移植排斥反應的預測與診斷試劑盒的開發(fā)生產

項目建議書朋項目糖領域駁：菜生物技術鞠激曾侄惑期假項目名稱：炮移植排斥反翁應的預測、戶診斷試劑盒顆的開發(fā)生產供燈單昏步位：譽陜西瑞奇生舒物科技有限紅公司靜股雞狹基本信息扇約1.項目負惱責人基本情娛況添姓名幸胡軍壤性別棍男勵出生年月漲1962辜.誘10檔學歷圖研究生法學位霧博士于獲得最終男學位院校合第四軍醫(yī)大宗學等所學專業(yè)鄰移植免疫學潮現從事專業(yè)存移植免疫學要職稱序講師條職思務船/嶼主要工作經紹歷睛1982-班1989年散，在河南省鄭確山縣衛(wèi)生老防疫站從事易流行病防治馬工作。黃1989-述1992年笨，賽在當第四軍醫(yī)大婆學微生物學階教研室病毒渡及其免疫分專業(yè)讀碩士僅學位。隙1992-歪1996年括在據第四軍醫(yī)大更學效微生物學教哲研邪室博從事病毒及師其免疫連和移植免疫寬的研究工作殼。機1996-阿1999脆年，在第四艘軍醫(yī)大學西要京醫(yī)院心血靈管續(xù)病研究所凈移植免疫學賠專業(yè)讀博士予學位得。嫩1999-混2001年諷魯在第四軍醫(yī)帝大學西京醫(yī)秘院心血管直病研究所刮從事移植免纖疫學研究。宮2續(xù)001年至誘今，從事生孝物技術產品吹的開發(fā)研究山，主要從事那移植免疫學玉產品的開發(fā)勻工作雁。姓主要工作成遣績次從事過的主淘要重大項目凳情況、研究達成果和獲知召識產權情況如（不限字數晉）稻1、軍隊重鎖大課題《心育肺聯合移植漆臨床研究》尼2002.昌05-20殊05.12欲主要參加遣者。項目進定展順利。缺2、《心臟籍移植臨床與展基礎研究丑》項目的主瘋要參加者，票已獲得重陜西省科技泥進步一等獎幼。雪3、已獲得孤國家發(fā)明專四利一項，買已境申請的發(fā)明葉專利一項，獅準備申請的兔專利兩項。均2.眾項目基本信躬息啦項目內容摘棟要（限50刊0字）：器末官移植排斥擇反應預測、亡診斷產品的歸開發(fā)生產送器官移宏植是臨床上址發(fā)展最迅速顫的一個領域藥，稈據權威機構嘩預測，到二苗十一世紀中恨葉，外科手咱術根的一半都將蘇是器官置換武。世界上已泳有疑70多萬人食接受了器官帝移植，而且艘這個數字還析在以每年5冤萬多例的速味度增加，但茅臨床上對器軌官移植病人趙的選擇及移此植后排斥反勸應的無創(chuàng)診獵斷、監(jiān)測手采段等尚未建西立起來部；索這嚴重制約治了器官移植騙的發(fā)展和水古平的史提高。已本項目把基房因工程技術士和傳統(tǒng)免疫李學方法及新催建立的免疫凈學方法結合蓮起來，樹制備勢世界通用的杯HLA抗原著標準細胞，春為器官移植牲前的供退、錦受體搭配，題移植后排斥特反應的預測此、診斷提供喬快捷、敏感棟、特異、墳可靠遍、片無創(chuàng)班的科學攝檢測方法將，該方法目佛前已用榮于臨床心臟昆移植的排斥迫反應的診斷死，經過大量鐵的臨床活檢社對照有很好劣的一致性，毯該方羽法的最佳反窯應條件也已垮基本建立，傻目前只需制陡備出通用檢稼測試劑盒生疲產所需的原調材料川即可進行產日品的大規(guī)模銳生產隙。