動物傳染病學(xué)：實驗三 快速血清學(xué)檢測技術(shù)

實驗三快速血清學(xué)檢測技術(shù)什么是血清學(xué)檢測？體外進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)，利用已知的抗原檢測血清、蛋黃和牛奶中的抗體，或用已知的抗體檢測組織或拭子樣品中的抗原。血清學(xué)檢測包括：沉淀反應(yīng)凝集反應(yīng)補體結(jié)合反應(yīng)血凝和血凝抑制試驗中和試驗免疫標(biāo)記技術(shù)（標(biāo)記抗體）免疫標(biāo)記技術(shù)免疫酶標(biāo)記技術(shù)免疫熒光標(biāo)記技術(shù)免疫放射標(biāo)記技術(shù)免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)一、實驗?zāi)康亩?、實驗原理三、實驗材料四、實驗方法五、注意事項六、結(jié)果判定乳膠凝集檢測乙型腦炎抗體（一）實驗?zāi)康?.了解并掌握乳膠凝集試驗的基本原理。2.掌握乳膠凝集試驗檢測乙型腦炎病毒抗體的操作方法和結(jié)果判定。（二）實驗原理

乳膠凝集試驗是以聚苯乙烯乳膠顆粒作為載體，吸附特定的抗原或抗體，當(dāng)遇到血清中相應(yīng)的抗體或處理過的病料中相應(yīng)的抗原時，會形成肉眼可見的凝集顆粒。普通乳膠：依靠物理吸附發(fā)生致敏。羧化乳膠：通過化學(xué)發(fā)應(yīng)在乳膠顆粒和致敏原之間形成酰氨鍵，發(fā)生化學(xué)偶聯(lián)致敏乳膠，從而更穩(wěn)定。雙色乳膠：緩沖液和乳膠顆粒為不同的顏色，結(jié)果更易于觀察。乳膠類型（三）實驗材料1.潔凈玻片2.槍頭3.乙型腦炎病毒致敏乳膠4.乙型腦炎陽性、陰性血清5.被檢血清（四）實驗方法1.在一潔凈玻片的3個位置滴加3滴致敏乳膠（每滴約20μl）。2.用移液器分別取20μl的乙型腦炎病毒陽性血清、陰性血清和被檢血清分別滴加到上述3滴致敏乳膠中，并用槍頭混勻。3.輕輕搖晃玻片，使抗原和血清充分混勻，靜置1~2分鐘，觀察結(jié)果。（五）注意事項1.取不同試劑時應(yīng)注意更換槍頭，防止交叉污染。2.混勻過程中，避免陽性對照、陰性對照和被檢樣品之間的交叉污染。陰性陽性（六）結(jié)果判定判定標(biāo)準(zhǔn)++++全部乳膠凝集，顆粒聚集于液滴邊緣，液體透明；

+++大部分乳膠凝集，顆粒明顯，液體稍混濁；

++50％乳膠凝集，但顆粒較細(xì)，液體較混濁；

+有極少量的凝集，液體呈混濁；

-呈原有的均勻乳狀。++++++++++-++++++++-++++++++++++—乳膠凝集試驗的特點1.操作簡捷，結(jié)果易于判定；2.敏感性較低；3.致敏乳膠的穩(wěn)定性低，保存期短。乳膠凝集試驗的應(yīng)用1.病毒性疾?。簜慰袢《究贵w，乙型腦炎病毒抗體，禽流感病毒和抗體，傳染性法氏囊病毒血清抗體，鴨呼腸孤病毒；2.寄生蟲疾?。汗蜗x等；3.細(xì)菌性疾?。贺i萎縮性鼻炎抗體等。一、實驗?zāi)康亩嶒炘砣?、實驗材料四、實驗方法五、結(jié)果判定免疫膠體金層析檢測A型禽流感病毒一、實驗?zāi)康恼莆彰庖吣z體金層析技術(shù)的原理。掌握膠免疫體金試紙條的使用方法和結(jié)果判定。二、實驗原理膠體金是氯金酸（HAuCl4）的水溶膠，氯金酸在還原劑如白磷、抗壞血酸、枸櫞酸鈉、鞣酸等作用下，聚合成為特定大小的金顆粒，并由于靜電作用成為一種穩(wěn)定的膠體狀態(tài)。免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)（Immunogoldlabelingtechnique）是以膠體金作為示蹤標(biāo)記物應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。Test

Control

ConjugateSampleNitrocellulose

MembraneAbsorbentLineLinePadPadPadBacking(mAb2)(G-mAb1)(RIgGanti-M)免疫膠體金層析技術(shù)原理將特異性的抗體以條帶狀固定在膜上，膠體金標(biāo)記試劑（抗體或單克隆抗體）吸附在結(jié)合墊上；當(dāng)待檢樣品加到試紙條一端的樣本墊上后，通過毛細(xì)作用向前移動，溶解結(jié)合墊上的膠體金標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)；再移動至固定的抗體的區(qū)域時，待檢物與金標(biāo)試劑的結(jié)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，可通過肉眼觀察到顯色結(jié)果。三、實驗材料免疫膠體金試紙條流感病毒（H9亞型）的樣品移液器槍頭取待檢樣品（H9AIV)50-100μL，加入到樣品孔中5~10min，觀察在檢測線和質(zhì)控線處是否有沉淀線出現(xiàn)。檢測方法以單克隆雙抗體夾心法為例。

1.免疫金標(biāo)記的AVI單抗2.AIV單抗（不同單抗株）3.（羊/兔）抗小鼠IgG四、操作步驟陰性樣品則無反應(yīng)線條，而僅顯示質(zhì)控線條。H9亞型AIV尿囊液陽性結(jié)果陰性對照陰性對照H5ＡIV尿囊液陽性結(jié)果膠體金快速診斷技術(shù)的特點

1.簡捷快速：操作簡單，一般只要5~10min就會出結(jié)果，而其它方法如ELISA需要1~2h，PCR需要時間更長。2.結(jié)果易于判定：陰、陽性呈色很明顯，肉眼很容易判斷。3.特異性好：因為該技術(shù)大多用于單克隆抗體標(biāo)記，這決定了它具有很好的特異性。1.病毒性疾?。簜魅拘苑ㄊ夏也?、禽流感、新城疫、犬細(xì)小病毒、豬瘟等。2.寄生蟲疾?。貉?/p>