實驗動物與動物實驗的生物安全

實驗動物與動物實驗的生物安全

第一節(jié)生物安全概述一、生物技術、生物危害和生物安全

生物技術：一切利用有機體的操作技術都可稱為生物技術，其中，現代生物技術是以基因工程為核心，綜合利用現代生物學、化學和工程學的手段，直接或間接地利用生物體、生命體系和生命活動過程生產有用物質的一門高級應用技術科學。轉基因實驗動物的育成是現代生物技術在實驗動物領域的成功運用。生物危害：是指包括病毒、細菌、真菌、原蟲、昆蟲和其他有害動植物等在內的生物因素對人類及其生存環(huán)境的危害。生物因素廣泛存在于環(huán)境和各種生物體內，具有強大的變異能力以適應環(huán)境，例如產生抗藥性的細菌、昆蟲和鼠類等。人類有意識地使用現代生物技術進行科研和生產時，也可能產生以目前的科技知識水平無法預見的后果，從而危害人類健康、破壞生態(tài)平衡、污染自然環(huán)境等。生物安全：

狹義的生物安全是指防范由現代生物技術的開發(fā)和應用(主要是轉基因技術)所產生的負面影響，即對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人體健康可能構成的危險或潛在風險。廣義的生物安全包括更廣泛的內容，大致分為3方面：①人類的健康安全；②人類賴以生存的農業(yè)生物的安全；③與人類生活息息相關的生物多樣性即環(huán)境生物安全。生物安全技術涉及生物資源保護、勞動保護、環(huán)境保護和醫(yī)藥食品等方面，主要解決生物技術從研究、開發(fā)、生產到實際應用整個過程中的安全性問題，使危害性降低到可以接受的程度，以保障人類的健康和環(huán)境的安全。

二、生物安全的基本內容(一)生物安全原理生物安全的原理包括生物安全分級和生物安全屏障兩方面。生物安全分級是對生物危害進行正確評估的依據，生物安全屏障則是對生物危害進行有效遏制的方法。生物安全的最終目的，就是通過正確的評估和適當的防范，在保障人類健康和環(huán)境安全的同時，推動生物技術的發(fā)展，使之為人類創(chuàng)造最大利益。(二)病原微生物危害性的分級在應用實驗動物開展生物醫(yī)學研究時，工作人員面對的主要生物危害是來自動物或實驗室的各類病原微生物。按照病原微生物對人或動物致病性的強度進行分類，既是生物安全評估的依據，也是制定生物危害防制對策的根據。世界衛(wèi)生組織(WHO)對感染性微生物的危害程度分級

(三)生物安全等級BSL-1：非已知會導致疾病的物質。BSL-2：與人類疾病相關的物質。BSL-3：與人類疾病相關并且與氣溶膠傳播潛力有關的本地的外來的物質。

BSL-4：危險的/外來的具有生命威脅特征的物質。（四）生物安全實驗室的分級一級：對人體和環(huán)境危害較低，不會引發(fā)健康成人疾病。二級：對人體和環(huán)境有中等危害或具有潛在危險的致病因子。三級：主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴重的甚至是致命疾病的致病因子。通常有預防治療措施。四級：對人體有高度危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明的微生物。尚無預防治療措施。（五）為何要講生物安全防護不注意安全和容易導致意外事故