該項目的芬成功填補了曲世界賄器官移植領呼域的空白，溜對蛙急性排斥反半應的早發(fā)現寧、早診斷、猴早治療，明俱顯禍提高移植患陶者的生存質欺量，延長蕉存活期限均室具有鳥革命性的蹦重要作用。廁不但具有廣船泛的社會里效益枕，而且還具惹有巨大的經區(qū)濟效益。給該試劑盒的劈出現會大力仍推動器官移瞎植領域的發(fā)繞展，終將使攔全球器官移課植的總體水家平有明顯提拖高?？贡卷椖课浽牧系闹蒲觽浜耸褂玫募夹g宅是目前最先晨進的基因工拿程技術；迫其所用的混德合淋巴細胞煙培養(yǎng)方法是體目前免疫學饞專家公認的息，耕反映機體細倒胞免疫狀態(tài)頌最礙好的體外模暖型；所用的糧混方合淋巴細胞喘反應抑制試酷驗是我們近蓄期才澇新作建立的一個抽細胞跌免疫學羨檢測的新淡方法店，并已申請律專利視，故本項目饞產品短期內遵被其他更先戰(zhàn)進的技術和影方法所取代苗的可能性不僵大。所使用菊的主要原材吹料壁和主要技術琴均許立足國內，鍋采購渠箱道通暢。副器官移植排所斥反應預測牲、診斷、監(jiān)陪測領域在世再界上屬于一令個尚未開發(fā)觀的領域,刮尚未有練與排斥反應擺診斷件有關的試劑三盒推出,奔我們申請國謹內外專利后松可保護20匙年。冊目前排斥反傍應預測試劑果盒已獲國家膀發(fā)明專利，箱正在申請美角、日、德、撐英、印五國駁的謎專利；排斥冊反應診斷試歡劑盒已申請炎國家發(fā)明專此利。寸本產品的出滅現將搶占全仆球器官移植順領域產品的垂至高點。前本項目產品哲以出口為主素，市場約4傍-5億美元申/年（市場顏上無同類競議爭產品）。媽預計總投資煮約5000埋萬元人民幣墳，首期投資錫需1000順-1500無萬元人民幣現。投資到位塵后18-2柄4個月可具鉤備批量投產委條件，生產軟能力桶為年產80寶萬套，投產菌一年后年產常150萬套增。屆時，年術銷售收入2類0億元人民詠幣，稅收3走億元人民幣鈔，凈利潤8楚億元人民幣跑。產品上市鼓后一年可收怒回全部投資經。挨二、項目情虹況老1、研究的攻目的及意義求、應用需求馬、研究開發(fā)信的必要性（偵不限字數）壞1膊.1項目研焦究的目的、客意義寇針對危害人扶類健康的為各器官的索終末期疾病翁，器官趣移植是咽目前嘉唯一望的紗治療手段璃。拍器官移植術巾前排斥反應裁的預測、蠅術智后排斥反應壟的監(jiān)測與診令斷虜，以及最大躲限度地減少攏甚至避免病慈理排斥反應棟的發(fā)生勉等是臨床器陳官移植看急需弄解決的問題氧，也是國內扮外共同關注量的熱點和難敲點問題。本沿項目通過基塑因工程技術問和細胞打工程技術，射建立HLA之抗原標準細電胞漏檢測平臺體，為器官移宏植前的供受訊體搭配、移皇植后排斥反慧應的預測、撓監(jiān)測首、現診斷圣、預防和技設術服務保障撥提供椅快捷、敏感韻、特異、弄可靠幟、檢無創(chuàng)集的科學渣檢測方法甘。諒該項目的成撈功填補了約世界援器官移植領鄉(xiāng)域的空白，連對針排斥反應的肯早登發(fā)現、早診擁斷、早治療像，明顯臺提高移植患列者的生存質過量，延長存糟活期限均具絨有別革命性亡的笨重要作用。憂不但具有廣耽泛的社會醒效益丑，而且還具潑有巨大的經命濟效益。勵該試劑盒的岡出現會大力汗推動器官移嬸植領域的發(fā)漁展，終將使敘全球器官移霉植的總體水著平有明顯提剛高。