué)檢查的組織或器官：腦（大腦、小腦、腦干）垂體甲狀腺食管胃肝臟腎臟脾臟氣管主動脈附睪卵巢前列腺坐骨神經(jīng)眼（眼科檢查發(fā)現(xiàn)異常時）＊給藥局部淋巴結(jié)脊髓胸腺甲狀旁腺唾液腺小腸和大腸膽囊＊腎上腺胰腺肺心臟睪丸子宮乳腺膀胱視神經(jīng)＊骨髓注：＊為嚙齒類動物可不進行組織病理學(xué)檢查的組織或器官5/1/202386.

器官重量降低，表示該器官萎縮或發(fā)育不良；器官重量增加提示可能有充血、水腫、增生、肥大、酶誘導(dǎo)變

化或新生物等。

將動物處死后取出上述器官，除去附著的組織、除盡余血后立即稱重（注意勿使組織干燥）。（二）測定指標(biāo)

觀察及測定指標(biāo)

1.器官重量

5/1/202387.2.血液學(xué)（二）測定指標(biāo)

常規(guī)的血液學(xué)參數(shù)骨髓涂片觀察及測定指標(biāo)

1.器官重量

5/1/202388.２００５年ＳＦＤＡ組織編寫

《藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則》規(guī)定血液學(xué)指標(biāo)紅細胞計數(shù)紅細胞容積平均紅細胞血紅蛋白網(wǎng)織紅細胞計數(shù)血小板計數(shù)血紅蛋白平均紅細胞容積平均紅細胞血紅蛋白濃度白細胞計數(shù)及分類凝血酶原時間紅細胞壓積觀察及測定指標(biāo)5/1/202389.

血液學(xué)指標(biāo)觀察時間非嚙齒類動物一般于整個試驗周期中每隔1.5~2個月采血測定一次各項指標(biāo)。嚙齒類動物

試驗周期為6個月時，可于試驗中期、試驗?zāi)?/p>

期以及恢復(fù)期分別剖殺部分動物(約1/4、

2/4、1/4)，進行各項檢查；試驗周期為3個月時，可于試驗未期以及恢復(fù)