針刺傷（穿刺） 碎玻璃刺傷（不穿鞋，刺傷手） 載玻片割傷（顯微鏡下計數細胞） 濺入口腔，濺入眼睛（分裝/凍存樣品） 離心管破裂，滑倒跌傷，酒精燈損壞 負壓泵接管損傷，過濾分裝毒種過程(六)生物安全實驗室的安全防護：1、對實驗者2、對他人3、對周圍環(huán)境4、對樣品（七）發(fā)生事故后可以造成嚴重危害1、安全事故受傷者感染發(fā)病死亡2、受傷人員的生活及工作環(huán)境壓力3、工作隊伍的穩(wěn)定性降低 三、在實驗動物和動物實驗研究中引入生物安全的必要性1、動物實驗動物是醫(yī)學生物學實驗研究的第1要素。使用微生物學質量不合格的動物，常常會引入各類人獸共患病和動物烈性傳染病的病原體，從而在繁育和實驗中通過各種途徑感染工作人員和其他動物。在使用野生動物的研究中，一些野生動物攜帶對其自身不致病，但對人卻有致命危害的病原微生物，如來源于靈長類和嚙齒類野生動物的埃博拉(Ebola)病毒，由于人類對這些微生物所知甚少，故而缺乏有效的防范手段，容易導致嚴重的感染事故。2、設施設備設施和設備是醫(yī)學生物學實驗研究的第2要素。沒有與實驗動物生產和實驗研究的要求相適應的設施，污染就會擴散。對設施設備的使用不當、維護和檢查不力等也是導致生物危害因素泄漏的重要原因。

3、操作由不當操作引發(fā)的生物危害具有一定隱蔽性，其后果可能在相當長一段時間后才顯露出來，故此難以追查當時究竟是誰、什么樣的操作引發(fā)了事故。在實際工作中，由于危害因素的蓄積和表達需要一定時間，因此與短期實驗研究(幾天或幾周)相比，長期的實驗(數月以上)或連續(xù)的動物繁殖生產過程中這類問題較多發(fā)生。4、基因安全隨著現代生物技術的發(fā)展，在基因水平開展對實驗動物及動物實驗的研究方興未艾，轉基因和克隆動物的相繼問世使“基因安全”隨之成為新的生物安全問題，由于人類對基因工程技術的使用與控制尚不成熟，對基因工程產物的認識受到現有科學技術水平的限制，這些新技術、新物種的潛在危害，陛仍需經過一定的時間才能被人們意識到。如若對這些新技術、新物種控制不當，極可能造成對現有生態(tài)和遺傳平衡的破壞，進而給人類的生存帶來無法估計的嚴重影響。

所以，在進行實驗動物及動物實驗研究，尤其是運用各項新技術、新方法時，必須充分認識其中可能存在的危害性，牢固樹立生物安全的概念，采取切實有效的措施進行防范，從而確保研究的順利開展和保護人類、物種及環(huán)境的安全。第二節(jié)實驗動物和動物實驗研究中的生物危害一、對實驗動物工作者個人的危害實驗動物和動物實驗研究中對個人的生物危害主要表現為各種人獸共患病及實驗性病原體的感染和傳播。由于飼喂、換籠及各類實驗操作需要與動物密切接觸，從事動物實驗和動物飼育的人員成為這類危害的首要受害者，其中，動物實驗人員因為有更多機會接觸實驗狀態(tài)下的非健康動物，受到感染的概率高于動物飼育人員，感染的嚴重程度則受到病原體的量、對人體的致病性和感染途徑三個方面因素的影響。(一)人獸共患病

(二)實驗性病原體

(三)引起感染的途徑

1、經呼吸道感染

2、經口感染

3、創(chuàng)傷及黏膜接觸感染

4、昆蟲媒介二、對實驗動物的危害實驗動物感染人獸共患病或動物傳染病后，可引起非特異性死亡，或干擾實驗結果，動物烈性傳染病還會導致大批動物死亡，造成嚴重后果。實驗動物繁育及動物實驗設施設備的不適當和管理不善、防范不力，常導致實驗動物受到外界環(huán)境中病原體的污染，如開放系統(tǒng)中飼養(yǎng)的動物常常因諸如野貓、野鼠及昆蟲等的進入而遭外來病原感染或發(fā)生交叉感染，引起疾病和死亡。這樣的情況在管理不善的屏障系統(tǒng)中同樣會發(fā)生。對不同實驗的動物管理混亂，隔離不當，或感染動物逃逸等也會導致動物間的交叉感染。在諸多因素中，人是實驗室污染的最大來源，人的皮膚、黏膜等處經常存在很多微生物。此外，患皮膚病或呼吸道疾病的工作人員在操作時，也會將病原體傳染給實驗動物。其他因素如飼育密度過高、環(huán)境控制不達標、實驗操作等也會直接或間接引發(fā)生物危害。三、對實驗動物設施周邊環(huán)境的危害實驗動物設施內的危害因素向外擴散，就會引起設施周邊環(huán)境的污染，甚至導致這些區(qū)域的生物災害，引發(fā)社會安全問題。對環(huán)境的危害多來自動物飼育和實驗中的“三廢”，即污染的空氣、動物尸體、污染墊料、注射器、手套、污水等。除了對“三廢”的處理不當外，有些擴散是人為的，如將混有動物排泄物的墊料作為肥料用于生產農作物，或用動物尸體飼喂寵物。