機由于忍該項目認填補了躬世界促器官移植領換域的空白，色它的出現將窮搶占全球器聾官移植紀領域產品的庸至高點。屬將使我辟國炒在世界生物輩技術產品領喚域擁有一席鋼之地。為裹我國志生物技術的然產業(yè)化發(fā)展縫開辟一個新桐領域，對促永進穗我國僵生物技術產跌業(yè)向多元化殃發(fā)展具有重怨要意義。藥1.2符應用需求及獻研究開發(fā)的伯必要性刃器官移植是撤目前臨床上曲發(fā)展最迅速幼的一個屈領域,有企人預測,質到二十一世校紀中葉,絲外科手術的底一半都將是教器官置換.單目鞭前世界上已蝦有70多萬僵人接受了器坦官移植,壩而且這個數惠字還在以每網年支近梢5萬的速度荒增加,但數目前臨床上巨對器官移植償病人的選擇澇都是通過H精LA抗原配嶄型來比較供顧受體差異的壘大小，這種渡比較只是對辟供受體HL剃A抗原的客樓觀存在的差蓬異性進行比撕較，不能反阻映他們各自擋HLA抗原事組合的功能吃狀況，而不念同的抗原組演合具有不同拼的免疫反應隸性，所以，蹦原來的方法苦不能反映一測個人的HL諒A抗原組合艙對人類某一取個HLA抗府原的免疫反幼應性。而本顆方法是一個賄功能性檢測帳方法，是了蛾解一個人的醬HLA抗原巷組合繪對各種不同替特定抗原反規(guī)應性的方法維。這一方法美所得結果更珠接近人體內儲實際的免疫絹反應減狀況。目前姜對吃移植后排斥逗反應的煩確定主要是秤通過有創(chuàng)，譽痛苦、非特龍異的活檢穿留刺方法。臨撤床上急需的若快捷、敏感裂、特異、罵可靠冷、宜無創(chuàng)崗的科學顯手段尚未建刑立圾。再者浮器官移植后桐,受體需終位生使用免疫脅抑制劑,千但服用該藥洗的劑量過大醉不僅導致費憶用增曠加(一般一坊年需女數催萬元人民幣葬),且受壞體易患感染啞性疾病及惡犧性腫瘤等,蔬服用劑量嗽過小又會導冬致移植器官某被排斥而失疤去功能,裁如何對具體敘的個體選擇雹合適的用藥剖劑量是長期毀以來困擾臨限床醫(yī)生的一炕個難題。多笑年來指導用勺藥的恢“落金指標治”礦一直是牙上述的則活賣檢穿刺,星但由于活檢節(jié)穿刺費用高探且犯有創(chuàng)、厭痛苦,不難易為病人接莫受,而且侵穿刺本唇身具有危險赤性,不宜攻多做,故籌移植后糧在醫(yī)生未察限覺的情況下輩突然因排斥針反應使移植灑器官失去功殃能而導致病掠人死亡鹿情況屢有發(fā)賊生概。再如,舊許多病人在抗移植后,勻由于經濟原湯因而停用免裳疫抑制劑,喘結果發(fā)現疫其中有些病虹人停藥后并蹲不發(fā)生排斥姓反應,也忠就是說這些劍病人對供體的器官產生了銀免疫耐受，虜在未停藥的辯患者中，實蹈際上可能有柳不少患者旱已畏對供體器官食產生了耐受僻。然而，烤由于沒有一南個科學的指帽標去檢測并裹說明該患者畫已對供體器尿官產生了耐腥受，所以槍，醫(yī)生很難柿確定獨停用免疫抑緞制劑攝的時機，從椒而，使移植仁后舊停用免疫抑動制劑匠成為一種艇冒險。雕因此，本方犯法將對器官決移植前的供概受體或選擇、移植爽后的排斥反典應的確定以西及娃停用免疫抑隸制劑黑時機的掌控嚇有革命性的噸貢獻。顫器官移植是典治療許多器里官終末期疾蹲病的唯一方類法。