2014-9-神經(jīng)生物學(xué)實驗報告-動物腦的立體定位技術(shù)

腦立體定位技術(shù)及切片制備一、實驗?zāi)康耐ㄟ^本實驗，了解動物腦立體定位及切片制備，并基本掌握動物腦立體定位技術(shù)及切片制作。二、實驗設(shè)備及要求實驗分兩部分：Ⅰ大鼠腦立體定位（紋狀體）[器材和藥品]立體定位儀、10％水合氯醛溶液、1ml注射器、手術(shù)刀、粗剪刀、組織剪、止血鉗、牙科鉆或骨鉆、金屬定位針、脫脂棉花、3%雙氧水（H2O2）、生理鹽水、75%酒精，墨水。[實驗動物]雄性SD大鼠（200-300g）Ⅱ大鼠腦切片制備[器材和藥品]器械：手術(shù)刀、組織剪、止血鉗、咬骨鉗、無齒鉗、5ml注射器、6號針頭、灌注瓶、恒冷切片機液體：4％多聚甲醛溶液三、實驗步驟Ⅰ大鼠腦立體定位（紋狀體）1.立體定位儀的一般校驗2.動物麻醉：動物稱重后，水合氯醛溶液按3.6ml/kg作腹腔注射麻醉。3.

頭部固定：（1）插入耳棒：先將一側(cè)耳棒輕輕插入外耳道，碰到骨性外耳道底后固定耳棒，繼之同樣插入固定另一耳棒。檢查大鼠頭部固定是否穩(wěn)定，松斜，兩側(cè)耳棒刻度是否對稱，輕移耳棒使兩側(cè)刻度一致頭位完全居中，再次固定耳棒。三個標(biāo)準(zhǔn)檢測是否固定成功：鼻對正中，頭部不動，提尾不掉。（2）固定上頜：將大鼠的上門牙塞進上齒固定板的槽內(nèi)，旋緊螺絲。從各方向推壓動物頭部，均不應(yīng)出現(xiàn)移動。通過定位針的測量調(diào)節(jié)前后囟在同一矢狀線上，并使前后囟在同一水平線上。4.開顱：剪去頭部的毛，用75%酒精棉球作頭部皮膚的消毒，沿矢狀縫作切口，剝離筋膜及肌肉，推開骨膜，并用3%雙氧水洗凈，用干棉球擦拭，暴露骨縫，止血。2.切片切片刀的安置：刀的刃面與組織切面之間應(yīng)有一定的角度，稱為余隙角a。余隙角一般在2~5°組織冷凍：冷凍適度，過冷可致切片橫向斷裂、冷凍不足，切片容易厚薄不勻切片：動作連貫四、實驗結(jié)果了解了腦立體定位儀及切片制備基礎(chǔ)知識，并在團隊合作下完成了大鼠腦立體定位（紋狀體），以染料定位，以組學(xué)鑒定（切片）觀察定位結(jié)果。本次試驗定位空間上深度稍微欠妥，染料著色正常，切片制備正常。五、討論分析立體定位技術(shù)指利用顱骨的標(biāo)志/參考點，確定皮層下某些神經(jīng)結(jié)構(gòu)的位置，對腦進行定向的刺激、破壞、藥物注射、引導(dǎo)電位等研究。為此，掌握這門技術(shù)對于日后研究工作有非常大的幫助。本次實驗注意點有如下：①大鼠固定：實驗開始前，我們一直嘗試用耳桿進行固定，但始終不能對齊。最后在老師的指導(dǎo)下，我們使用了耳桿適配器，很輕松的便完成了固定。②游標(biāo)卡尺在使用時一定注意記錄讀數(shù)，便于后期再次定位。③注射染料時，速度一定要慢，給予組織充分的時間去吸收，不然極易導(dǎo)致染料冒出。④微量注射針刺入大腦時，應(yīng)注以針尖中后段為準(zhǔn)，避免插入深度不足。⑤取大腦時，為了不傷及腦組織，應(yīng)從脊髓處入手；并在基本暴露大腦后，用鉗子一并取出腦組織。⑥切片時，鑷子等工具使用完后應(yīng)放回操作箱中保溫；且切片取出后，應(yīng)迅速將切片放入指定位置，以免融化。此外，本次試驗也有一些小的疑惑需要進行討論：①介于大鼠露骨較脆，可否不進行鉆孔直接通過微量注射針打入染料。此法可以避免因移動坐標(biāo)尺導(dǎo)致的誤差，同時也可以保證顱骨處于封閉狀態(tài)避免染料冒