此外，管理疏漏導致實驗動物的逃逸，或實驗動物未經完全處死即棄置，待其蘇醒后逃逸，亦可將實驗室內的病原或有害物質散布到外界。四、克隆及轉基因動物的潛在生物危害克隆動物和轉基因動物在生物醫(yī)學研究方面具有廣闊的應用前景，但同時也存在許多安全性問題。例如轉基因動物的器官移植可能增加人獸共患病的傳播機會，具有某些優(yōu)勢性狀的轉基因動物釋放到自然界，會對生態(tài)平衡及物種多樣性造成壓力等。轉基因動物在生理、行為、代謝以及對理化和生物因子的耐受力等方面的新特性，以及轉基因動物所應用的基因重組技術，都可能產生一些超過人類防范能力的危害因素，對這些因素的增殖一旦失控，就可能帶來嚴重后果。第三節(jié)實驗動物與動物實驗中生物危害的防制一、防制的一般原則

生物危害的防制，須依據研究工作所涉及生物安全的等級，設定不同的生物安全水平，某一生物安全水平由生物技術機構的實踐和技術、安全設備以及所擁有的設施幾方面的要求共同組成，以適應對特定生物進行安全操作和處理。世界衛(wèi)生組織(WHO)對實驗室的生物安全等級劃分以及不同級別實驗室的一般要求如表10-4所示。二、加強羽對人的生塑物安全教尸育作為科愈學研究減活動的辮主體，棚從業(yè)人丘員的生碰物安全拍意識直蹦接影響嗽生物安橡全管理駝目標的袖實現，競表現在拔對各項亂操作及宣管理規(guī)州程的遵努守、對往動物及道各類設鵲施設備可的正確承選擇和祖使用、遺對各類顫隱患的漏防范等句方面其附中，過勁分信任們并單純騎依賴安姓全設施狐往往會愉淡化人稀的安全康意識，駁使操作防人員忽鎖視安全姻操作規(guī)使范，也刪是導致肥意外傷礦害事故饞的一大夏原因。三、使用鎮(zhèn)標準化合瓦格的實驗障動物在實驗動傷物飼育及警實驗的過圓程中，動殺物本身所搞攜帶的人酒獸共患病娛及動物傳專染病的病何原體可通若過各種途屯徑在動物博飼養(yǎng)室內課播散，危尸害操作人享員和動物仍的安全。辯因此，推勿廣實驗動特物的標準奶化，杜絕心帶有各類誤生物安全糾問題的“歌非標”動獄物進入實梅驗室，是盜對生物危懶害源頭的危遏制。四、與訪研究工奶作相適嫁宜的動崗物設施飽和管理(一)實絞驗動物繁躺育生產及域動物實驗勻環(huán)境根據環(huán)梢境條件鏟的不同淘，可將現實驗動宅物繁育義生產和敏動物實濃驗設施骨劃分為哥三大類伐：普通落環(huán)境、出屏障環(huán)幟境和隔牌離環(huán)境榜。1．普通累環(huán)境極符合動物欣居住的基孟本要求，腸不能完全慨控制傳染兼因子，適咸用于飼塞育教學等扛用途的普象通級實驗鄙動物。2．屏演障環(huán)境砌適滾用于飼摧育清潔景級實驗哨動物及燒無特定巖病原體奏(SP咽P)實墓驗動罷物，該緣瑞環(huán)境嚴啦格控制淺人員、察物品和耕環(huán)境空袍氣的進盯出。3．隔離待環(huán)境懷采用無菌但隔離裝置險以保存無羽菌或無外身來污染動禍物。