在器官箱移植后，供造受體間鑼HLA抗原癢的差異將引聚起排斥反應庸，排斥反應惰仍是目前影冶響心、肝、己腎、骨髓等東器官脅或細券胞移植后1編年、5年、烏10年存活勤率的主要因泊素，如果漆有一個在移驕植以前可以恥挑選供受體業(yè)使之合理搭勺配(即挑選涂那些移植后毅可能發(fā)生排荷斥反應較輕脖或不發(fā)生排廢斥反應的供裙受體進行移晴植,這一撞點對骨髓移哀植尤為重要準)、在移植熟后能檢測有任無排斥反腥應發(fā)生、移零植器官有無各淋巴細胞慢叉性浸潤及受棗體對供體器擴官有無免疫輸耐受發(fā)生等盤的無輩創(chuàng)司檢測漸方法,勿對桐指導臨床醫(yī)質生合理調整盾免疫抑制劑列用量蔬、妨使之適時停駝藥(將大大撞減輕病人的愁經濟負擔)晌,芬提高病人生塔存質量，茄降低移植病乞人的死亡率垮,延長移持植器官的存坑活時間朽具有重要意睡義命,澡這將鞠有力推動器芹官移植事業(yè)嬌的發(fā)展。以所以號,島隨著接受器初官移植的患犧者的不斷增謀加及移植免霸疫學的迅速止發(fā)展,建婚立一套完善片的移植前對堡供受體選擇現,移植后乘監(jiān)測受體對炎供體特異性統(tǒng)免疫狀態(tài)的牢無創(chuàng)檢測方拳法,對供棒體器官的長枯期存活已變葬得越來越重戰(zhàn)要。但塘在本方法出凝現以家前,臨床賣上尚沒有一土個裂快捷、敏感喊、特異、燃可靠斜、唯無創(chuàng)固的科學原的指標來指環(huán)導移植前供袍體的挑選,現移植后栽排斥反應和保免疫耐受的松診斷,及免繩疫抑制劑座用量調整的膏方法。兔2．主要研餅究開發(fā)內容法、擬解決的因技術難點、綢創(chuàng)新突破點柴以及預期達賢到的目標、即主要經濟技評術指標和水憑平（不限字返數）幕2.1本項砌目研究開發(fā)扁的主要內容輸：紀將傳統(tǒng)免疫利學蛙檢測方法和梢現究代分子生物咱學技術有機價結合，建立炒一套可應用羽于臨床器官晶移植排斥反塑應預測的肺快捷、敏感乏、特異、狗可靠岡、景無創(chuàng)撤的科學德方法諒；在進行傳室統(tǒng)免疫學研系究過程中建堂立一個全新你的免疫學方寇法，應用于言排斥反應的摸臨床診斷。怒主要研究內妖容有：址(1)創(chuàng)排限斥反應預測喝：疼它是運用分籍子生物學技頑術，建立表股達HLA-?、癜孱惡蜆英蛴款惪乖臉苏鳒蕬旨毎辏勾倜堪l(fā)株細胞上只星表達一個H貸LA抗原?？谠侔堰@些幾飄乎包含了惡人類繞全部HLA石抗原的細胞早株的細胞分棟別放入細胞傭培養(yǎng)板各孔情之中，制成醒標準細胞板丈作為抗原板皆，用該抗原門板通過混合加淋巴細胞培膛養(yǎng)方法來檢煩測受體對哪脅些HLA抗胸原反應強、宿對哪些HL處A抗原反應統(tǒng)弱，從而指踐導我們?yōu)槭芸囿w挑選合適籍的供體器官挺，以減少移憶植后排斥反某應的發(fā)生。邁其主要研究振內容包括：直A、論HLA抗原尖缺失細胞系渴（作為HL兇A抗原表達慎的空白細胞攝載體）的選泊擇與鑒定，阻已完成。漲B、抗通過EB病盜毒感染的方網法建射立包含惕已知泄人類全部H債LA抗原的樓幾十個細胞預系（該項工迷作已經基本雞完成），并肝分別疼從這些細胞協(xié)中提取mR疾NA進行反躬轉錄，再通巧過PCR方輩法從反轉錄質的c宜DNA中克鍵隆出目的基澡因進行測序陳，該項工作掉正在進行中雞，已經完成耍了其中一收部分錄。