隔離媽裝置內的戴空氣、飼炮料、水、棗墊料和設谷備均為無研菌，動物吹和物料的顆動態(tài)傳遞碑須經特殊灶的傳遞系盒統(tǒng)，該系響統(tǒng)既能保泄證與環(huán)境段的絕對隔阿離，又能盯滿足轉運狂動物時保輪持內環(huán)境衫一致。該團設施適用魚于飼育無巖特定病原炎體(sp賤ecif拉icp蠶atho早gen名free謠，SPF洪)、悉生兼(gno矮tobi榮otic補，GN)犯及無菌(劃germ石fre第e，GF難)實驗動賭物。(二)插不同生宅物安全董等級的焦動物實鳴驗室設為置及管董理根據研究師涉及的病糕原微生物礦的分類等假級，將動摧物實驗室績劃分為與心之對應的判4等，殼即P1、渴P2、P繼3、P4傲實驗室，泡分別對應難我國病原咱微生物危醋險度第4嚷、3、2山、1級。五、具備分規(guī)范、嫻醉熟的操作器技術(一)與鳴動物接觸疾的有關技冊術1、避免明操作中氣顯溶膠的產狼生氣楚溶膠是以經膠體狀態(tài)桿懸浮在大馬氣中的液碑體或固體傳微粒，其扯直徑一般誘為1-5輔pm，是袋最適宜引停起感染的混尺寸。因此在飼條育、給藥脖等工作中蓋，必須注事意輕柔地鉛抓取、固辣定動物，即保持室內陡安靜，避益免突發(fā)的受聲響和動掉作驚擾動以物，禁止聚在飼養(yǎng)室飯內清理更掀換下的籠濾具和墊料相等。2、避免處損傷不適當社的捕捉畫極易導趁致被動敬物咬傷魔、抓傷眨，動物悔實驗特怒別是手優(yōu)術過程鞏中，操潤作人員卷可能因庫動物的毒掙扎、翼操作技轎術不熟蜘練、畏退懼等因禁素被針陰尖、刀弟、剪等待器械所踩傷，外忠傷往往峰成為進糾一步感輛染的原響因。因患此操作籌人員必鐵須熟練呆掌握實靈驗動物手的捕捉強固定方跪法和各串類常用尼的實驗沃技術，浩使用袖芽套、手聞套等個趴人防護榆用品，毀并借助撓合適的漁捕捉及谷固定設香備和其炕他手段森以防范災此類危襲害的發(fā)細生。3、動墳物剖檢爺中的注魚意事項剖檢動物摘時，即便脂不是感染牙性的實驗糾，也無確在定動物血哭液、體液串、臟器中萄有無繁殖彈的病原體懶，因此嚴胃禁在動物蠻飼養(yǎng)室內采無任何防取止擴散措詳施的情形狂下進行剖丙檢，而應挺到專門的叢實驗室或稅在專門的今設施內進仍行。剖檢時美，應將殖動物固擔定板放扎在盤子母中，盡乞量減少慰對工作合面和作朋業(yè)空間浩的污染狼機會。剖檢前刃可將動慘物放人塑消毒液騙中浸泡巾一下或則用乙醇梅擦拭動帳物體表陵，以防稅止動物察體毛飛媽揚，同吵時可作倦為無菌猾取材前番的消毒伸。剖檢后肯應及時都清理并啊消毒操餃作區(qū)域喊，各種漆器械、丘材料和摸廢棄物累按規(guī)定燈處理或避經無害鑄化后棄鑒置。(二)其懂他技術與屋規(guī)范1、對蒸動物的樹管理熟知動輪物的正甘常外觀金及行為扎，對動狐物出現驚的異常上體征能障及時發(fā)姨現并采峽取措施佳，從而抵爭取控差制危害垃的時機滑；經常檢遙查關養(yǎng)來動物的背籠器具異及設施囑，防止造動物逃講逸或設漏施對動刪物造成廊傷害；對出逃在怨外的動物恒，即使能嶄夠確認其較來源，一睬般也不應產再放回原爸處，而應吼視實際晴栗況作隔離裹觀察或處攤死丟棄等南，尤其嚴膽禁任意放醒人外觀相乞同的動物大中繼續(xù)飼狐養(yǎng)和實驗寶；實驗中須張避免搞錯劫動物的分塑組，因此標要養(yǎng)成做在各類標志侄的良好科補研習慣；顆防止將外畫觀相似的胖不同品系訴動物混淆判等。2．遵循膠《微生物樂學實驗技香術規(guī)范》旋(GMT豆)該規(guī)范包用括在實踐干中證明行王之有效的遍生物安全祖技術，涉籮及實驗室布標本安全薦處置技術服、防止感包染性材料襯擴散技術銳等多方面鐘。進行實容驗研究前但應接受有刮關的技術緩培訓以熟憤練掌握這木些技術。六、良好亦的衛(wèi)生習驕慣及正確偵的個人防鐵護工作人員汗每次接觸芒動物或生安物組織等罪以及結束拐飼養(yǎng)觀察件離開前，雨必須徹底寒洗手。工頂作中必須近正確穿戴警規(guī)定的服弱裝，戴好況口罩、手浙套、帽子罰等，諸如鍵戴口罩只訂掩住嘴，忘而把鼻子妥露在外的塔錯誤穿著考方法必須依糾正。不琴用手觸摸歲面部、眼恩、口、鼻君等部位，揉禁止在工敏作區(qū)進食項、飲水、遍吸煙或存淺放食物。濫離開工作般區(qū)域應脫蹲下防護服蝕，工作服訓應定期清辨洗消毒，筋一次性防傷護用品不柳得重復使漂用。七、正確繩處理生物調危害“三租廢”1、廢徑氣箏動物飼捧養(yǎng)室、界實驗室呈排風等米。2、廢液推動物必糞尿、籠煮具洗滌污爪水、傳染指性材料廢哥水，重組雨DNA實寧驗室廢棄真的含有生捉物危害的份廢水等。3、固體悠物料報各種實驗木操作器材才以及動物忽及其局部渴組織、污析染墊料等涌。處理的方果法有運用剪化學藥劑筍的化學處刃理、使用忌過濾、高猜溫滅菌焚樓燒等手段良的物理處刪理以及生型物處理。八、實驗儉室安全防病護措施：１級屏障：個人防茂護，室內防護呆裝置２級屏障匆：建筑嚴格的實禿驗室管理瓦制度標準操草作規(guī)程燭（SO朋P）一、個人何防護安全意竊識，個階人保健漸：容易求疏忽，銳嫌麻煩朝等了解工作對性質及病齊原特點：狂不同病原蔽體熟悉實或驗室及綢儀器設友備：嚴獄格執(zhí)行買SOP防護用品緊：防護服昏、手套、氣口罩、防超護鏡、洗牧眼器等良好的僻操作習末慣：嚴茫格執(zhí)行剝各項制雨度：避捐免形式夫主義1、生物患安全柜主要用蹈于保護驚實驗工右作人員唐，避免恐吸入工猴作中可抓能產生脊的浮塵柿。原則扁是空氣張被抽離湖工作區(qū)穿，然后巴通過一往臺高效等顆?？站貧?H穿EPA豪)濾器奏排入大背氣。CO2培養(yǎng)箱使?jié)M用注意事章項（1）組壞織培養(yǎng)皿響需放在塑答料盤內進好行孵育。（2）扶培養(yǎng)瓶扔和碟不斥能疊放滅。（3）哄定期清村潔和消堪毒。（4）防逝止漏氣（夜CO2）農。（5）中專人管抬理，每柄天檢查醒CO2羅，管道頓，溫度險等。（6）間避免在棚儀器上閘堆積物脖品。離心機：珍最易導致鮮污染的設容備！（1）攻在離心確感染性瓣材料時面要把其湊放在密獅封的離徒心桶內睬。（2）離短心桶只能孕在EPC集內打開。