揭C、域選擇一種能捉在真核細胞壽中表達、并守且能整合到薯宿主細胞基停因組中的逆果轉冶錄器病毒表本達載體灶，構建H局LA抗原表菊達載體，該塵項工作正在妙進行中（已榆構建出10幼余個抗原表洽達載體）。戰(zhàn)D、餅把HLA抗笑原表達載體迷經包裝后轉聯染入細胞中佛表達（正在偏進行中）。續(xù)E、匪篩選穩(wěn)定表剃達某一個H掏LA抗原的移細胞建株、輩并進行鑒定鋪。奸F、旺重復上述普工作，建立撒分別表達不品同HLA抗緒原鼻近伸100個亞鑼型抗原的細劫胞株。欠G、冠探索用這赤些細胞株瓶作為刺激細劣胞進行混合頂淋巴細胞反園應的最佳條直件。陷H、雄建立這些細男胞株的大規(guī)夏模培養(yǎng)條件隆，用這些細備胞制備包含侮人類全部H摩LA抗原的削檢測板。設I佳、訪用這種HL熱A抗原檢測墻板，通過混騰合淋巴細胞脾反應為器官她移植受者挑稅選供體，同庫時膊對移植后的代患者進行監(jiān)重測，發(fā)現已殊對供體器官梨產生免疫耐拾受的患者，膚并指導其逐載漸勉停用免疫抑催制劑。低J、暈建立用這些隊細胞株作為衰刺激細胞進創(chuàng)行混合淋巴都細胞反應抑延制試驗的最攔佳條溫件。捧(2)調排斥反應等執(zhí)的診斷：唉在進行移植絹免疫學的研耐究過程中，竄我妙們又建立了綿一個全新的場免疫學方法捏，由于其實堪驗方法與混京合淋巴細胞窩反應相似，曬反應伯結果和混合顏淋巴細胞反宵應苗結果奴完全相反，貧暫時我們把悼它叫做混合盲淋巴細胞反旗應抑制試驗脫，該實驗可轉以用來檢測柴外周血中活跪化淋巴細胞郊的特異性，充故使用上述嘩HLA抗原鉆板即可檢測尖器官移植受肝者體內有無勵HLA抗原近活化的淋巴泛細胞，從而怒判斷體內烘有無排斥反象應發(fā)生。該剃方法不但可像以用于診斷篩排斥反應，棍也可能用于抽各種傳染病丑的診斷鋤和預防劈。國⑴貝挑選上述已的被EB病毒跨轉化的細胞府株中相互不袖具有相同抗廳原的細胞株逗，以他們?yōu)榈篙d體，通過府上述基因工襯程的方法，俊把其它的未示包含在所挑膚選的載體中貪的HL苦A抗原分別柳轉入其中并侄表達，使一賭個細胞表達龜盡可能多察的虎HLA抗原浴。從而使這柱些細殖胞株表達幾郊乎人類全部群的H沃LA抗原。糟⑵木用這些表達紗較多HLA絹抗原的細胞涂株制備HL斃A抗原板，虜通過混合淋種巴細胞反應煩抑制試驗對鞏器官移植病剝人進行排斥壓反應監(jiān)測,貝并探索其最仔佳反應條件視。虧⑶殲選擇上述兩作種細胞板中己的一種細胞黃板進行混合甘淋巴細胞反居應抑制試驗喘，對器官移爽植后的患者粘進行排斥反湯應監(jiān)測奏、旗診斷鴉和預防噴。訓⑷辯對混合淋巴玉細胞反應抑租制試驗方法快在臨床感染偷性疾病診斷笑方面的應用嫂進行探索性察研究，爭取寨早日把該方貌法應用到流督腦、乙腦午病毒統(tǒng)、出血熱驗病毒悠、水痘琴病毒嫁、麻疹崇病毒腿、腮腺鹿炎弄病毒、呼吸硬道合胞病毒呈、SARS趨病毒齊等疾病的診聞斷和感染性壤疾病疫苗接倒種后的免電疫效果評價摘方面?？?.2釘擬解決的肥技術難點：侵建立、篩選紐穩(wěn)定表達單孔一HLA抗捏原的各種細排胞株。吊表達HLA卻抗原的細胞犬株的大規(guī)模剩培養(yǎng)技術。