（3）撈離心桶粥在使用際后要消皮毒其表饅面。（4）把若離心炮桶需要該平衡，躁應在E棟PC中愿進行。（5）敢如果懷炒疑離心獎機內有喂破損情舊況發(fā)生炕，需要騎等轉頭甩停止3股0分鐘拖后再進鞠行消毒血。（6）斤避免使百用質量盛差的離漿心管。（7）擴專人定豬期維修票、保養(yǎng)趣、檢定艇。（8）煮儀器放窄置位置姑要平，肌可承重宮，儀器匆上避免戲放置物石品。液氮罐（1）要南小心避免睡直接接觸夏液氮，當唉把樣品管紹移出液氮談罐時要小抗心其會爆氧裂。（2）選權用優(yōu)質凍陣存管。禁糖止用玻璃若管保存樣狹品。（3）天存取樣猜品時需辮注意防黨護。應鹽戴防護迅鏡，手尿套，口飲罩，穿緣瑞防護服蜜。高壓滅菌矩器（1）定險期檢查排壓水桶。（2）注踢意防護，把防止燙傷毒，待溫度南降下后再櫻開蓋。（3）涼一次高兆壓物不毯宜過多沸。（4）石禁止器赴皿蓋蓋偉高壓。顯微鏡（1）注嘆意安全使菜用載玻片（2）別按正確挨方向緩縣慢調解隔鏡頭（3）一厚次觀察樣采品不宜過鍛多（4）哥注意勞葡逸結合冰箱（1）咐安全存津放樣品（2）專雷人管理制耳度（3）定莫期檢查（4）候相對分銅區(qū)二、實其驗室管阿理程序傷及制度1、生征物安全需實驗室凈管理程挨序成立生物閥安全委員缸會躍編寫生物喂安全手冊編寫各片種標準受操作程贈序（Ｓ拾ＯＰ）谷人員折培訓2、實驗利室管理制虛度生物安忍全手冊1、生物蔥安全委員宿會名單、傍職責、人隱員分工及魂工作機制2、微生覽物危害評抽估：針對炒研究的病饑原體的危梁害3、實醒驗室管返理制度4、毒種棉及樣品管乳理制度5、實驗抱室使用和腦操作規(guī)程6、實驗雀微生物操鋪作規(guī)程7、實捏驗室事板故處理概及報告讀規(guī)程8、工作途人員（含懼本人簽字分）實驗室微準入登記保表9、實臂驗室使駛用登記盾表10、實篇驗室內儀返器設備清食單及設備專安全注意惰事項11、儀罰器設備使談用登記表12、棕工作人猛員培訓嚷記錄13、節(jié)工作人養(yǎng)員體檢見（含血睜清檢查場）和免退疫接種狼登記表一級生物聾安全實驗謊室管理制補度1、禁止非工今作人員進玩入，參觀尊實驗室堪等特殊痕情況須靜經實驗防室負責雜人批準往。2、接建觸微生滾物或含寺有微生傳物的物守品后，繩脫掉手漠套后和墨離開實呈驗室前洗手。3、禁止在實驗室飲食、化妝釣，吸煙隙、禁止口吸液體。４、每天消毒臺面，有裂活性物質塊濺出應隨敘時消毒。５、所有勿物品運出莊實驗室之辟前要滅活。６、制嶄定有效防鼠防居蟲措施鬼。二級生物弱安全實驗攝室制度１、同一券級實驗室風制度２、實驗咸室入口處顫貼上生物安全紛標志，注明報實驗室賽生物安嫌全級別報，負責餓人姓名椅，負責辰人姓名省和電話確，需要旱接種的圣免疫種佩類，進莊入實驗牲室的特膜殊要求伯和離開夠的程序畜。３、正在塘進行感染物性試驗時禁止他人怕進入，或經敢負責人叫同意后顛方可進盟入。４、工娘作人員筍接受必歡要的免疫接蝴種，免疫綁耐受或斃正在進允行免疫根抑制劑法治療的熔病人須翼經同意仿方可進蝦入工作踩。５、必要