嫂2.3繭創(chuàng)新突破點芳：裕（1）利用芽基因工程技允術建立百余購種害分別農只表達一把種鳴HLA抗原癥的頃標準細胞株冬，鋒把這些細胞齊株和傳統(tǒng)免竹疫學技術結躲合建立人類帽混合淋巴細徑胞反應板，喜在世界上首至次建立一個融世界通用的右、體外檢測乖一個個體對志每個HLA荒抗原反應性夕的方法。該非方法已獲國悔家發(fā)明專利新（見附件）蹈。鄙（2）建立顆了一個全新聾的、可以用膏來檢測機沈體內活化淋練巴細胞特異唱性的免疫學況方法（目前簽世界上還沒血有一個檢測流體內活化淋潛巴細鏟胞特異性的震方法），并廟在世界上減推廣趨該方法用于府排斥反應的銅診斷敞和預防堂。權2.4喪預期達到的分目標租偵過2-3姐年的工作，衣完成上述H和LA-送Ⅰ躁類抗原、H狗LA-粉‖黃類抗原近1殃00個亞型諒抗原的表達拿、并使之具撫備生產條件頭。鈔通過領3它-4勇年的究工作檔，用于移植蕩前挑選供浪、額受體附使之合理搭呢配織的委檢測續(xù)試劑盒，用彎于移植后排號斥反應監(jiān)測慣、診斷的試問劑盒均拿到拴生產批號，慨投放并滿足牽國內市場的媽需求，同時香開始進軍國術外市場。殺2.5伴主要技術指拆標和水平：天炸縫主要技術指忠標：顆（1掠）俘表達10多獲種和表達單展種HLA抗姓原的細胞株脆，具有穩(wěn)定拐表達慕、才傳代能力。膝（2訂）叮移植前用于屬預測，可以腳了解一個個甜體對每個H賀LA抗原分菜子的反應性巨；移植后用批于診斷，可押以確定受體懸對供體所含先抗原有無免冠疫耐受發(fā)生柳。跳（3）毫移植后用于奶診斷，不但枯可以確定排蛋斥反應的發(fā)霜生與否，而各且還可以確飾定受體對哪之一個HLA產抗亭原產生了排挺斥反應，精犁確到每一種塔抗原亞型。議（4）常建立哺乳動葵物細胞大規(guī)埋模培養(yǎng)的技給術平臺，建處立和掌握5委0升慈、300升醉動物細胞大軋規(guī)模培養(yǎng)的譯技術條件。帽畏杏水平：案①近預測、診斷渣排斥反應的伍試劑盒達到幅世界領先水迅平。嫌②須有關細胞大避規(guī)模培養(yǎng)的死技術達到國踩內先進水平賓。會2.6季經濟指標打：那①炕預測、診斷踏排斥反崖應的試劑盒播國內上摟市后年利稅疾達到一億元估人民幣。出箏口年創(chuàng)匯譯4市-槐6播億美金。射②曉各種羊傳染性疾病凝檢測試劑盒翅投放市場后恒，可創(chuàng)造不播少于排斥反泊應檢測試劑蓋盒所能創(chuàng)造遮的效益。畏乖綜上分折，怠本項目預計逝投資500郊0萬元，專首期投資需鴉1000-伸1500萬驅元人民幣。老投資到位后撫18-24尤個月可具備架批量投產條語件，生產能家力為年產8端0萬套，投山產一年后年寒產150萬濕套。屆時，爐年銷售收入講20億元人瓦民幣，稅收厚3億元人民備幣，凈利潤額8億元人民漆幣。產品上事市后一年可址收回全部投世資。隙晌嚴針3、預期可步獲得的發(fā)明頃專利等知識戴產權情況（狐不限字數）俘①周目舌前屆已獲得國內介發(fā)明專利一跟個，么專利閘號為：00濾11374鳥7.6裂(見符件)找，蜘其在男美、英、德嬌、日、印度賠的專利申請雪正在進行中榜。京②恨我們建立的攏免疫學新方深法的智也已恰申請